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1、1,8 动物克隆技术的研究现状及发展方向,2,8 动物克隆技术的研究现状及发展方向,8.1 克隆技术概述8.2 哺乳动物克隆的基本过程8.3 动物克隆的影响因素 8.4 克隆技术存在的问题 8.5 核移植后核重编程研究进展8.6 动物克隆技术的发展方向,3,8.1 克隆技术概述,一、什么是克隆技术 二、克隆技术的研究历史三、克隆技术的意义四、 动物克隆技术的分类,4,一、什么是克隆技术,克隆，是Clone 的译音，意为无性繁殖。 英语“Clone”一词起源于希腊文“Klone”，原意是用“嫩枝”或“插条”繁殖。如今，克隆是指生物体通过体细胞进行的无性繁殖，以及由无性繁殖形成的基因型完全相同的后
2、代个体组成的种群，这种来自一个祖先的无性繁殖的后代群体也叫“无性繁殖系”，简称无性系。,5,动物克隆指不通过精子和卵子受精过程而获得与亲本具有相同遗传物质的后代的过程。克隆也可以理解为复制、拷贝，就是从原型中产生出同样的复制品，它的外表及遗传基因与原型完全相同。如由“亲本”序列产生的 DNA 序列等等,6,在自然界，有不少植物具有先天的克隆本能，如番薯、马铃薯、玫瑰等插枝繁殖的植物。而动物的克隆技术，则经历了由胚胎细胞到体细胞的发展过程。克隆技术即无性繁殖技术。10年前报道的克隆羊多莉（Dolly），就是首次利用这种技术克隆成功的，它在生物工程史上揭开了新的一页。,7,二、克隆技术的研究历史,
3、1938年,德国科家Spemman提出了将胚胎细胞核移植到去核卵母细胞中的构想。1952年,英国的Briggs和King利用蛙原肠胚以前的细胞核与去核蛙卵构建的重构胚克隆获得了成蛙;同时,他们还发现其原肠以后的细胞只能支持重构胚发育到一定程度,并据此认为胚胎细胞发育的能力,会随着胚胎的发育逐步下降。,8,1962年,英国剑桥大学的Gurdon用囊胚细胞移植的方法获得了可繁殖的爪蟾,并再次证明成熟蛙已分化的细胞核,只能支持发育到蝌蚪,而不能发育成蛙。1963年,童第周等对鱼类胚胎细胞进行核移植技术,获得成功。哺乳动物胚胎细胞核移植研究的最初成果在1981年取得，卡尔.伊尔门泽(Illmensee
4、)和彼得.霍佩(Hoppe)用小鼠囊胚的内细胞团细胞经核移植得到发育正常的小鼠。但其结果未被其他实验室重复出来。,9,1983年,美国科学家McGrath和Solter利用显微操作技术结合电融合方法得到了克隆小鼠。可以说,这一工作真正拉开了哺乳动物克隆的序幕。 1986年,英国的Willadsen报道用早期的胚胎细胞克隆出第一只羊。此后,其他科学家相继成功地克隆出牛(1987)、兔(1988)、猪(1989)。 1996年,Campbell等报告用培养传代的羊胚盘细胞经无血清饥饿法使其进入G0期,移入卵母细胞后可正常发育到产仔。,10,1997年2月,英国罗斯林研究所的Wilmut等利用5岁绵
5、羊的乳腺上皮细胞进行核移植试验,并成功地获得了世界上第一只体细胞克隆绵羊“多莉(Dolly)”,这是克隆技术的一个新的里程碑。Wilmut博士等建立的一整套绵羊体细胞移植程序,如恢复体细胞核全能性的“血清饥饿法”、体细胞传代阶段的确定以及体细胞克隆后代与亲本核供体间的DNA微卫星分析等技术,成为全世界同行公认的哺乳动物细胞核移植的基本程序。,11,12,多莉和威尔穆特,13,此后,他们又用绵羊的胚胎细胞进行核移植实验,成功地获得了整合有人凝血因子XI的转基因绵羊,取名“波莉(Polly)”，这样波莉成年后就可能在乳汁中大量表达昂贵的医用人凝血因子XI。1998年4月13日克隆羊多莉和公羊戴维进
6、行正常交配的后代女儿邦尼诞生。邦尼的诞生表明,克隆动物并没有丧失生殖能力。,14,多莉和邦妮,15,1998年5月,美国科学家利用胎儿成纤维细胞克隆3头牛,而且携带了转移的基因。1998年7月Wakayama等成功地用小鼠的卵丘细胞克隆和再克隆出小鼠,这是人类第一次用克隆动物再克隆出克隆动物。,16,这只克隆猴名叫“泰特拉”,2000年1月，一只克隆猕猴在美国俄勒冈地区灵长类动物研究中心呱呱坠地。这是全世界第一次成功地克隆灵长类动物。这意味着克隆人本身已没有技术障碍。,17,2001年1月,日本科学家用克隆牛的体细胞克隆的第二代克隆牛通过剖腹产而降生。这头克隆牛所使用的体细胞来自1999年2月
7、初出生的第一代雄性克隆牛的耳细胞。,18,2001年3月,英国产生克隆绵羊“多莉”的公司成功培育出5只克隆小猪,期望用于人体器官移植的研究。五只克隆猪全为雌性，最大的一只为Millie，取意于单词millenium（千禧）。,19,2001年，美国得克萨斯农工大学培育的第一只克隆猫CC,大老鼠难以复制，2003年法国复制的名为“拉尔夫（Ralph）”的老鼠是第一只。,20,克隆骡子：2003年5月5日，一头名为“Idaho Gem”的骡子在母驴子宫中经过346天的正常妊娠期后降生了。 Idaho Gem是赛骡世界冠军Taz的兄弟。,具体过程是：美国爱达荷大学的科学家让Taz的双亲再次杂交，然后
8、从45天的胎儿中提取出体细胞，将其核移植到去核的马卵细胞中，随后将卵细胞放入母驴子宫内。,21,2003年5月23日，美国得州农业机械大学培育出世界第一只克隆白尾鹿，名字叫“杜威（Dewey）”。得州农业机械大学也因此成为了全球第一个克隆出五个物种的学术机构，他们此前克隆过牛、山羊、猪和猫。,22,克隆马及其“母亲兼姐姐”,2003年5月底意大利克雷莫纳再生技术实验室的研究人员克隆出了第一只驮马。 2004年，美国也克隆出马。,23,克隆非洲野猫 ：2003年8月6号，奥特朋濒危动物研究中心的研究人员通过单体克隆技术首次成功克隆出一只非洲野猫，取名蒂托。11月15日，科学家们又成功地克隆出另外
9、两只非洲野猫。,24,2004年，就职于美国依阿华大学的李子义教授成功培育出了世界首批“克隆雪貂”，取名为“利比（Libby）”和“利丽（Lilly）” 。,25,2005年，世界首例克隆狗在韩国诞生。韩国汉城国立大学兽医学院的科学家利用干细胞移植手术成功培育出克隆狗。这只雄性的阿富汗猎犬小宝宝名叫斯奴比，它出生在2005年4月24日。,26,首尔大学教授李柄千和申南植领导的研究小组于2005年10月18日和26日先后获得了两头体重分别为430克和530克的雌性克隆狼。两只克隆狼的名字分别为Snuwolf和Snuwolfy。这是用首尔大学的英文缩写snu和狼的英文词Wolf组合而成。被克隆的灰
10、狼是韩国环境部指定的1级野生保护动物。到目前为止，韩国已经有20年没发现野生灰狼。,27,28,我国的克隆技术也毫不逊色,60年代，生物学家童第周对金鱼、鲫鱼进行细胞核移植。1978年又成功地进行了黑斑蛙的克隆试验，他将黑斑蛙的红细胞的核移入事先除去了核的黑斑蛙卵中，这种换核卵最后长成能在水中自由游泳的蝌蚪。,29,1979年春，中国科学院武汉水生生物研究所的科学家把鲫鱼囊胚细胞核移放到鲫鱼卵细胞内，在189个这种换核卵细胞中，最终只有一条幼鱼度过难关，经过80多天培养后长成8厘米长的克隆鲫鱼。,30,1990年5月，西北农业大学畜牧所克隆一只山羊。1992年，江苏农科院克隆一只兔子。 199
11、3年，中科院发育生物学研究所与扬州大学农学院合作，克隆一只山羊。1995年7月，华南师大与广西农大合作，克隆一头奶牛、黄牛杂种牛。1995年10月，西北农大克隆6头猪。,31,1996年12月，湖南医大克隆6只老鼠。同年中国农科院畜牧所克隆一头公牛犊。1997年3月，中国科学院动物研究所研究员陈大元率先提出了克隆大熊猫的设想。1999年，陈大元领导的小组将大熊猫的体细胞植入去核后的兔卵细胞中，成功地培育出了大熊猫的早期胚胎，克隆大熊猫面临的两个关键问题中的一个已经解决。,32,1999年10月和2000年5月，我国扬州大学与中科院发育所合作，用携带外源基因的体细胞克隆出转基因的山羊。2000年
12、，我国西北农业大学用体细胞克隆出山羊。 2002年，中国科学院动物所与山东曹县合作，自主完成了我国首批成年体细胞克隆牛群体。后来与新疆金牛公司合作，与北京锦绣大地合作都成功重复出了克隆牛群体。,33,2003年,李宁等培育了10头体细胞克隆牛，其中包括两头转基因体细胞克隆牛：“乐娃”、“岩娃”。“乐娃”转入了绿色荧光蛋白基因,标志着我国在转基因体细胞克隆的新突破。“岩娃”创造了两个世界首次：首次获得了转有人岩藻糖转移酶基因的转基因体细胞克隆牛；首次获得了在同一头牛中转有3种外源基因（绿色荧光蛋白基因、人岩藻糖转移酶基因和新霉素抗性基因）的转基因体细胞克隆牛，这标志着我国转基因体细胞克隆牛的生产
13、技术体系已经成熟。2005年，中国农大首只用胎儿体细胞克隆猪成功。,34,2009年2月2日山东省干细胞工程技术研究中心宣布，由这个中心李建远教授率领的科研团队，攻克人类胚胎克隆技术，成功克隆出5枚符合国际公认技术鉴定指标的人类囊胚。这一研究成果于2009年1月27日在这一领域国际权威学术期刊CLONING AND STEM CELLS杂志网络版发表。,35,课题首席专家李建远,据介绍，此次研究者选择了健康卵细胞志愿捐献者12人，经促排卵获得135枚卵细胞，经试验最终成功获取囊胚5枚，其中，4枚囊胚的供体细胞来源于正常人皮肤纤维细胞，1枚来源于帕金森病患者外周血淋巴细胞。,36,李建元教授的研
14、究团队主要采用先进的三维立体偏振光纺锤体成像系统(对细胞无损伤)，对卵母细胞纺锤体(核DNA)精确定位后，再用微激光对卵子的透明带打孔，精确剔除卵子细胞核。,37,19382009，克隆技术从构想提出至今只有70年历史。19832009，哺乳动物的克隆仅20多年历史。,38,三、克隆技术的意义,小羊多莉是世界上第一个利用体细胞克隆成功的动物。体细胞克隆的成功可以说是生命科学发展史上的一个里程碑。它从实践上证明了高度分化的体细胞(如成纤维细胞或乳腺上皮细胞)在适当的条件下可以回复到其起始状态,即完全恢复了全能性。,39,克隆技术取得突破，给人类带来极大的好处：有利于生物遗传疾病的治疗；为优良品种
15、的培育和扩群等提供了重要途径，使畜牧业的成本降低，效率提高；利用克隆技术可以大量复制珍稀动物，挽救濒危物种，调节大自然的生态平衡，为人类造福。,40,关于体细胞克隆的争论,41,克隆动物会早衰吗,中国科学院动物所研究员陈大元指出，多莉羊的早衰比较特殊，而且多莉羊就一个，又得过关节炎、肺炎，没有其他对照，属于特殊情况，不足以用它来说明克隆动物都是短命的。有人因为克隆动物成活率低而不重视它，但是这些缺陷会随着时间推移逐步改进。,42,克隆动物会早衰吗,美籍华人科学家、康涅狄格大学教授杨向中在美国用13岁的老龄牛克隆成功，使其寿命延长，证明了克隆动物并不短命。美国ACT公司克隆的24头牛都做了牛妈妈
16、，说明克隆动物的繁殖能力没有减退。2000年，美国洛克菲勒大学的科学家宣布，他们在培育出连续6代克隆鼠后发现，克隆动物的染色体端粒不一定比正常动物更短，因而未必会早衰。这和早先有些科学家猜测端粒缩短导致早衰并不一致。,43,克隆动物会早衰吗,中国农业大学教授李宁也认为，克隆不会影响动物的寿命，多利羊的情况很特殊，科学界还达成了共识，那就是克隆不会导致衰老；早期死亡是可能的，但顺利出生、长大后就不会无故死亡。“问题就是效率太低。所以科学家还在努力。”,44,伦理道德之争,生命伦理的基本原则是: 不伤害、有利、尊重和公正。,45,支持克隆人,46,1“不让我们克隆人，就是不让我们修正我们的错误，人
17、类历史难道能够这样构造吗？”纽约时报书评2“当然应该克隆人，如果谁第一个掌握了这个技术，他就是我真正的、也是唯一的竞争对手。”比尔盖茨,支持克隆人,47,3“克隆人绝对是科学上了不起的进步，克隆技术必将创造世纪的辉煌。”麻省理工学院生命工程教授约翰布洛克4“人体商业化是人类经济活动中无与伦比的成就，毫无疑问，克隆技术的出现将为世人创造一个最为广泛和深远的市场。”英国经济学家杂志。,支持克隆人,48,反对克隆人,49,1克隆技术现在还不成熟，克隆人可能有很多先天性生理缺陷。2克隆人的身份难以认定，他们与被克隆者之间的关系无法纳入现有的伦理体系。,反对克隆人,50,3克隆技术有可能被滥用，成为恐怖
18、分子的工具。4从生物多样性上来说，大量基因结构完全相同的克隆人，可能诱发新型疾病的广泛传播，对人类的生存不利。,反对克隆人,51,2005年3月8日，第59届联合国大会批准通过联合国关于人类克隆宣言，敦促各国政府禁止一切形式的人类克隆，包括用于干细胞研究的人类胚胎克隆。这项争论4年之久的议题共有191个国家参加投票。这项没有法律约束力的宣言以84票赞成、34票反对、37票弃权获得通过。中国、英国、比利时、新加坡、法国、印度、韩国等赞成治疗性克隆的国家投了反对票，因为这些国家认为，治疗性克隆这项先进技术为治愈多种疑难杂症找到了希望，例如癌症、糖尿病等。,52,联合国关于人克隆的宣言,(a)会员国
19、应当考虑采取一切必要措施在应用生命科学方面充分保护人的生命；(b)会员国应当考虑禁止违背人类尊严和对人的生命的保护的一切形式的人的克隆；(c)会员国还应当考虑采取必要措施，禁止应用可能违背人类尊严的遗传工程技术；(d)会员国应当考虑采取措施防止在应用生命科学方面剥削妇女；(e)会员国应当考虑毫不延迟地通过并实施国内立法以落实上文(a)段至(d)段；(f)会员国也应当考虑在为包括生命科学在内的医学研究筹措资金时考虑到尤其影响到发展中国家的艾滋病毒/艾滋病、结核病和疟疾等紧迫的全球性问题。,53,然而，即便是在美国，至今对私人机构支持克隆研究也没有明确的禁止性法规出台。而这种私人机构投资有时远远高
20、于国家投资。 目前，中国和英国等一些国家所认定的标准，是人的受精卵发育14天后，神经系统才开始发育，才具有感知能力，才具备一个生命的雏形。因此，以发育不超过14天的受精卵胚胎进行治疗性克隆研究并不违背伦理。,54,四、 动物克隆技术的分类,（一）早期的哺乳动物克隆技术 早期哺乳动物的克隆主要通过胚胎分割、胚胎嵌合等技术得到。,55,相关知识,胚胎分割 把一个胚胎的细胞分成2组或多组，经过短暂培养使其修复、发育，再一同或分别移到不同的代母中，妊娠产多胎。又称人工同卵多胎技术。这是一项成倍或数倍地增长经济遗传性状优秀动物的数量和迅速提高畜群生产质量的技术。 分割方法包括用微手术刀和分离微针在显微镜
21、下或显微操作仪下将一个胚胎分割成2份或多份，经过培养再移植，或者将一个具几个卵裂球的胚胎，用机械或化学的方法使卵裂球分开，对每一个卵裂球进行培养，使其再分裂变成一个可移植的胚胎，移植产仔。,56,胚胎嵌合 是将个胚胎细胞（同种或异种动物胚胎）合并，共同发育成个胚胎，即“嵌合胚胎”，然后将这个胚胎移植给受体，让其妊娠产仔。如果产下来的幼仔具有以上种动物胚胎的细胞，则称其为“嵌合体动物”。 其方法是：超数排卵采集胚胎；用物理学的方法，酶或酸处理去掉透明带；将两个或多个除去透明带的胚胎移到含有钙离子的37的培养液中妊娠产仔；检查预定设计的标记物以判明是否为嵌合体，也可以应用卵裂球集合法，放入空透明带
22、内培养发育移植产仔。,57,（二）目前的动物克隆技术,目前动物克隆技术的核心是核移植。核移植是指将胚胎细胞或体细胞的细胞核用显微外科手术的方法移入去核的卵母细胞中，构建成重组胚,通过体内或体外培养、胚胎移植，产生与供体细胞基因型相同的后代的技术过程，又称为动物克隆技术。,58,根据核供体的来源不同,可将其分为胚胎细胞克隆技术体细胞克隆技术主要包括胚胎细胞核移植、胚胎干细胞核移植、胎儿成纤维细胞核移植、体细胞核移植。,59,8 动物克隆技术的研究现状及发展方向,8.1 克隆技术概述8.2 哺乳动物克隆的基本过程8.3 动物克隆的影响因素 8.4 克隆技术存在的问题 8.5 核移植后核重编程研究进
23、展8.6 动物克隆技术的发展方向,60,8.2 哺乳动物克隆的基本过程,核供体动物的选择与细胞核的获得。核受体动物的选择与细胞核的移出。核卵重组移核胚的活化胚泡的体外试管培养代母的选择与胚泡移入子宫克隆动物的体内发育与出生,61,62,请欣赏精彩的移核过程,63,64,65,66,67,技术路线以多莉为例芬兰多塞特白面母绵羊苏格兰黑面母绵羊,http:/ 3,68,多莉和威尔穆特,69,具体操作,取处于后三分之一妊娠期的6岁母绵羊（芬兰多塞特白面绵羊）的乳腺细胞作核供体细胞，用“饥饿法”使其进入休眠状态而使全部基因具有活性。注射促性腺激素GN促使母羊（苏格兰黑面母绵羊）排卵，2833小时取其未
24、受精卵快速去核，放入10%FCS（小牛血清）、1%FCS和0.5%FCS连续5天，饥饿使进入G0期做受体细胞。,70,在乳腺细胞注射GN3436小时后与无核卵放入同一培养皿中，在微电流作用下，将乳腺细胞核融入卵中，形成一个含有新遗传物质的卵细胞。将新的卵细胞植入羊的结扎的输卵管内，6天后发育成桑椹期胚胎或囊胚（816个细胞），再移入假孕母羊子宫内。产下多莉即为6岁母羊的复制品，也为白色。,71,72,8 动物克隆技术的研究现状及发展方向,8.1 克隆技术概述8.2 哺乳动物克隆的基本过程8.3 动物克隆的影响因素 8.4 克隆技术存在的问题 8.5 核移植后核重编程研究进展8.6 动物克隆技术
25、的发展方向,73,8.3 动物克隆的影响因素,一、卵母细胞对核移植效率的影响 1、卵母细胞来源 克隆牛研究中多用屠宰牛卵巢回收卵作核受体。卵供体动物的年龄和生产状况对重组胚的发育能力也有影响。当用经产母猪的卵母细胞为受体时,卵裂率及囊胚率显著高于青年母猪的卵母细胞(Teale等,1994)。,74,对于种间核移植,当以水牛体细胞为供体,以水牛和黄牛IVM（IVM：卵子体外成熟，是指未成熟卵母细胞体外培养成熟的方法 ）卵母细胞为受体进行核移植时，二者在融合率、卵裂率及囊胚发育率上均无差异。在克隆犬的研究中发现,牛卵母细胞作受体时似乎优于犬卵母细胞(Willadsen,1982)。,75,卵母细胞
26、的卵龄对猪核移植效率的影响,陈乃清，赵浩斌（1999）对核移植中，猪卵母细胞的卵龄对核移植效率的影响进行了研究，结果表明：体外成熟培养 48h 的猪卵母细胞最适合作为核受体，其激活率达 78.3% ，并无裂解；去核率高达90% ；在作为核受体进行核移植时，融合率为75% ；重构胚胎的卵裂率为64.6%；卵龄进一步增大，激活率略有增加，但去核率、融合率和卵裂率均下降。,76,2、卵母细胞及供体细胞的胞质容量,去核时所吸除的胞质量与移入的供体细胞体积相似时有利于重组胚的发育,把供体细胞移入含有半量胞质的受体中时,不能发育到囊胚,但将供体细胞的胞质去除之后,则可获得10%的囊胚发育率(Rorie等,
27、1985)。,77,3、卵母细胞去核方案,T期去核较M期去核所获重组胚的囊胚率显著升高,且质量也更好,这可能与T期去核卵母细胞经历了激活和排出PB的选择，且所吸除胞质量较少有关(Ozil等,1982)。但T期去核方案虽有利于SUZI (透明带下注射Subzonal injection， SUZI)重组胚的发育,却不利于ICSI (卵子胞浆内单精子注射，Intracytoplasmic sperm injection, ICSI)重组胚的发育。,78,二、供体细胞对核移植效率的影响,1、细胞供体动物的年龄来自不同年龄及不同汇合程度的细胞,其细胞周期特征虽有实质差异,但这些因素对核移胚的体外发育无
28、影响。,79,2、供体细胞的传代次数、组织来源,兔成纤维细胞的原代细胞较传代细胞囊胚发育率低，经细胞周期分析，传612代的细胞更易进入G0、G1期，这与传代细胞囊胚发育率高的结果相吻合(Lei-bo,1988)。以传至2代与18代克隆牛胎儿成纤维细胞作供体，发现尽管囊胚发育率较低,但并无显著差异。,80,三、融合-激活方案,目前采用的融合-激活方案有3种:融合前激活，即在卵母细胞与供核体细胞融合前激活卵母细胞;融合时激活，即在将供受体融合的同时激活卵;融合后激活，即在供受体融合后数小时再激活，可延长核在受体胞质内的时间，使重编程更彻底(McKinnell,1962)。,81,四、核移植方案的影
29、响,目前常用的有3种方案:单次核移植，即将体细胞移入去核卵母细胞内获得重组胚；二次核移植，即以体细胞为供核体，移入去核卵母细胞内构成一级重组胚，在一级重组胚发育到原核期时，再将其原核移入到弃原核的受精卵内构成二级重组胚，这一方面避免了人工激活所带来的不利影响，另一方面延长了核质相互作用，利于重编程；,82,继代再克隆，即以体细胞克隆的卵裂球为供体核，移入去核卵母细胞中，从而延长了供体核在受体胞质中的暴露时间，使重编程更彻底，并增加了核移胚后代的数量(DiBeradino等，1967)。,83,8 动物克隆技术的研究现状及发展方向,8.1 克隆技术概述8.2 哺乳动物克隆的基本过程8.3 动物克
30、隆的影响因素 8.4 克隆技术存在的问题 8.5 核移植后核重编程研究进展8.6 动物克隆技术的发展方向,84,8.4 克隆技术存在的问题,成功率很低问题目前公认的成功率在1%3%，克隆胚胎移植后的出生率平均不到10%(DiBeradino等，1971)。因此，要最大限度地利用动物克隆技术，就要解决好成功率问题。,85,部分个体生理或免疫缺陷问题 目前大多数研究发现体细胞克隆动物有半数多有严重缺陷或是畸形,包括心脏、肺脏等器官携有罕见的缺陷,其中许多未出生就胎死腹中,或出生后不久突然死亡(Gurdon,1962)。,86,受体细胞质与供体细胞核周期相容性的问题 当受体细胞与供体细胞处于细胞周期
31、同一时间,核移植的成功率就大。克隆羊“dolly”之所以成功,关键在于Willmut等找到了一种使供体细胞核和受体卵母细胞更相容的方法,供体细胞核在DNA复制时间上与受体卵母细胞基本同步(Gurdon等,1997)。,87,核移植产生的重构胚能否完成整个发育过程的问题解决问题的关键是移入的细胞核能否在受体细胞质的作用下正确的重新编程,使重构胚成为全能性细胞,在适宜的环境条件下如正常胚胎那样分裂、分化、发育形成个体(DiBradino等,1984)。,88,供体线粒体的带入问题 在核移植过程中,供体核带入一部分细胞质,于是,移核胚胎的线粒体就成为杂合型,既有供核细胞来的,也有受体细胞质来的,因此
32、,核移植的克隆动物实际上是一种遗传嵌合体。为此,应亟待解决动物克隆中这一方面的问题,尽量减少或避免供体线粒体的带入。,89,小结,哺乳动物克隆的基本过程核供体动物的选择与细胞核的获得。核受体动物的选择与细胞核的移出。核卵重组移核胚的活化胚泡的体外试管培养代母的选择与胚泡移入子宫克隆动物的体内发育与出生,90,小结,动物克隆的影响因素 卵母细胞对核移植效率的影响 供体细胞对核移植效率的影响 融合-激活方案 核移植方案的影响,91,小结,克隆技术存在的问题 成功率很低问题部分个体生理或免疫缺陷问题 受体细胞质与供体细胞核周期相容性的问题 核移植产生的重构胚能否完成整个发育过程的问题供体线粒体的带入问题,
