保健食品功效成分及卫生指标检验规范.docx

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1、功效成分及卫生指标检验规范功效成分及卫生指标检验规范1 主题内容和适用范围1.1 本规范规定了保健食品和原料的卫生要求、功效成分和卫生指标的检验项目和方法。1.2 本规范适用于保健食品的检验受理、项目的确定和方法的选择。2 基本要求2.1 凡保健食品，必须符合保健食品通用卫生要求，该要求所列的各项目必须按规定执行。附表1所列检测项目是对保健食品通用卫生要求补充规定。2.2 保健食品中使用的添加剂必须符合GB2760食品添加剂使用卫生标准规定的品种名单。检测机构根据产品配方检测合成色素、防腐剂、甜味剂及抗氧化剂的含量。2.3 凡使用有机溶剂提取物为原料的产品，其使用的有机溶剂要符合GB2760附

2、录D食品工业用加工助剂推荐名单要求。2.4 保健食品应具有与产品配方和申报的保健功能相适应的功效成分或特征成分，申报时须检测配方中主要原料所含的功效成分或特征成分。附表2所列原料为主的产品须检测表中规定的项目。2.5 保健食品评审专家委员会可根据产品的具体配方、工艺等相关资料，要求申报单位检测指定的项目。2.6 功效成分、特征成分、营养成分及卫生学指标的检测方法应根据其产品适用的方法学范围选择国家标准、卫生部部颁标准、行业标准以及国际上权威分析方法进行测定。2.7 在没有相应的标准方法之前，其产品中所声称（具有）的功效成分或特征成分的检测方法及检测所需的标准品对照品及特殊试剂均由申报单位提供，

3、并说明其产品中功效成分或特征成分分析方法的来源。如属自主开发研究的分析方法，需提供方法学研究的相关资料，同时将方法学研究的资料报卫生部保健食品功效成分检测协作组（中国疾病预防控制中心营养与食品安全所）备案，必要时卫生部将组织方法学验证，其费用由申报单位承担。2.8 检验机构受理保健食品检测时，申报单位应提供该产品的配方、工艺及企业标准等相关资料。2.9 卫生部对保健食品的功效成分的检测机构进行认定，检测机构的名单由卫生部门公布。保健食品的功效成分检测工作应在卫生部认定的检测机构进行。违禁成分的检测由卫生部指定的检验机构进行检测。附表1：下列类型的产品、或下列原料为主的产品指标检测项目表产品类型

4、检测项目1固体水分、灰分2口服液可溶性固形物、3海产品镉4鱼油类酸价、过氧化值（降血脂类产品需检测胆固醇）5茶叶有机氯农药残留（六六六、滴滴涕）6红曲黄曲霉毒素1、桔青霉素7中药材汞、六六六、滴滴涕89 苹果、山楂 片剂和胶囊展青霉毒素崩解时限10抗疲劳、减肥和改善生长发育的产品违禁药物附表2：功效成分和特征成分检测项目表1营养素补充剂产品中标识的营养素(包括维生素和矿物质) 2五加科参类皂甙3蕈类（灵芝、蘑菇等）膳食纤维4冬虫夏草菌丝体腺苷5红景天类红景天甙6芦荟类芦荟甙7大蒜类大蒜素8螺旋藻类蛋白质、胡萝卜素、维生素B1、维生素B29茶叶类茶多酚10魔芋类膳食纤维11纤维素类膳食纤维12磷

5、脂类丙酮不溶物、乙醚不溶物（原料）13红曲类洛伐它丁14植物油类脂肪酸、维生素E15动物油类脂肪酸16初乳类免疫球蛋白17鹿血类蛋白质、氨基酸18蚂蚁类锰、蛋白质19蚯蚓类蚓激酶（溶纤酶）、蛋白质20蛇、蝎等蛋白质、氨基酸21角鲨烯角鲨烯22蜂皇浆10-羟基癸烯酸23蜂花粉、蜂胶总黄酮24甲壳质产品脱乙酰度，产品如为复方应检测原料的脱乙酰度25蛋白质、氨基酸制品蛋白质、氨基酸26褪黑素产品褪黑素 产品原料（褪黑素）需提供原料纯度证明并检测3 保健食品中功效成分的检验方法见附件1附件1目 录1. 保健食品中红景天甙的测定2. 保健食品中大蒜素的测定3. 保健食品中芦荟甙的测定4. 保健食品中脱氢

6、表雄甾酮（DHEA）的测定5. 保健食品中吡啶甲酸铬的测定6. 保健食品中盐酸硫胺、盐酸吡哆醇、烟酸、烟酰胺和咖啡因的测定7. 保健食品中肌醇的测定8. 保健食品中肉碱的测定9. 保健食品中亚麻酸、亚麻酸的测定10. 保健食品中免疫球蛋白IgG的测定11. 保健食品中水溶性粗多糖的测定12. 保健食品中人参皂甙的高效液相色谱测定13. 保健食品中原花青素的测定14. 保健食品中核苷酸的测定15. 保健食品中洛伐他丁的测定16. 保健食品中中药功效成分的鉴别方法17. 保健食品中银杏叶总黄酮的高效液相色谱测定18. 保健食品中异麦芽低聚糖、低聚果糖、大豆低聚糖的测定19. 保健食品中金雀异黄素的

7、测定20. 保健食品中茶氨酸的高效液相色谱测定21. 五味子类保健食品中五味子醇甲、五味子甲素和乙素的高效液相色谱测定22. 保健食品中腺苷的测定23. 保健食品中褪黑素的测定附：保健食品功效成分检验方法协作组提供的检验方法1. 保健食品中人参总皂甙的测定2. 保健食品中总黄酮的测定3. 壳聚糖的游离氨基测定及脱乙酰度的计算4. 蚓激酶活性的测定5. 乙醚不溶物、丙酮不溶物的测定6. 角鲨烯的测定1.保健食品中红景天甙的测定Determination of salidroside in health food 第一法 高效液相色谱法1 范围本方法规定了保健食品中红景天甙的测定方法。本方法适用于

8、以红景天为主要原料的保健食品中红景天甙的测定。本方法的检出限：0.02g。本方法的线性范围：0.010.50g/mL。2 原理将混匀的试样使用甲醇进行提取，根据高效液相色谱紫外检测器定性定量检测。3 试剂 除非另有说明，在分析中仅使用双蒸水。3.1 乙酸钠 分析纯。3.2 甲醇 优级纯。3.3 石油醚 分析纯。3.4 红景天甙标准溶液 准确称量红景天甙标准品0.0200g，加入甲醇溶解并定容至10mL。此溶液每mL含2.0mg红景天甙。 4 仪器4.1 高效液相色谱仪： 附紫外检测器（UV）。4.2 超声波清洗器。4.3 离心机。5 分析步骤5.1 试样处理5.1.1 液体试样：准确量取摇匀后

9、的液体试样20mL于50mL容量瓶中，先加入25mL甲醇，超声10min后用甲醇定容至刻度，混匀，经0.45mm滤膜过滤后供液相色谱分析用。5.1.2 固体试样：取20粒以上片剂或胶囊试样进行粉碎混匀，准确称取适量试样（精确至0.001g）于50mL容量瓶中，加入甲醇, 超声提取10min。取出后加入甲醇定容至刻度，混匀后以3000rpm/min离心3min。经0.45mm滤膜过滤后供液相色谱分析用。5.2 液相色谱参考条件5.2.1 色谱柱: C18柱 4.6250mm,5m。 5.2.2 柱温：室温。 5.2.3 紫外检测器：检测波长 215nm。 5.2.4 流动相：甲醇:0.02mol

10、/L乙酸钠溶液9:91。5.2.5 流速：1.0mL/min。5.2.6 进样量：10mL。5.2.7色谱分析：取10L标准溶液及试样溶液注入色谱仪中，以保留时间定性，以试样峰高或峰面积与标准比较定量。5.3 标准曲线制备 分别配制浓度为0.0、0.01、0.02、0.05、0.20、0.50g/mL红景天甙标准溶液,在给定的仪器条件下进行液相色谱分析,以峰高或峰面积对浓度作标准曲线。5.4 分析结果的表示5.4.1 计算 h1 C V X = h2m1000式中： X 试样中红景天甙的含量，mg/g； h1 试样峰高或峰面积； C 标准溶液浓度，g/mL； V 试样定容体积，mL； h2 标

11、准溶液峰高或峰面积；m 试样质量，g。 计算结果保留三位有效数字。6 技术参数准确度 方法的回收率在91.798.6之间。允许差 在重复性条件下获得的2次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。第二法 极谱法1 范围 本方法规定了保健食品中红景天甙的测定方法。本方法适用于以红景天甙为主要功效成分的保健食品中红景天甙的含量测定。本方法的最低检出量为0.05g。若取1.00mL液体类试样，其最低检出浓度为0.05mg/L；若取0.25g固体类试样、则最低检出浓度为0.2mg/kg。本方法的最佳线性范围为0.1g/mL1.0g/mL。2 原理保健食品中红景天甙用甲醇提取，D101型大孔吸附

12、树脂净化处理，经亚硝基化后，其衍生物在硼砂溶液中具有电活性，在滴汞电极上还原产生极谱波。用峰电位定性，以试样与标准的峰电流（Ip）比较定量。3 试剂除注明外，试剂为分析纯，实验用水为重蒸馏水。3.1 甲醇。3.2 D101型大孔吸附树脂。3.3 饱和硼砂溶液。3.4 0.2%盐酸溶液。3.5 2mol/L亚硝酸钠溶液。3.6 1.0mg/mL红景天甙标准贮备溶液：准确称取0.1000g红景天甙对照品（中国药品生物制品检定所）于烧杯中，加水溶解并定容至100mL容量瓶。此溶液每毫升含红景天甙1.0mg，冰箱保存。3.7 10.0g/mL红景天甙标准使用溶液：准确吸取红景天标准贮备溶液1.00mL

13、于100mL容量瓶中，用水稀释至刻度。此溶液每毫升含红景天甙10.0g。4 仪器与设备4.1 极谱分析仪。4.2 超声波清洗机。4.3 10mm150mm玻璃层析柱。5 分析步骤5.1 试样的制备及予处理5.1.1 液体类试样（如保健酒、口服液、饮料等）准确吸取摇匀的试样液1.00mL于50mL容量瓶中，加水稀释至刻度、摇匀，供测定用。5.1.2 一般固体类试样（如保健茶、蜜片、胶囊等）准确称取经粉碎并过20目筛的试样0.25g，置50mL三角瓶中，加入10mL甲醇，于超声波清洗机超声提取10min、过滤，滤液收集于50mL容量瓶中。再加入10mL甲醇于三角瓶中，重复超声提取一次，合并滤液于上

14、述容量瓶中，用水稀释至刻度，供测定用。5.1.3 个别组分复杂的固体类试样个别组分复杂的固体类试样需经柱层析净化处理。层析柱制备。取适量D101型非极性大孔吸附树脂于烧杯中，加水洗涤数次，缓缓倾入10mm 150mm玻璃层析柱内，湿法装柱、树脂约高50mm，10mL甲醇注入层析柱上端进行淋洗，弃淋洗液。净化。按5.1.2节处理、提取试样，准确吸取10.0mL提取试液，缓缓注入层析柱上端，用玻璃蒸发皿收集流出液。再吸取10mL甲醇分两次注入层析柱进行淋洗、合并流出液于蒸发皿中，置70恒温水浴挥干，用水溶解移入10mL容量瓶中，水稀释至刻度，供测定用。5.2 极谱分析参考条件单扫描极谱法（SSP法

15、）。选择起始电位为 400mV，终止电位 900mV，扫描速度250mV/S，三电极，二次导数，静置时间5s及适当量程。于峰电位（Ep） 600mV（vs.SCE）处，记录红景天甙的峰电流（Ip）nA。5.3 标准曲线的绘制准确吸取10.0g/mL红景天甙标准使用溶液0，0.10，0.20，0.40，0.60，0.80，1.00mL于7支10mL比色管中（相当于含0，1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0g红景天甙）。各管加入2.0mL 2mol/L亚硝酸钠溶液及1.0mL 0.2%盐酸溶液置沸水浴10min，取出冷却至室温后各管再加入1.0mL饱和硼砂溶液，加水稀释至刻度，摇匀。将

16、各管溶液依次移入电解池，置三电极系统。按上述极谱分析参考条件（5.2）下测定，记录各管红景天甙的峰电流（Ip）。以红景天甙含量为横座标，其对应的峰电流为纵座标，绘制标准曲线。5.4 试样测定5.4.1 标准曲线法准确吸取上述待测液0.1mL0.5mL于10mL比色管中，（视其含量高、低而定）加入2mL 2.0mol/L亚硝酸钠溶液，以下操作同5.3节标准曲线绘制项下测定试液中红景天甙的峰电流（Ip）。5.4.2 标准加入法分别吸取上述待测液0.10.5mL于2支10mL比色管中（视其含量高、低而定）。其中一管加入所吸取待测液中红景天甙含量大致相当的红景天甙标准使用溶液（可先予测一次），各管再加

17、入2mLL2.0mol/L亚硝液钠溶液，以下操作步骤同5.3节标准曲线绘制项下。测定两管溶液中红景天甙的峰电流（Ip）。6 结果6.1 计算6.1.1 标准曲线法X= AmV11000（1）V式中：X试样中红景天甙含量，mg/g（或mg/mL）； A从标准曲线上查得的含量，g； V试样的定容体积，mL； V1测定用试样溶液体积，mL； m试样的质量（或体积），g（或mL）。6.1.2 标准加入法X= Bh1（h2h1）V11000（2）V 式中：B加入红景天甙标准含量，g； h1未加红景天甙标准管中溶液的峰电流，nA； h2加红景天甙标准管中溶液的峰电流，nA； X，m，V1，V与（1）式中表

18、述含义相同。6.1.3 结果表示：计算结果保留3位有效数字。6.2 技术参数准确度：本方法的平均添加回收率为92.5%。精密度：相对标准偏差（RSD）7.0%干扰因素：若试样中共存黄酮甙，有正干扰，测定时加入%硝酸铝溶液0.5mL，即可消除此干扰。2. 保健食品中大蒜素的测定Determination of allitridum in health food 1 范围 本方法规定了保健食品中大蒜素(三硫二丙烯，C6H10S3)的测定方法。 本方法适用于以大蒜（油）为主要原料，制成的酒、胶囊、片剂中大蒜素的含量测定。 本方法最低检出浓度为0.0430mg/mL；取100mg试样，提取定容5.0m

19、L时，试样中大蒜素最低检出质量浓度为0.20g/100g。 本方法最佳线性范围： 0.320-3.00g。2 原理 根据大蒜素为挥发性油成分，经有机溶剂提取，用气相色谱仪分析，采用外标法定量。3 试剂3.1 无水乙醇(分析纯)。3.2 正己烷(分析纯)。3.3 标准溶液配制 称取0.1000g标准，置于10mL容量瓶中，用正己烷定容至刻度，该溶液中含大蒜素浓度为10.0mg/mL。此溶液可在冰箱中保存七天。取该溶液1.0mL，置于10mL容量瓶中，用正己烷定容至刻度，此溶液含大蒜素浓度为1.0mg/mL。4 仪器4.1 气相色谱仪，附氢火焰（FID）检测器。4.2 数据处理机，或积分仪。4.3

20、 分析天平：万分之一。4.4 超声清洗机。4.5 离心机，3000r/min。5 分析方法5.1 试样提取5.1.1固体试样 精密称取试样0.100g，加无水乙醇2.5mL ,密塞，超声70min，取出冷却，加正己烷2.5-25.0mL定容（调节大蒜素含量约为1.0mg/mL左右），振摇，静置分层后，取上层液进样。5.1.2 液体试样 精密吸取20.0 mL 试样，于分液漏斗中，加5mL 正己烷振摇提取1min，静置（或离心）分层后，取上层液进样。5.2 气相色谱参考条件5.2.1 色谱柱 玻璃色谱柱长：2米，内装担体：硅藻土（ Chromosorb W(AW)）,60-80目；固定相：0.5

21、%己二酸乙二醇酯（Ethylene Glycol Adipate）;。5.2.2 柱箱温度：90。5.2.3 进样口温度：150。5.2.4 鉴定器温度：150。5.2.5 载气：氮气（55mL/min）。5.2.6 氢气：50mL/min ；空气：500mL/min。5.2.7 鉴定器灵敏度：2；记录仪衰减：3。5.2.8 进样量1L。5.3 定性分析 在参考操作条件下，以对照品与试样比较保留时间定性。5.4 定量分析 试样中大蒜素色谱峰面积或峰高与标准的色谱峰面积或峰高比较定量。5.5 分析结果表述 试样中大蒜素的含量按式（5.5.1）计算。5.5.1 计算 W= 式中：W大蒜素的含量，%

22、；A1试样使用液色谱峰面积或峰高；A2标准使用液峰面积或峰高；C标准使用液浓度，mg/mL；V试样定容体积，mL；m试样的质量，g。5.5.2 结果表示 计算结果保留三位有效数字。6 技术参数6.1 回收率：在不同的试样中不同浓度加标回收率为97.8-116%。6.2 精密度：同一试样6次测定结果的RSD为2.10%。6.3 两次测定结果相对误差：10%6.4干扰因素：在超声时,注意密塞。7 参考色谱图 图A 标准品气相色谱图 图B 片剂试样气相色谱图 图中 tr=0.588 溶剂, 图中 tr=0.6 溶剂， tr=3.045 大蒜辣素 tr=3.062 大蒜辣素tr=10.912大蒜素 t

23、r=11.011 大蒜素3. 保健食品中芦荟甙的测定Determination of Aloin in health food1范围本方法规定了芦荟胶囊、芦荟片剂、芦荟汁等保健食品中芦荟甙含量的测定方法。本方法适用于芦荟胶囊、芦荟片剂、芦荟汁等保健食品中芦荟甙含量的测定。本方法的最低检出量10ng本方法的最佳线性范围：0100g/mL y=1124194x+3215；线性关系r=0.99992原理用甲醇+水（55+45）作为溶剂，提取试样中的芦荟甙，经高效液相色谱仪C18柱分离，紫外检测器293nm条件下检测，以芦荟甙保留时间定性，峰面积定量。3试剂31甲醇 色谱纯；32水 重蒸水；33芦荟甙

24、标准品 纯度98%34芦荟甙标准溶液的制备 精确称取芦荟甙标准品10mg，加流动相甲醇+水（55+45）溶解并移入100mL容量瓶中，定容至刻度。4仪器设备41 高效液相色谱仪 附紫外检测器42色谱柱 C18（以十八烷基键合硅胶填料为填充剂）或具同等性能的色谱柱，150mm6mm，5m；43 超声波清洗器；44 C18净化富集柱 C18预柱 装量0.5g，分配型；45离心机 3000r/min。5色谱分离条件51流动相 甲醇+水=55+4552流速 1mL/min；53柱温 40；54检测波长 293nm；55灵敏度 0.016AUFS；56进样量 10L。6分析步骤61试样制备 将固体试样粉

25、碎成粉末状，混匀。准确称取上述经处理后的试样1.00g于50mL容量瓶中，加检测用流动相30mL溶解，经超声振提5min加流动相定容50mL，离心沉淀，上清液经滤膜（0.45m）过滤，芦荟汁饮料直接经0.45m滤膜过滤。62测定步骤 分别精密吸取标准溶液和试样溶液10L注入高效液相色谱仪，依上述色谱条件，以保留时间定性，用外标法计算试样中芦荟甙的含量。7计算公式 A1CV x= A2m式中：X 试样中芦荟甙含量，mg/g（mg/mL）； A1 试样中芦荟甙的峰面积； C 标准液的质量浓度，mg/mL； A2 标准液中芦荟甙的峰面积； V 试样定容体积，mL； m 试样的质量，g（mL）。 计算

26、结果保留三位有效数字。8.允许误差同一试样两次测定值之差不得超过两次测定平均值的10%。4. 保健食品中脱氢表雄甾酮（DHEA）的测定Determination of dehydroepiandrosterone in heath food 1 范围本方法规定了保健食品中脱氢表雄甾酮（DHEA）含量的测定方法。本方法适用于添加在片剂、胶囊等试样类型中功效成分脱氢表雄甾酮（DHEA）含量的测定。本方法的最低检出量6.00mg/kg。本方法的最佳线性范围：0.040010.0mg/mL。2 原理将粉碎的胶囊和片剂试样使用流动相进行提取和稀释，根据高压液相色谱紫外检测器定性定量检测。3 试剂3.1

27、甲醇 优级纯。3.2 脱氢表雄甾酮（DHEA）标准溶液 准确称量脱氢表雄甾酮（DHEA）标准品（Sigma公司，纯度99%）0.0100g，加入检测用流动相并定容至10mL。此溶液每mL含1mg脱氢表雄甾酮（DHEA）。 4 仪器设备4.1 高效液相色谱仪： 附紫外检测器（UV）。4.2 超声波清洗器。4.3 离心机。5 分析步骤5.1 试样处理： 取20粒以上片剂或胶囊试样进行粉碎混匀，准确称取试样（精确至0.001g）于容量瓶中，加入流动相定容至10.0mL, 使浓度大约为每mL中含脱氢表雄甾酮（DHEA）1mg。超声提取5min后以3000rpm/min离心3min。准确取2.0mL试样

28、溶液于试管中，加入流动相定容至5.0mL，摇匀。经0.45mm滤膜过滤后，备用。 5.2 液相色谱参考条件5.2.1 色谱柱: C18柱 4.6250mm。 5.2.2 柱温：室温。 5.2.3 紫外检测器：检测波长 215nm。 5.2.4 流动相：甲醇：水80：20。5.2.5 流速：0.6mL/min。5.2.6 进样量：10mL。5.2.7色谱分析：取10L标准溶液及试样溶液注入色谱仪中，以保留时间定性，以试样峰高或峰面积与标准比较定量。5.2.7 色谱图 在上述色谱条件下，脱氢表雄甾酮（DHEA）的保留时间为7.40。5.3 标准曲线制备 分别配制浓度为0.0、0.0400、0.20

29、0、1.00、5.00、10.0mg/mL脱氢表雄甾酮（DHEA）标准溶液,在给定的仪器条件下进行液相色谱分析,以峰高对浓度作标准曲线。5.4 分析结果表示5.4.1计算 h1 C V 5 X = h2m2式中： X试样中脱氢表雄甾酮（DHEA）的含量，mg/g； h1试样峰高或峰面积； C 标准溶液浓度，mg/mL； V试样定容体积，mL； h2标准溶液峰高或峰面积；m试样质量，g。5.4.2 结果表示 保留三位有效数字。6 技术参数准确度 方法的回收率在91.5%96.0%之间允许差 平行样相对误差5%。5.保健食品中吡啶甲酸铬的测定Determination of chromium pi

30、colinate in heath food 1 范围本方法规定了保健食品中吡啶甲酸铬含量的测定方法。本方法适用于吡啶甲酸铬作为功效成分添加于片剂、胶囊等试样类型中含量的测定。本方法的最低检出量10.0mg/kg。本方法的最佳线性范围：2.00100g/mL。2 原理将粉碎的胶囊和片剂试样使用甲醇：水=1：1进行提取和稀释，根据高压液相色谱紫外检测器外标法定性定量检测。3 试剂3.1 甲醇 优级纯。3.2 磷酸氢二钾、磷酸二氢钾 分析纯。3.3 吡啶甲酸铬标准溶液 准确称量吡啶甲酸铬标准品0.0100g，加入甲醇:水=1:1并定容至100.0mL, 如有少量残渣,可使用超声波加速溶解。此溶液每

31、mL含100g吡啶甲酸铬。 4 仪器设备4.1 高效液相色谱仪： 附紫外检测器（UV）。4.2 超声波清洗器。4.3 离心机。5 分析步骤5.1 试样处理： 取20粒片剂或胶囊试样进行粉碎或混匀，准确称取一定量试样于刻度试管中，加入甲醇：水=1：1并定容至20.0mL,超声提取5min后以3000rpm/min离心3min。经0.45mm滤膜过滤后，备用。 5.2 液相色谱参考条件5.2.1 色谱柱: C18柱 4.6250mm。 5.2.2 柱温：室温。 5.2.3 紫外检测器：检测波长 254nm。 5.2.4 流动相：0.125mol/L磷酸盐缓冲溶液：乙腈425：75。5.2.5 流速

32、：0.5mL/min。5.2.6 进样量：10mL。5.2.7色谱分析：量取10L标准溶液及试样溶液注入色谱仪中，以保留时间定性，以试样峰高或峰面积与标准比较定量。5.3 色谱图 在上述色谱条件下，吡啶甲酸铬的保留时间为7.023。5.4 标准曲线制备 配制浓度为0.0、2.00、5.00、10.0、50.0、100g/mL吡啶甲酸铬标准溶液,在给定的仪器条件下进行液相色谱分析,以峰高对浓度作标准曲线。5.5 分析结果表示5.5.1计算 h1 C V X = h2m1000式中： X试样中吡啶甲酸铬的含量，mg/g； h1试样峰高或峰面积； C 标准溶液浓度，g/mL； V试样定容体积，mL；

33、 h2标准溶液峰高或峰面积；m试样量，g。5.5.2 结果表示 检测结果保留三位有效数字。6 技术参数准确度 方法的回收率在91.5%98.4%之间允许差 平行样测定相对误差5%。6保健食品中盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇、烟酸、烟酰胺和咖啡因的测定Determination of thiamine hydrochloride,pyridoxine hydrochloride,niacin,niacinamide and coffeine content in health food 1 范围本方法规定了保健食品中盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇、烟酸、烟酰胺和咖啡因含量的高压液相色谱测定方法。本方法适用于盐酸

34、硫胺素、盐酸吡哆醇、烟酸、烟酰胺和咖啡因作为膳食补充剂添加于片剂、胶囊、口服液、饮料等试样类型中含量的高压液相色谱测定。本方法的最低检出量为盐酸硫胺素0.4mg/kg、盐酸吡哆醇0.4mg/kg、烟酸2.0mg/kg、烟酰胺1.2mg/kg、咖啡因1.0mg/kg。本方法的最佳线性范围：盐酸硫胺素0.50050.0g/mL盐酸吡哆醇0.50050.0g/mL烟酸1.00100g/mL烟酰胺1.00100g/mL咖啡因5.00500g/mL2 原理将粉碎混匀的片剂、胶囊或液体试样使用甲醇：水：磷酸=100：400：0.5进行提取和稀释，根据高压液相色谱紫外检测器外标法定性定量检测。3 试剂3.1

35、 甲醇 优级纯。3.2 乙腈 色谱纯。3.3 磷酸 分析纯。3.4 硫酸月桂酯钠（Sodium Dodecylsulfate） 高压液相色谱用离子对试剂。3.5 1-癸烷磺酸钠（Sodium 1-Decanesulfonate）高压液相色谱用离子对试剂。3.6 标准储备液A 准确称量已扣除水分的盐酸硫胺素和盐酸吡哆醇标准品各0.0500g，溶于水中并定容至50mL。3.7 标准储备液B 准确称量已扣除水分的烟酰胺和烟酸标准品各0.0400g，溶于水中并定容至20mL。3.8 混合标准使用液 准确称量经80干燥4h的咖啡因0.0500g，准确加入标准储备液A 5mL, 标准储备液B 10mL，再

36、加入甲醇：水：磷酸=100：400：0.5混合溶液 4 仪器和设备4.1 高效液相色谱仪： 附紫外检测器（UV）。4.2 超声波清洗器。4.3 离心机。5 分析步骤5.1 试样处理5.1.1 取20粒以上片剂或胶囊试样研磨或混匀，称取一定量试样于试管中（准确至0.001g），加入甲醇：水：磷酸100：400：0.5混合溶液,使浓度为每毫升中大约含盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇0.25mg，烟酸、烟酰胺1mg。超声提取5min后以3000rpm/min离心5min，上清液经0.45mm滤膜过滤后待进样。5.1.2 液体试样直接以甲醇：水：磷酸100：400：0.5混合溶液稀释，充分混匀后经0.45mm滤

37、膜过滤后待进样。5.2 色谱条件5.2.1 色谱柱: 液体试样TSK C18 4.6150mm5.2.3 柱温：室温5.2.4 检测波长：盐酸硫胺素 260nm 咖啡因、烟酸、烟酰胺、盐酸吡哆醇 280nm5.2.5 流动相：盐酸硫胺素: 硫酸月桂酯钠溶液（5530）:乙腈:磷酸530:470:1 咖啡因、烟酸、烟酰胺、盐酸吡哆醇: 1-癸烷磺酸钠溶液（1.22850）: 乙腈:磷酸850:150:15.2.6 流速：1mL/min5.2.7 进样量：10mL5.3 保留时间： 1 图1 图2在该色谱条件下，盐酸硫胺素（图11）保留时间14.305咖啡因（图21）保留时间4.986、烟酸（图2

38、2）保留时间8.728、烟酰胺（图23）保留时间9.341、盐酸吡哆醇（图24）保留时间18.512。 5.4 分析结果表示5.4.1计算 h1 C V X = h2m1000式中： X试样中单一成分的含量，mg/g（mL）； h1试样峰高或峰面积； C 标准溶液浓度，g/mL； V试样定容体积，mL； h2标准溶液峰高或峰面积； m试样量，g（mL）。5.4.2 结果表示 检测结果保留三位有效数字。6 技术参数准确度 方法的回收率在91.2%102.5%之间允许差 平行测定相对误差10%。7.保健食品中肌醇的测定Determination of inositol in health food

39、 1 范围本方法规定了保健食品中肌醇含量的测定方法。本方法适用于肌醇作为功效成分添加于片剂、胶囊、饮料等试样类型中含量的测定。本方法的最低检出量为2mg/kg。本方法的最佳线性范围是0.110mg/mL。2 原理 将固体试样提取液或液体试样稀释液浓缩至干，经硅烷化处理，以正己烷提取，气相色谱氢火焰检测器定性定量检测。3 试剂3.1 无水乙醇 分析纯。3.2 正己烷 分析纯。 3.3 无水硫酸钠 分析纯。3.4 三甲基氯硅烷 分析纯。3.5 六甲基二硅氨烷 分析纯。3.6 二甲基甲酰胺 分析纯。 3.7 肌醇标准溶液将肌醇标准品（纯度99%）在1005干燥4h，准确称量0.0500g，溶于乙醇溶液（310），准确配成100.0mL溶液。此溶液每mL含0.500mg肌醇。3.8 硅烷化试剂