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1、葡萄籽原花青素对大鼠酒精性肝损伤的预防作用,目录,研究背景,研究工作进度的初步安排,研究背景,原花青素：是一类由黄烷-3-醇缩合而成的聚多酚类物质,具有抑制脂质过氧化、抗癌、抗过敏、抗突变、抗衰老等生物活性。葡萄籽原花青素：是从葡萄籽中提取的原花青素低聚物，迄今为止源于植物的最高效的抗氧化剂之一。酒精性肝损伤：是由于长期饮酒而导致机体内促氧化物质产生明显增多和抗氧化物质的减少，使肝脏代谢障碍，最终致肝细胞坏死或凋亡的疾病。,研究目的及意义,意义研究葡萄籽原花青素对酒精性肝损伤的预防作用，从而为临床预防酒精性肝损伤探索一种新的有效方法。,目的研究葡萄籽原花青素对酒精性肝损伤的预防作用及其作用机制
2、。,葡萄籽原花青素对酒精性肝损伤的预防作用,研究现状分析葡萄籽原花青素,葡萄籽原花青素,抗糖尿病,抗心血管疾病,抗肿瘤,其他作用,抗伤害和镇痛,预防牙周病,葡萄籽原花青素研究进展-清除自由基、抗氧化活性作用,GSPE 含有大量的活性酚羟基，是氢的供体，能有效的清除多种活性氧自由基，具有极强的抗氧化活性。GSPE 可明显降低大鼠肝、脑组织自发性丙二醛(MDA)的生成，并对CCl4、H2O2和铁离子抗坏血酸等自由基引发剂诱导的肝脂质过氧化具有明显的拮抗作用，可减轻肝组织GSH 耗竭，具有明显的抗脂质过氧化作用与清除自由基的效应。GSPE 能有效地清除O2、OH、H2O2、ONOO和全血嗜中性白细胞
3、“呼吸爆发”产生的多种活性氧，有效地抑制脂质过氧化,研究现状分析酒精性肝损伤（如酒精性脂肪肝）,酒精性肝损伤,发病机制,防治与治疗,1 酒精及其代谢物对肝细胞的毒性 作用2 氧化应激和脂质过氧化作用3 内毒素、细胞因子及炎症介质在 酒精性肝损伤中的作用,1 戒酒2 营养治疗：蛋白质、锌3 药物治疗：糖皮质激素、己酮可 可碱、秋水仙碱、磷脂肽胆碱4 其它,酒精性肝病研究进展-自由基损害作用,抗生素可通过抑制肠道LPS的产生显著减轻慢性乙醇接触引起的小鼠肝脏组织脂质过氧化。乙醇在代谢过程中可直接诱导P-450 2E1的活性,产生大量自由基和ROS。自由基除直接损伤肝细胞外,还可以通过增加肝细胞对脂
4、质过氧化的敏感性,引起肝细胞损伤。,酒精性肝病研究进展-有效治疗药物及途径,白芍总甙对大鼠酒精性肝损伤保护作用,其机制可能与降低脂质过氧化水平,提高抗氧化酶活性,抑制NF-B的活化有关。参照文献报道方法(李莲.白芍总甙对大鼠酒精性肝损伤保护作用的实验研究J.湖北职业技术学院学报2010,1；105-109)三七对小鼠急性酒精性肝损伤保护作用,三七具有清除自由基、抑制脂质过氧化的作用,对急性酒精性肝损伤的保护作用可能与升高肝脏SOD、GSH-PX活性及降低MDA含量有关。参照文献报道方法(刘同刚;沙凯辉;王邦茂.三七对小鼠急性酒精性肝损伤保护作用的实验研究J.山东医药，2010,16；44-45
5、),研究项目创新性,经文献检索，发现已有葡萄籽原花青素在肝脏缺血-再灌注损伤中起保护作用，但尚未见葡萄籽原花青素预防酒精性肝损伤相关文献报道。故研究内容具有创新性。,研究项目技术路线,C组（慢性酒精中毒+葡萄籽原花青素）,B组（慢性酒精中毒+生理盐水）,成年大白鼠30只，雌雄各半随机分组，每组雌雄数均等,A组（生理盐水）,10周后检查肝脏大体及组织学变，肝组织脂质过氧化指标丙二醛（MDA）。检查血清谷草转氨酶（AST）和谷丙转氨酶（ALT）变化。,比较A组合B组结果，阐明慢性酒精中毒是否引起肝损伤,比较B组和C组，阐明葡萄籽原花青素是否可以预防慢性酒精中毒引起肝损伤,总结，撰写论文,主要实验方
6、法,酒精性肝损伤动物模型：第一组的的大鼠灌胃给予生理盐水（15ml.kg-1.d-1,每3d增加2.5ml.kg-1.d-1至25ml.kg-1.d-1），之后保持此量灌胃,作为空白对照组；第二组第三组大鼠灌胃给予酒脂混合（3:2）乳液（剂量15ml.kg-1.d-1，每3d增加2.5ml.kg-1.d-1至25ml.kg-1.d-1之后保持此量灌胃)，连续10周，复制慢性酒精中毒模型。参照文献报道方法(扈国杰,李佃贵.酒精性脂肪肝大鼠模型的建立及新清肝饮煎剂的防治作用J.中西医结合学报2004，3；123-125),主要实验方法,预防酒精性脂肪肝：第一组第二组灌胃给予生理盐水200 mgkg
7、-1d-1平均分两次，第三组灌胃给予葡萄籽原花青素200 mgkg-1d-1（使用时用生理盐水配成1%的浓度）平均分两次灌胃，连续10周。(葡萄籽原花青素有效剂量参照文献:张琳，买买提祖农.买苏尔.葡萄籽原花青素对大鼠肝缺血再灌注损伤的抗氧化作用研究J.新疆医科大学学报，2010，02),肝脏组织学检查用HE染色，计算肝组织中脂肪细胞占总细胞百分率。肝组织丙二醛(MDA)测定采用丙二醛测试盒(TBA法)方法.谷草转氨酶(AST)测定采用试剂盒，北京利德曼生化技术有限公司生产。谷丙转氨酶(ALT)的含量测定采用试剂盒(丙酮酸氧化酶法)，上海百祥生物科技有限公司提供。统计学处理：数据表示为均数标准
8、误（XSD），采用方差分析检验，p0.05为有显著性差异。,主要实验方法,研究可行性分析,条件可行性,本项目主要检查肝脏大体及组织学变，肝组织脂质过氧化指标丙二醛(MDA)。检查血清谷草转氨 酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)变化，技术难度适中，在老师指导下可以完成实验。,葡萄籽原花青素具有抑制脂质过氧化的作用，而酒精性肝病致病原因之一是由于脂质过氧化化作用，本项目探究葡萄籽原花青素对酒精性肝损伤的预防作用，在理论上是可行的。,机能学实验将提供本项目的实验平台，该实验室具备本项目所需的实验仪器、器械、药品及饲养实验动物等条件。,预期结果,葡萄籽原花青素对酒精性肝损伤具有预防作用，其作用机制与抗
9、肝组织脂质过氧化有关。,研究工作进度的初步安排,2011.06.152011.07.15 物品的购买 大鼠30只 合计1800元（北京华阜康生物科技服务有限公司）葡萄籽原花青素一瓶 合计200元（上海森一化工有限公司）大鼠饲料 100元 负责人:王萌、李亚伟、魏婕、马艺萍2011.07.152011.09.16 大鼠酒精性肝损伤模型 的制备 负责人：王萌 李亚伟 魏婕 马艺萍,研究工作进度的初步安排,2011.09.172011.09.18 处死大鼠提取血液，测定AST和ALT的含量，解剖大鼠，观察肝脏大体，制备肝组织玻片 负责人：王萌 李亚伟 魏婕 马艺萍2011.09.19 结果分析 负责人：王萌 李亚伟 魏婕 马艺萍2011.09.202011.09.27 论文生成 负责人：王萌 李亚伟 魏婕 马艺萍,Thank You!,
