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1、质量管理体系审核作业指导书体外诊断试剂（试行）北京国医械华光认证有限公司前言 为了公正、客观、科学地对生产体外诊断试剂的生产企业实施质量管理体系实施审核，证明是否符合GB/T19001-2008 、YY/T0287-2003标准要求，特制定本审核作业指导书。本指导书参考了体外诊断试剂注册管理办法2014.6.27发布2014.10.1实施、国家药监局体外诊断试剂生产实施细则（征求意见稿）的相关要求。 1 范围本指导书适用于按GB/T19001-2008、YY/T0287-2003标准要求对体外诊断试剂产品的组织实施质量体系审核。2 引用文件GB/T 19000-2008 质量管理体系 基础和术
2、语；GB/T 19001-2008 质量管理体系 要求YY/T 0287-2003 医疗器械 质量管理体系 用于法规的要求YY/T 0316-2008 医疗器械 风险管理对医疗器械的应用YY 0033-2000 无菌医疗器具生产管理规范GB 18278-2000 医疗保健产品灭菌 确认和常规控制 工业湿热灭菌YY/T 0456.1、2、32003 体外诊断试剂 稀释液、清洗液、溶血剂, YY/T 0456.15-2014标准已发布,2015.7.1实施WS/T232-2002商业性微生物培养基质量检验规程中国生物制品规程2000版药典2010版生物制品批签发管理办法（局令第11号：2004.7
3、.13实施）体外诊断试剂注册管理办法局令5：2014.6.27发布,2014.10.1实施体外诊断试剂生产实施细则（征求意见稿）3 定义1) 体外诊断试剂体外诊断试剂，是指按医疗器械管理的体外诊断试剂，包括可单独使用或与仪器、器具、设备或系统组合使用，在疾病的预防、诊断、治疗监测、预后观察、健康状态评价以及遗传性疾病的预测过程中，用于对人体样本（各种体液、细胞、组织样本等）进行体外检测的试剂、试剂盒、校准品（物）、质控品（物）等。2 校准品：用来校准、分级或调整一种测定方法的或仪器称为校准品。校准品含有已知量的欲测物，用以校准该测定方法的数值，它与该方法及试剂、仪器是相关联的。校准品的作用是为
4、了减少或消除仪器、试剂等造成的系统误差。因此最好为人血清基质，以减少基质效应造成的误差。它必须来自国家（国际）制品或参考标准品。3）质控品（Control materials）：用于和待测标本同时测定的，为了控制标本的测定误差。质控品根据不同分类方法质控品可分为多种。根据血清物理性状可有冻干质控血清和液体质控血清；根据血清靶值的确定与否可有定值和非定值质控血清；根据血清基质的来源可分为人血清基质、动物血清基质、人造基质质控血清等。质控品一般用于进行试剂的精密度的控制，而校准品则是对试剂的准确度进行控制的。有时二者是不能有效区分的。校准品有时即用来控制精密度，也用于作为控制准确度；即既可用来作校
5、准品使用，也可用于质控品的使用。（校准品都属于制造商提供的检测系统专用的：从来没有任何系统、试剂通用的校准品。）4） 准确度：待测物的测定值与其真值的一致性程度。准确度是由系统误差所决定的。它是反映测定结果的真实性或准确性的尺度。因此，准确度是衡量系统误差大小的客观指标。5） 精密度：一般通过重复性试验计算测定结果间的一致性。分析方法的精密度是由偶然误差决定的。精密度是各测定值与平均值之间的关系，与真实值没有关系。6） 终点法：将样品与一种或多种试剂混合，让其充分发生反应，当生化反应达到平衡状态（即终点）时，测定产物的吸光度，并计算待测样品的浓度。终点法可分为一点终点法和二点终点法。 浓度 终
6、点检测 反应时间(t) 终点法的反应曲线7） 速率法：又称连续检测法、动态分析法或动力学方法，是一种测定底物的消耗或产物生成速度的化学方法。速率法是在反应的线性期进行连续检测，计算出单位时间内的吸光度值。其具体方法有两点速率法和多点速率法。速率法的灵敏度与特异性优于终点法，但终点法比速率法的稳定性高。 浓度 连续检测 反应时间（t）速率法的反应曲线8） 化学纯：化学纯是指一般化学试验用的，满足一般生产或分析试验的试剂纯度，有较少的杂质，不妨您的实验要求。其纯度一般大于99.5%。其瓶签为蓝色。9） 分析纯：分析纯是指做分析测定用的试剂，杂质更少，不妨碍分析测定。一般应用于要求比较苛刻的场所，如
7、医院用的试剂。其纯度一般大于99.7%。其瓶签为红色。10） 吸光光度法（比色法）：吸光光度法是根据溶液中物质对光选择性吸收而进行分析的方法。实践证明，无论物质有无颜色，当一定波长的光通过该物质的溶液时，根据物质对光的吸收程度（吸光度），求出该物质的含量，这种方法称为吸光光度法。吸光光度法可分为比色法和分光光度法两大类。但目前因习惯也把分光光度法称为比色法。（本章的检测方法中也称为比色法）11） 免疫浊度法：主要测定光线通过溶液混悬颗粒后的光吸收或光散射程度的一类定量方法。主要用于免疫检测系统中，常称为免疫浊度法。12） 酶联吸附免疫法（ELISA）： ELISA是以免疫学反应为基础，将抗原、
8、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。酶标记抗体或抗原后，既不影响抗体或抗原的免疫反应，也不改变酶本身的催化活性，在相应的反应底物参与下，标记的酶水解底物而呈色，这种有色物质可以通过肉眼、光学显微镜或电子显微镜进行观察，也可用分光光度计加以测定。比较常用的是ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法。13） 胶体金法：是将抗原或抗体先固定于固体支持物如硝酸纤维素上，在与样品（尿液或血液）中的特异性的抗体或抗原结合后，再与胶体金标记的第二抗体结合，在固定有抗原或抗体的特定区域显色，从而实现对被测抗体或抗原进行特异性检测，属于定性或半定量分析。14） 聚合酶链
9、免疫（PCR）：聚合酶链反应（PCR）是在试管中，能在几小时内使极微量的特定核酸(PCR可用于扩增DNA或RNA)扩增百万倍（106-107），故又称基因扩增技术，其敏感性远远超过包括放射免疫在内的所有血清学检验方法。是目前世界上研究感染性疾病、遗传性疾病的早期诊断和癌细胞基因检测、基因突变的最先进技术。4 体外诊断试剂分类：根据产品风险程度的高低，体外诊断试剂依次分为第三类、第二类、第一类产品。（一）第三类产品：1与致病性病原体抗原、抗体以及核酸等检测相关的试剂；2与血型、组织配型相关的试剂；3与人类基因检测相关的试剂；4与遗传性疾病相关的试剂；5与麻醉药品、精神药品、医疗用毒性药品检测相关
10、的试剂；6与治疗药物作用靶点检测相关的试剂;7与肿瘤标志物检测相关的试剂; （免疫试剂）8与变态反应（过敏原）相关的试剂。（免疫试剂）（二）第二类产品：除已明确为第三类、第一类的产品，其他为第二类产品，主要包括：1用于蛋白质检测的试剂；（生化试剂）2用于糖类检测的试剂；（生化试剂）3用于激素检测的试剂；（生化试剂）4.用于酶类检测的试剂；（生化试剂）5用于酯类检测的试剂；（生化试剂）6用于维生素检测的试剂；（生化试剂）7用于无机离子检测的试剂；（生化试剂）8用于药物及药物代谢物检测的试剂；（生化试剂）9用于自身抗体检测的试剂；（免疫试剂）10用于微生物鉴别或药敏试验的试剂； （免疫试剂）11用
11、于其他生理、生化或免疫功能指标检测的试剂。（免疫试剂）（三）第一类产品：1微生物培养基（不用于微生物鉴别和药敏试验）；2样本处理用产品，如溶血剂、稀释液、染色液等。注1：第二类产品中的某些产品，例如蛋白质、糖类、激素、酶类等的检测，如果用于肿瘤的诊断、辅助诊断、治疗过程的监测，或用于遗传性疾病的诊断、辅助诊断等，则按第三类产品注册管理。在药物及药物代谢物检测的试剂中，如果该药物属于麻醉药品、精神药品或医疗用毒性药品范围，则按第三类产品注册管理。（办法中第13条）注2：对于根据上述分类原则尚无法界定的体外诊断试剂产品，由注册申请人向国家食品药品监督管理局提出分类界定的申请。分类界定申请应当同时提
12、交综述资料、产品说明书、有关同类产品在国内、外的注册管理中分类情况的说明。（办法中第16条）注2：国家法定用于血源筛查的体外诊断试剂、采用放射性核素标记的体外诊断试剂按药品进行管理。（办法中第3条和通知说明）如：1.ABO血型定型试剂（盒）2.乙型肝炎表面抗原（HBsAg）试剂（盒）3.丙型肝炎病毒（HCV）抗体试剂（盒）4.人类免疫缺陷病毒HIV（12型）抗体试剂（盒） 人类免疫缺陷病毒抗原/抗体诊断试剂（盒）5.梅毒螺旋体抗体试剂（盒）6.放免试剂(盒)5、常见的体外诊断试剂的临床检测仪器和检测方法： 序号类型检测仪器检测方法1临床血液、体液检验类试剂镜检、血液细胞分析仪、尿液分析仪等镜检
13、、比色法、阻抗法、干化学分析法（胶体金法）等2临床化学类试剂生化仪、紫外分光光度计等比色法3临床免疫学试剂酶标仪、免疫分析仪等免疫浊度、免疫比色、发光免疫、放射免疫、荧光免疫、ELISA法等4微生物学试剂显微镜、染色、培养基等；镜检、培养等5其他试剂（包括细胞组织学、遗传性疾病、人类基因检测、肿瘤标记物、免疫组化与变态反应原类及生物芯片等）基因技术、流式细胞术、生物芯片等6、体外诊断试剂的一般生产流程：（仅供参考）用于血液分析仪的清洗液、稀释液（即等渗电解质溶液）、溶血剂等生产流程：工艺用水 参数控制 检测 检测领料 配料（投料、化料） 搅拌 过滤 罐装 包装、标识 入库 称量 （或有循环装置
14、，进行混匀）液体生化试剂的一般生产流程： 工艺用水 标识 检验称量 配制 分装 压盖 贴标、装盒 入库 检测 留样冻干试剂的一般生产流程：检测 检验过筛 称量 配制 冻干、分装 压盖、封膜 贴标、包装 入库免疫试剂的一般生产流程： 检测 检验 检验称量 配制 包被 冻干、分装 压盖、封膜 贴标、包装 入库（微珠、蛋白的纯化、免疫印记电泳转膜等以及相应使用的固相载体）培养基制作工艺流程（如营养琼脂培养基等）： 工艺用水冷却至50度左右添加辅料配制 溶解 调PH 分装 湿热灭菌 （是否冷却和是否添加视产品而定） 倾注 冷却 包装 入库检验（质控菌株）试纸生产流程（以尿试纸为例）：原料 加入纯水调合
15、 双面胶 PVC 加入干燥剂 浸渍干燥 裁切 复合 分装装瓶 标识包装滤纸 检验 检验胶体金试纸生产流程：（以早早孕试纸为例） 处理聚酯膜制备金标 点金标 检验 检验 配液 点膜 组装大卡 切割 内外包装 入库贴膜处理样品垫滤纸不干胶7、关键原辅材料用途及特点：1）抗原/抗体：抗原是指能刺激机体免疫系统产生免疫应答而生成抗体和致敏淋巴细胞等免疫应答产物，并能与之发生特异性结合的物质。抗原可分为外来的和自身的两种。抗体是发现机体受外来抗原物质刺激后，能产生一种与该抗原发生特异性结合的物质。抗原抗体常用于免疫试剂的制作，但在其他类试剂中也可加入一定的抗原或抗体原辅料。抗原抗体一般因其活性较强，稳定
16、性差，故一般低温储存。依据其产品的要求，一般于2-8度或-20度左右保存。湿度依据产品的不同和载体的不同，具备不同的湿度要求。要重点关注其来源以及渠道的资质。2）生物活性物质：亦可称生物活性成分,系指动植物、微生物、矿物等各种天然物质内存在的能够影响人类生理活性的物质。如神经介质，细胞因子，氨基酸，酶类，激素，多糖，脂类，维生素，生物碱，生物黄酮类等。 具备生物活性物质，其稳定性差，注意贮存的要求；且在配制过程中，应注意搅拌的速度不宜太快，否则易产生泡沫而失活。3）校准品/质控品:校准品是指含有已知量的欲测物，用以校准该测定方法的数值，它与该方法及试剂、仪器是相关联的。校准品的作用是为了减少或
17、消除仪器、试剂等造成的系统误差。因此最好为人血清基质，以减少基质效应造成的误差。而质控品是指控制标本的测定误差。质控品目前大多也作为仪器的校准品。 质控品和校准品，关注其来源，贮存要求，生产批号，有效期，使用情况，尤其是配产品的质控和校准品的使用情况等4）菌毒种（质控菌株）：用于细菌培养的阳性对照品，也可属于质控品类，所以也叫质控菌株。其产品的特点要关注其贮存的温度，一般贮存于-50度，大于-70度可长期保存。菌毒株的传种一般仅可传种三代，所以要关注其传种情况（依据卫生行业标准WS/T232-2002商业性微生物培养基质量检验规程）。其使用情况一般需具备生物安全柜。菌毒种的销毁应执行国家有关医
18、学微生物菌种保管的规定。5）配方中配料的纯度：对试剂的配方中的化学成分的纯度要求没有明确的规定，但用于体外诊断试剂的配方中的化学成分尽量使用纯度高的，如分析纯。（注：我国目前一般按试剂的纯度分为三级，即一、二、三级，分析纯属二级，化学纯属三级，第一级为优级纯，瓶签为绿色；分析纯的瓶签为红色；化学纯的瓶签为蓝色。）8、体外诊断试剂生产过程中的控制方法简介：1）、调整PH值：生产过程中，若需对配制的液体进行PH监控，其调节的方法一般为：若PH值偏低，用氢氧化钠调整；若PH值偏高，用浓盐酸调节。2）、调整渗透压：生产过程中，若需对配制的液体进行渗透压监控（如生产稀释液），其调节的方法一般为：若渗透压
19、偏低，用氯化钠调整，若渗透压偏高，可加入纯水调整。9、审核要点：序号条款审核中注意问题备注14.2.1应满足与企业产品相适应的体外诊断试剂的国家法律法规文件的要求体外诊断试剂注册管理办法（5号令）如体外诊断试剂注册管理办法、中国生物制品规程、全国临床检验规程等26.2生产和质量的负责人应具有医学检验、临床医学或药学等相关专业知识，有相关产品生产和质量管理的实践经验。从事生产和检验的人员也应具备相关的专业知识背景或从业经验，并经岗前培训合格后上岗。36.31、在生产过程中使用工艺用水的应尽量具备制水设备；工艺用水的水质要求应与生产的产品相适应（如胶体金的工艺用水应电导率0.2s /cm）。并明确
20、工艺用水的储存使用期限。2、使用注射用水的应符合2005版药典中的使用、储存要求；注13、其它特殊要求：A、生产过程中涉及阳性、阴性血清等可疑污染物时应建立阳性隔离室，应采取符合国家生物安全规定的防护措施B、生产过程中涉及细菌、病毒培养和操作时应建立符合要求的专门的细菌/病毒室。涉及细胞培养和处理时，企业也应建立符合要求的独立的细胞室，配置相应仪器、设备。C、进行危险度二级注2及以上的病原体操作应配备生物安全柜，空气应进行除菌过滤方可排出。D、聚合酶链反应试剂（PCR）注3的生产和检定应在各自独立的建筑物中，防止扩增时形成的气溶胶造成交叉污染。其生产和质检的器具应分开、专用，严格清洗和消毒。注
21、1：符合注射用水要求的工艺用水，其储存应采用80以上保温、65以上保温循环或4以下存放。并在制备12小时内使用。注2：二级以上是指只要能对人或动物致病，或同时能影响环境或具传染性的。注3：见概念46.41企业应明确空气净化等级和环境控制要求。A、酶联免疫吸附试验试剂、免疫荧光试剂、免疫发光试剂、聚合酶链反应（PCR）试剂、干化学法试剂、培养基、校准品与质控品等产品生产应在10万级洁净车间进行。B、胶体金类产品、酶类、抗原、抗体和其他活性类组分的配制及分装应在30万级洁净车间进行C、除上述体外诊断试剂产品外，其它的均应在受控环境条件下进行。（在受控环境下的要求由企业自行规定）2、有生物活性的物料
22、其操作应使用单独的空气净化系统，与相邻区域保持负压，排出的空气不能循环使用。3、对空气有干燥要求的操作间（胶体金的制作环境要求相对湿度40%），应配置空气干燥设备，并定期监测室内空气湿度，并有相应记录。57.1风险分析是否考虑了YY/T 0316-2008中的附录B中的体外诊断医疗器械风险分析指南的内容。67.21、应与代理经销商的合同中明确规定对试剂产品在储存、运输过程中的条件要求77.31、设计策划输出文件至少包括：工艺配方、工艺文件、采购文件（自行生产抗原、抗体、质控品、标准品（校准品）等的，应保留对其选择、制备及其质量标准的研究资料,质控品、标准品（校准品）的定值试验资料等）、产品标准
23、、引用标准、检验文件产品包装、包装标识、使用说明书、等。开发过程记录应包括：研发记录、型式检验报告、分析性能评估资料等2、分析性能评估资料，包括产品分析性能和临床性能评估资料；分析性能主要包括分析灵敏度、分析特异性、测定范围、测定准确性、批内不精密度、批间不精密度等（如果委托研制进行性能分析的，应附有委托单位的协议书，并保留相关数据资料；如果此试剂适应不同的机型时，需具备相关机型的数据结果；参考值（参考范围）确定：应详细说明确定参考值（参考范围）所采用的样本来源，说明参考值（参考范围）确定的方法，并提供参考值（参考范围）确定的详细试验资料。）。临床性能主要包括临床灵敏度、临床特异性等的评估（临
24、床试验报告）。3、具有临床资料的需包括：临床试验协议、临床方案、临床相关技术指导原则（另发）、临床报告。4、验证报告：产品主要性能、有效期和开封后有效期（至少三批产品的验证资料）、主要原辅材料及其供方（如分装企业）、内包装材料、生产环境及设施设备、工序、检验；5、生产校准品和质控品的企业应对其贮存条件和储存周期（有效期）进行验证，提供验证报告。明确产品贮存条件和有效期。需进行验证和确认的过程应与企业产品的生产过程相适应；注：临床试验III类的三家试验机构，II类的二家。I类的可不做临床。注：申请体外诊断试剂首次注册，第一类产品一般不需要进行注册检测；第二类、第三类产品应当进行注册检测；第三类产
25、品应当进行连续3个生产批次样品的注册检测。（检测的产品是药监局封样的产品）注：重新注册的产品，如果无任何变化，可不提供检测报告。87.41、关注对重要原材料的进货验证（参见本作业指导书7中的重要物资情况）；有特殊要求的物料（菌毒种、生产用细胞、自行制备抗原或抗体原料、生产用动物源物料）应根据国家相关法规要求进行采购和进货检验。2、若进行试样生产，应有试样生产的管理制度；3、进行分装的企业，应对原供货方的资质进行验证，至少包括：市场准入证、委托书，同时企业必须具备进货检验能力；97.5.11、制定生产所需的工序流程（参考本作业指导书的生产流程）、工艺文件和标准操作规程，明确关键工序，确定质量控制
26、点，并规定应形成的生产记录。2、应对每批产品中关键物料进行物料平衡核查和配料符合性的检查；3、不同种类的试剂产品的生产应做到有效隔离，以避免相互混淆和污染。有数条包装线同时进行包装时，应采取隔离或其它有效防止混淆的措施。前一种产品生产结束必须进行清场，确认合格后才可以入场进行其他生产，并保存清场记录。4、说明书至少应包括：适用机型、技术指标、产品溯源性、抗干扰性、对使用者风险、有效期和开封后有效期。5、仅用于研究、不用于临床诊断的产品其说明书及包装标签上必须注明“仅供研究、不用于临床诊断”的字样。6、产品外包装上的标签必须包括通用名称、生产企业名称、产品批号、注意事项。可同时标注产品的通用名称
27、、商品名称和英文名。通用名称应当符合体外诊断试剂注册管理办法中有关的命名原则。对于体外诊断试剂产品中的各种组份如校准品、质控品、清洗液等，其包装、标签上必须标注该组份的中文名称和批号。如果同批号产品、不同批号的各种组份不能替换，则既要注明产品批号，也要注明各种组份的批号。7、生产企业应当具有与其申请注册产品相适应的技术培训、咨询等售后服务能力107.5.21、应对清洗过程（溶解稀释器具、配制分装器具、管路）、分装过程、包装过程、储运过程、冻干过程、灭菌过程、过程控制用软件等实施确认并保持确认记录；2、规定再次验证和确认的规定；确认的过程应与生产产品的特性相适应。117.5.31、应具备批号管理
28、制度，并核查其可追溯性；2、生产和检验用的菌毒种应建立生产用菌毒种的原始种子批、主代种子批和工作种子批系统。3、大包装分装的有效期应以大包装为准；127.5.51、关注不同原材料、半成品、成品的储运条件的规定和实施：低温储存（2-8）、超低温储存（-20、-50-80）等。2、关注在超低温储存情况下，因停电原因导致的对产品的防护措施。3、与试剂直接接触的设备和器具应保持清洁。不与成分发生化学反应或吸附作用，不会对试剂造成污染。4、需在独立区域或库房保存的产品应符合规定要求。如全血、血浆、动物组织、组织切片、对照用血清样品以及生产中使用的菌株、细胞株、动物应在单独的库区放置。5、生产过程中涉及到
29、放射性元素（如生产放免试剂）或有剧毒物品（如氰化钾）时；应根据国家有关规定采取有效的隔离和防护措施6、生产用细胞应建立原始细胞库、主代细胞库、工作细胞库。应建立细胞库档案资料和细胞操作日志。自行制备抗原或抗体，应对所用原料的来源和性质有详细的记录并可追溯。7、生产用动物应从有资质的单位购买符合要求的动物，应详细记录其来源、种属、清洁等级、健康状况、繁殖、饲养条件，有专人负责饲养和管理。8、交付过程记录建立情况。根据交付记录可追查每批产品的发货情况，应能满足必要时召回要求。137.61、建立质控品、校准品的管理制度和台帐：至少包括采购渠道、规格型号、生产批号、有效期、使用情况等，并满足可追溯性；涉及菌毒种、细胞株等的还应符合其相关国家的法规规定（如销毁）。2、应制定检验设备的校准计划和规程，其内容至少应包括试剂用量、反应条件、校准方法（如果需要）、质控方法、环境要求等（反应系统）；148.2.41、产品的监视和测量应对质控品、校准品、试剂用量、反应条件、检验仪器、工作环境等综合因素下的检测要求并形成作业指导规程；2、依据产品标准制定成品检验规程；关注其性能指标在过程监视和成品检验过程中的符合性； 2、建立留样管理制度，留样数量的准则应至少满足可追溯性和法规的原则；158.3无特殊要求
