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1、猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪肺炎支原体长距离空气传播假设的证实Scott Dee,* Satoshi Otake, Simone Oliveira, and John DeenSwine Disease Eradication Center, University of Minnesota College of Veterinary Medicine, 385C Animal Science/Veterinary Medicine Building 1988 Fitch Avenue St. Paul MN 55108 , USA*Corresponding author: Email: dee
2、xx004umn.edu 本文评估了猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪肺炎支原体通过空气进行长距离传播的方式及能力。利用300头生长育肥猪进行试验，接种猪繁殖与呼吸综合征病毒MN-184毒株和猪肺炎支原体 232毒株，在随后的50天内，利用一个液体气旋收集器在距离试验猪群一定距离处收集空气样品。利用PCR分别检测样品中是否存在PRRSV的RNA以及猪肺炎支原体的DNA，如果结果显示阳性，需要对其做进一步的确定。收集的306份样品中有四份（1.3%）为PRRSV RNA阳性，有六份（1.9%）是猪肺炎支原体DNA阳性。PRRSV阳性样品在距离试验猪群西北方向4.7公里的位置处重新发现。四份猪肺炎支原体样
3、品在西北采样点处获得：其中两份在距离试验猪群大约2.3公里处，另外两份在距离大约4.7公里处。剩余的两份样品中，其中一份在东南方采样点获得，另外一份在西南方采样点获得，这两个位置都距离试验猪群大约4.7公里处。四份PRRSV阳性样品中含具有感染性的病毒，该病毒与试验猪群接种用的MN-184毒株同源性为98.8%。六份猪肺炎支原体阳性样品与猪肺炎支原体232毒株的同源性为99.9%。以上结果证实了之前的假设，即在一些猪群中，重要病原体的长距离空气传播是可以发生的。关键词： 空气 传播 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪肺炎支原体1. 引言家畜病原体通过气溶胶的形式进行远距离传播的能力已经争议了许多年。在
4、一些著作中已经有一些关于远距离空气传播的报道并列出了一定数量的细菌和病毒，包括口蹄疫病毒、伪狂犬病毒以及猪肺炎支原体。关于口蹄疫病毒，利用实际爆发疾病的数据结合疾病建模技术预测，以气溶胶的形式在陆地上能够传播60公里，在海洋地区能够传播100到280公里。类似地，在印第安纳州伪狂犬病毒通过空气传播扩散至10个养殖场，养殖场之间的距离预测在1.3-13.8公里之间。最后，关于猪肺炎支原体在猪场间传播的流行病学研究调查显示，空气传播是一个重要的风险因素，一个养殖场要维持其无猪肺炎支原体状态，与其他感染养殖场之间的距离应为3.2公里。沿着这些思路，能够很好的证明特殊的气候条件对增强微生物在气溶胶中的
5、存活以及增强远距离空气传播具有重要的影响。以口蹄疫为例，已经被计算过，在相对湿度为60%，风速为10 米每秒（m/s）时，病毒能够传播100 公里以上。其他参数被怀疑为该病原空气传播的风险因素，包括增加的云层覆盖率（70到90%）引起的太阳紫外线福照度的下降。德国北部的畜群中分离的伪狂犬病毒同源毒株出现在丹麦南方猪群，在传播期间，以上有影响的各种天气条件均有所呈现，包括一个标记的气流（90%到140%的增加），定向从南到北流动，平均气温高出常温的2到6度，降水量增加以及云层覆盖度增加。在印第安纳州爆发伪狂犬的模型中利用的条件包括从感染养殖场到易感养殖场的定向风，风速在5到6 m/s、低温（低于
6、常温-11到-6），相对湿度为85%，伴有雾或雨形式的降水。最后，关于猪肺炎支原体，空气传播引起的疑似病例数量容易在秋冬季节及凉爽潮湿的天气中有所增加。另一个重要的病原体是猪繁殖与呼吸综合征病毒。在丹麦评估关于PRRSV对母猪群传播的风险因素中，Mortensen指出空气传播是一个频繁的传播方式，由Pitkin等最近验证了一个假设，他证明了以气溶胶的形式传播病毒能够达120米。然而，目前还不能使用关于PRRSV远距离空气传播的数据以及与其相关的气象学条件。Mondaca等人假设主风的存在可能会增强PRRSV在农场之间的移动。然而，尚未得出确切结论。为了更好的理解气候对气溶胶中PRRSV存活的作
7、用，Hermann等报道气溶胶中PRRSV的半衰期的范围：温度为5，相对湿度为17%时193分钟，温度为41，相对湿度为73%时4分钟。此外，利用一个猪生产区的模型，Pitkin等人报道PRRSV在空气中存在的相关条件，包括低速度的定向风、较低的相对湿度以及不断升高的气压。尽管这些信息提供了PRRSV通过气溶胶途径传播及其相关气象条件的初步理解，在得到关于病原潜在的通过气溶胶途径长距离传播的结论之前，仍需要更多的数据。此外，需要关于猪肺炎支原体的类似信息来证实之前研究中所得到的结论。因此，本研究的主要目的是提供关于猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪肺炎支原体长距离空气传播的证据，以及鉴定与这些事件相关
8、的气候条件。本研究是以假设在给予正确的条件下，两个病原长距离空气传播可以发生为基础的。2 材料和方法2.1 试验设计2.1.1 描述试验地点和实验接种 这项研究利用了明尼苏达大学猪病净化中心（SDEC）研究场所以及周围44平方公里，该大学位于美国中西部地区的明尼苏达州。研究场所地势平坦，海拔高度在304到314米之间。土地主要由农田组成，用于种植玉米、大豆和小麦，草地用于牛的放牧，距离SDEC最近的猪场是北方16公里处，而且确定没有猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪肺炎支原体感染。本项研究调查时间超过了50天，2008年9月30日开始， 2008年11月18日结束。在SDEC试验点，生长育肥舍，机械通
9、风，饲养了300头生长育肥猪（25到120千克），作为周围区域PRRSV和猪肺炎支原体气溶胶传播的源头。在研究开始的前两周，在300头猪中抽取60头通过气管接种10 mL猪肺炎支原体232，剂量为每头猪每毫升105变色单位。两周后，取300头中的100头通过鼻粘膜接种2mLPRRSV MN-184，剂量为每头2 104 TCID50 。毒株选择是参照之前的相关研究：该毒株接种的实验猪在气溶胶中排毒的能力和对阴性猪的传播感染率显著较高。接种病毒后，在接毒后的2天，取100头中10头猪采集血液样品，通过PCR检测血液中PRRSV RNA的存在，以确定试验PRRSV成功感染。同样地，确定猪肺炎支原体
10、的感染，在接种的60头猪中取10头，在接种后14天采集鼻拭子，通过PCR检测样品中猪肺炎支原体的DNA。另外，逐日观察PRRSV（体重减轻、直肠温度大于40以及升高的死亡率）和猪肺炎支原体（咳嗽）存在的临床症状。为了维持两个病原在动物群中的循环，3组分别20 头PRRSV和猪肺炎支原体阴性猪每2周引入动物群中一次。每组20头猪中取10头检测血液样品以及引进动物群14天后检测鼻拭子，以验证在研究进行期间病原的传播。在整个研究过程中，按照明尼苏达大学动物福利组织和使用委员会认可的协议对实验动物进行照顾。2.1.2 空气采样方案为了评估猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪肺炎支原体潜在的长距离空气传播，设计了
11、在SDEC周围44平方公里内样品采集的区域，分为16个采样点，分别从中心设施想四个方向覆盖：北方、南方、东方、西方和4个中间方向：西北方、东北方、西南方和东南方。在整个50日研究期间，计划采集样品点为东、南、西、北距离动物群设施为1.7和3.3公里处，西北（NW）、东南(SE)、东北(NE)、西南(SW)在距离动物群设施2.6和4.7公里处（图.1）。距离畜群设施最远的采样点（3.3公里和4.7公里）定义为A，例如NW-A，然而距离设施较近的点定义为B，例如NW-B。利用指定的农场车辆的计程表确定畜群设施到每个采样点的距离，每个采样点用彩色的塑料旗帜标记。每日空气样本在畜群源设施预设的方向进行
12、采样，与主风方向一致。这个决策是以Pitkin等人研究结果为基础的，他们先前证明，当主风从饲养PRRSV感染动物的设施流动时，检测出PRRSV阳性气溶胶的可能性会高出6.4倍。因此，如果主风向是来自西北方向，工作人员应该在畜群源设施下风口在SE-A和SE-B采样处采集空气样本。利用HOBO气象站确定风的方向，气象站位于研究地点，紧邻畜群源设施。关于空气样本的采集，应利用样本大小表格和一个PRRSV或者猪肺炎支原体阳性样本的预计大于等于2%的流行率，空气样本能量为0.8，为0.05，共计算在A距离点一个样本的大小为149个，在B距离点样本的小大也为149个，最终一共298个长距离空气样本。对于采
13、集空气样本，利用一个液体气旋收集器可以每分钟捕捉400升的空气，之前评估用于检测PRRSV在气溶胶中仪器的敏感性发现，其敏感性为1101 TCID50/mL。贯穿整个研究中，每日样本收集的时间段为上午五点到十点，没半个小时采样一次。每日计划在制定的A采样点，从五点到七点采集三到四个样本，在制定的B采样点，从七点十五到九点十五采集三到四个样本。将仪器运送至指定样本采样点，气旋收集器放在农场车辆的驾驶室中，借助一个木质的盒子，将仪器抬高座位25厘米，利用车辆的蓄电池作为动力。车辆驾驶室的大小为高1.5米、宽2米、长1米，能够作为捕获进来气体的场所。在到达样本采集点时，车辆要靠乘客一侧停车，驾驶室正
14、对主风的方向。作为空气的一个入口，乘客一侧的窗户要全部打开，驾驶员一侧的窗户打开大约5厘米作为空气的出口。在30分钟采样过程中，空气微粒子进入气旋收集器的采集器中，用10毫升3%胎牛血清的最低限度基础培养基清洗。在没30分钟样品收集后，每天取5毫升小份基础营养液至于冰上储存，知道所有检测完成。为了将污染风险降至最低，研究人员收集的空气样本中，更换了手套和空气净化器。该仪器是喷洒烷基二甲基苄基氯化铵（来沙尔、利洁时、韦恩、新泽西、美国），利用新鲜的基础培养基清洗收集器，用一次性纸巾弄干，利用无菌涤纶棉签擦拭。拭子储存在无菌的塑料管中，含有3%胎牛血清的基础营养液，储存于冰上。在进行远距离空气采样
15、的同时，每天上午九点半到十点采集畜群源的30分钟空气样本。对于这些样本的收集，气旋收集器要放在畜群源设施的外面，距离指定的排气扇1米。所有的样本储存在-20直到检测。2.1.3 对照研究开始之前，采取一些列的对照验证收集方法成功获得雾化PRRSV(阳性对照)的能力，以及证明在采样过程中机械污染的不足（阴性对照）。对于阳性对照，利用改造的活PRRSV疫苗形成各种不同浓度的人工PRRSV气溶胶。一百毫升疫苗病毒稀释10倍至1升生理盐水，产生浓度范围为1101 TCID50/L to 1107TCID50/L。研究开始之前，通过病毒滴度的方法验证每个稀释度的病毒含量。为了雾化病毒并进入车辆驾驶室，冷
16、雾设施的水槽中充上一升每种浓度的病毒，开始为1101 TCID50。设备设定流速为每分钟200毫升，放在离地面一米的位置，距离车辆一米，管口为45度角。利用一个五分钟释放期，引起一升稀释疫苗雾化。随着雾化病毒的释放，气旋收集器可以运行三十分钟，从收集器中取出一个五毫升的小份储存于20。阴性对照的目的是仅利用盐水将程序重复七次。在整个研究中，设立日常环境对照验证车辆和气旋收集器中不存在残留的遗传物质。在日常采样中，整个车辆的驾驶室会用烷基二甲基苄基氯化铵喷雾消毒，用一次性纸巾擦干。然后收集驾驶室内表面的拭子，包括座位(拭子1个)、方向盘(拭子1个),加速器(拭子1个)、制动器(拭子1个)和仪表板
17、(拭子1个), 以5:1合并作为一个单一的样品检测。驾驶室的窗户关闭，车辆在研究地点的车库内存放过夜。然后，每日采集样本之前，收集一个来自车辆驾驶室的三十分钟样本，验证在驾驶室内不存在残留的PRRSV和猪肺炎支原体。在这个过程中，驾驶室的窗户保持关闭，车辆保持在车库中。最后，在每日采集样本期间，收集的每个三十分钟空气样本之间，前面提及的驾驶室表面和气旋收集器要消毒和擦拭。在每日采样结束期间，车辆重新放回车库，消毒后关闭窗户放置过夜，为次日样本的采集做准备。气旋收集器在最后时间消毒，放于研究地点的房间内过夜。这些程序在整个研究的50日期间每日重复，所有的空气样本和鼻拭子储存于20。2.2 诊断试
18、验2.2.1 PRRSV和猪肺炎支原体聚合酶链式反应在明尼苏达州兽医诊断实验室，利用先前报道过的程序的修订版，将所有空气和鼻拭子样本利用TaqMan定量和聚合酶链式反应实验，检测PRRSV RNA的存在。所用的引物和探针如下：T NA F (ORF 6)上游引物(26个碱基)(53序列: GTAGTYGCRCTCCTTTGGGGGGTGTA), NA F2 (ORF 6)上游引物(33个碱基)(53: TTCATCACYTCCAGRTGCCGTTTGTGCYTGCTA), NA R (ORF 6) 下游引物(18个碱基) (53序列: CGASAAATGCGTGGTTAT)。 EU (ORF
19、7)上游引物(19个碱基)(53:TGGCCAGCCAGT CAATCAA) EU(ORF7)下游引物(21个碱基) (53:TGTGGCTTCTCA GGCTTTTTC) PRRS NA/EU FAM 标记ORF6 TAMRA探针 (22个碱基), (53:FAM-TACATTCTGGCCCCTGCCCAYC-TAMRA),PRRS EU FAM标记ORF7 TAMRA探针(25个碱基)(53:6FAM-TGCAATGATAAAGTCCCAGCGCCAG-TAMRA)。PCR阳性空气样本中具有感染性的PRRSV的数量通过病毒滴度确定，利用Marc-145细胞和8%胎牛血清、抗生素及抗真菌药物
20、。所选的PCR阳性的空气样本的开放式阅读扩5区进行核酸序列测序。序列使用LASERGENE进行组合和分析。在明尼苏达州兽医诊断实验室，同样利用实时PCR检测空气及鼻拭子中猪肺炎支原体DNA的存在。所用的引物和探针如下：上游引物(序列: 5- TTGACTGCTATCTTTGCACGA TAAG-3), 下游引物（序列: 5-ACAATAATTGCTGACCGTGGC-3),和探针(序列: FAM-CAAGAAATCGAATATTTGCAGCAGTGGACA-TAMRA)。PCR阳性样本的DNA再通过P146基因的核酸测序进一步确定基因特点，利用Bionumerics 软件 v.5.1分析P14
21、6序列。2.2.2 猪体生物测定进行猪体生物测定确定在PCR阳性的空气样本中的PRRSV是都具有感染性。取单个样本的上清两毫升，通过内部肌肉注射接种四周龄PRRSV阴性猪，猪独立饲养在SDEC地区的一个高生物安全设施内，避免直接接触。这个设施利用了一个空气过滤系统，MERV比率为16，能够阻止95%直径大于等于0.3微米的颗粒的通过。另外一头猪作为对照，接种无病毒的营养液。在接种后的七日采血，并储存于20，直至检测开始。2.3 收集气象数据利用一个现场HOBO气象站收集气象数据。数据每隔五分钟登记一次。收集的参数包括温度、相对湿度、两种光照强度和在光合有效辐射400-700纳米中的光子、气压、
22、降水、风向、风速以及阵风。后面的参数定义为最高风速创下的记录，每隔五分钟记录一次。为风向提供一个数值，四个主风向和四个中间风向被指定了一个范围，如下：北（平均=0，范围=346到14），东北（平均=45，范围=15到75），东（平均=90，范围=76到104）东南（平均=135，范围105到165），南（平均=180，范围=166到195），西南（平均=225，范围=196到255），西（平均=270，范围=256到284）和西北（平均=315，范围=285到345）。2.4 数据分析收集空气样本的日期为分为具有阳性样本的日期或具有阴性样本的日期。在畜群源水平上，PRRSV阳性日期和猪肺炎支原
23、体阳性日期之间的关系，通过卡方检验检测期其显著性。利用Fisher精确概率测试，检测在畜群源的排风扇处收集的病原阳性空气样本与远距离采样点获得的阳性样品之间的关系。每日收集的时间点上的气候数据进行平均，并与检测的状态进行比较。平均风向不进行分析，而是作为采样的基础风向。利用卡方检验检测风向与PRRSV阳性日期以及猪肺炎支原体阳性日期之间的关系，利用样本T检验比较，PRRSV阳性日期或猪肺炎支原体阳性日期与PRRSV阴性日期或猪肺炎支原体阴性日期之间的气象数据平均变量。3.结果3.1 畜群的评估在接种后的两天，来自接种PRRSV MN-184的猪的10份血液样品，PCR均阳性。另外，在接种猪肺炎
24、支原体的14日后采集的10份鼻拭子中有7份PCR检测阳性。在整个实验过程中，每日评估畜群源的PRRSV临床症状（体重减轻、直肠温度大于40、升高的死亡率），在研究过程中大约有35%的猪存在PRRSV临床症状。大约有46%的动物出现猪肺炎支原体的临床症状（咳嗽），一共有35（12%）头猪在实验期间死亡。在后续进入畜群的动物中观察PRRSV和猪肺炎支原体的流通。这一结论要以在3个组中80%的猪的血液样本中PRRSV RNA的检测结果为基础，猪肺炎支原体要求大于50%的猪样本，在放入后的14日后采集后的鼻拭子，检测其DNA的结果为基础。3.2 空气采样的总结在50日的试验期间，一共采集了356份空气
25、样本，代表大约180小时的采样时间。356份空气样本中有50份来自畜群源的排气扇，17份（34%）PRRSV RNA阳性样本，18份（36%）猪肺炎支原体 DNA阳性样本（表1）。在17份样本中包含PRRSV RNA，感染病毒的平均数量为3.9105TCID50/mL，中间数值为6.0103TCID50/mL，范围为5.2101TCID50/mL到2.9106TCID50/mL。一共收集306个远距离空气样本，4份（1.3%）发现是PRRSV PCR阳性。所有四份样本均在不同的日期获得：十月五日（上午六点半到七点）、十月六日（上午六点到六点半）、十月二十二日（上午五点半到六点）和十一月十一日（
26、上午七点到七点半），所有均在西北采样点，距离畜群源4.7公里的位置处收集（图2）。四份样本均含有感染性PRRSV，病毒含量分别为3.0101TCID50/mL、4.1101TCID50/mL、5.2102TCID50/mL和7.8102TCID50/mL。四份含有感染性PRRSV的样本通过猪体生物检测得到了验证，而在假设接种的对照组中没有发现感染现象。ORF5核酸序列系统进化分析从样本中的子集中获得，包括实验接种猪的血清、畜群源设施排出的废气和在西北采样点获得的鉴定为MN-184的四份样本，与研究第0天接种用的PRRSV MN-184分离株的同源性很高（大于等于98.8%）。在306个远距离收
27、集的空气样本中，有六份猪肺炎支原体PCR阳性（表1）。六份样本均在不同的日期获得：十月五日（上午七点半到八点半）、十月十一日（上午七点半到八点半），十月二十二（上午五点到五点半）、十月二十三日（上午五点半到六点），十一月六日（上午六点到六点半）。四份样本在西北采样点获得，其中两个样本在2.3公里采样点处获得，两个样本在4.7公里采样点处获得。剩余两个样本，其中一个在东南方采样点获得，一个在西南方采样点获得，两个采样点均是距畜群源4.7公里采样点处。这些阳性样本以及畜群源设施中的排气样本的系统进化分析发现与本研究开始接种猪用的猪肺炎支原体232毒株高度同源（99.9%）。3.3 对照阳性对照空气
28、样本，所有七个浓度均PRC阳性，同时所有七个阴性对照空气样本均PCR阴性。在开始采样前，从封闭车辆的驾驶室中收集的空气样本（n=50 每个病原检测50份）均PRRSV和猪肺炎支原体PCR阴性，同时收集的检测驾驶室表面的棉签（n=50 每个病原检测50份）也为阴性。另外，在收集空气样本与样本之间，收集的驾驶室表面的所有棉拭子均为PRRSV和猪肺炎支原体PCR阴性。最后，在收集空气样本与样本之间对气旋收集器消毒表面收集的棉拭子均为PRRSV和猪肺炎支原体PCR阴性（每个样本检测306份）。3.4 总结和分析气象数据在50日研究期间，每日采样期间，风的定向性来源如下：北风（2天，4%）东北风（2天，
29、4%），西北风（21天，42%），东南风（15天，30%），南风（2天，4%）西南风（3天，6%），东风（4天，8%）以及西风（1天，2%）。经卡方检验显示，在畜群源排气扇水平上，PRRSV阳性的日期的样本与猪肺炎支原体阳性的日期样本之间的关联差异显著（P0.001）。利用Fisher精密检测，从排气扇收集的存在PRRSV的空气样本与在4.7公里远距离采样点之间的关联显著（P=0.01）。相反地，在排气扇收集的猪肺炎支原体阳性的日期的样本与远距离采样点（2.3公里与4.7公里结合）猪肺炎支原体阳性的日期的样本之间的关联不显著（p=0.18）。PRRSV阳性的日期仅发生在当西北平均风向时（+20
30、）。当利用卡方分析检测时（p=0.04），这个关联性显著，然而，六份猪肺炎支原体阳性的日期中有四份发生在定向风为西北风（p=0.39）。其他气候变量没有非常强的相关性，但存在的相关性还需进一步的研究。表II和表III显示，针对这些变量，两个样本T检验比较的结果（利用不等方差）。4 讨论本研究的目的是提供了呼吸道两个重要病原的远距离空气传播的诊断依据，总结出这些事件中与其相关的气象数据。关于第一个目的，我们的数据清除地显示了在本研究的条件下，PRRSV和猪肺炎支原体空气传播可以发生，传播距离达到4.7公里，对照结果支持了样本中含有真正的阳性这一事实。而且，在远距离空气样本中检测的PRRSV RN
31、A和猪肺炎支原体DNA与接种实验动物中收集的样本中发现的RNA和DNA高度同源，而且，从饲养动物的设施中排出的空气，提供了一个清楚的暗示空气传播病原的来源。这一结论也被表格1中的数据进一步强调证实了，表格1显示在畜群源设施排风扇处收集的空气存在两种病原之间存在一个显著的相关性，同样在排风扇收集与4.7公里样本采集点采集检测为PRRSV阳性的样本之间也存在显著的相关性。值得注意的有趣的是，在距离畜群源设施4.7公里处收集的4份PRRSV样本均还有活毒。虽然我们能够定量样本中病毒载量，由于我们没有能力在样本采集点饲养动物，以检测感染的证据，因此我们不知道样本是否含有足够的病毒量可以通过气溶胶途径感
32、染动物。然而，如果我们在收集PRRSV阳性气溶胶过程中将报道的气象数据合并，结合以前报道的建立的方程式，以预测PRRSV在气溶胶中的半衰期，在温度为7.1和相对湿度为89%的条件下，感染性PRRSV的半衰期大约为74分钟。而且，在风速为3米每秒的条件下，PRRSV能够在26分钟内潜在移动4.7公里，26分钟大约在T 1/2阶段内。必须指出，我们采集样本的区域非常平坦，畜群源地点（海拔309米）与阳性空气样本采集点在海波上相比没有差别，采集阳性样本:西北（310米）、西南（304米）以及东南（308米）。因此，类似的结果不会发生在其他不同的地形上，例如密集林地或高架地形。 关于第二个目的，进行简
33、单的分析比较检测进行时和不进行时的气候变量。与我们先前报道相比，这些数据组的研究天数和阳性样本数量非常有限，因此限制了可用的分析方法的范围，多变量模型不适于本研究中。尽管如此，一些变量之间的关联程度竟是惊人的高。对于PRRSV，一个较高的风速和可能的较低的光照强度可能会增强传播，暗示PRRSV在气溶胶中的生存能力是有限的，在空气中的时间也是有限的，尤其当暴露于辐射中时。相反地，猪肺炎支原体好像是与较低的光照和温度有更强的关联性。然而，进一步的调查研究是非常必要的，因为许多其他的因素可能会影响传播，例如，畜群源的排毒模式、复杂的地形以及低层大气的稳定性和温度梯度，这些因素在本研究中未进行分析。空
34、气传播可能也解释了为什么PRRSV在2.3公里采样点处检测不到的这一在本研究中一个毫无疑问的假象。总之，本文首次报道了关于PRRSV和猪肺炎支原体远距离空气传播的证据。本研究为猪病兽医师和生产者提供了一个证据，即猪的重大经济意义的病原的远距离空气传播是可能的，鉴定了这些事件与气象条件具有显著的相关性。此刻对于病原是否会传播超出4.7公里采样点的问题尚不能回答，然而，涉及到更远距离的采样和延长采样时期的进一步研究，可能会帮助收集更大的样本数量，来回答这个问题，以及能够促进相关气象条件的更深入地分析。我们希望这些信息可以提高数学模型在评估风险时的预测能力，希望关于猪病原通过空气传播途径进行远距离传
35、播能力的最终结果和更加准确的信息，能够递交至全球养猪行业。图 1. 采样区域图解采样点地图，在采样点收集空气样本，显示与畜群源的关系。标记的A和B采样点分别在畜群源的3.3公里和4.7公里（A点）以及1.7和2.3公里（B点）。表1 在特点采样点处获得的PRRSV和猪肺炎支原体阳性空气样本的日期日期样本畜群源2.3公里4.7公里9-30PRRSV、猪肺炎支原体阴性阴性10-2PRRSV阴性10-4PRRSV、猪肺炎支原体阴性阴性10-5PRRSV、猪肺炎支原体猪肺炎支原体PRRSV10-6PRRSV、猪肺炎支原体阴性PRRSV10-7PRRSV、猪肺炎支原体阴性阴性10-9PRRSV、猪肺炎支
36、原体阴性阴性10-11PRRSV、猪肺炎支原体阴性猪肺炎支原体10-16PRRSV、猪肺炎支原体阴性待添加的隐藏文字内容2阴性10-17PRRSV、猪肺炎支原体阴性阴性10-18PRRSV、猪肺炎支原体阴性阴性10-22PRRSV、猪肺炎支原体阴性PRRSV、猪肺炎支原体10-23阴性阴性猪肺炎支原体11-2猪肺炎支原体阴性阴性11-3猪肺炎支原体猪肺炎支原体阴性11-6阴性阴性猪肺炎支原体11-10PRRSV阴性阴性11-11PRRSV、猪肺炎支原体阴性PRRSV11-12PRRSV、猪肺炎支原体阴性阴性11-13猪肺炎支原体阴性阴性11-15猪肺炎支原体阴性阴性11-16PRRSV、猪肺炎
37、支原体阴性阴性11-17PRRSV阴性阴性图2 描述采样点的位置（西北-A），此采样点处收集到四份PRRSV阳性的空气样本，与畜群源的关系在4.7公里处。图3 描述采样点的位置，在这些采样点处收集到六份猪肺炎支原体阳性的空气样本，与畜群源的关系在2.3或4.7公里处。表2 比较PRRSV阳性和PRRSV阴性采样日期的平均气候变量的结果变量空气样本P值PRRSV（-）PRRSV（+）气压（百帕）9819820.83温度（）3.27.10.4相对湿度（%）88890.83风速（m/s）1.22.90.001阵风（m/s）2.14.60.004光照强度（瓦特/m2）19.07.20.06光照强度在可
38、见光光谱（400-700nm）中测量光子mol/m2/s51.021.00.09降水（mm）2.41037.51030.55表3 比较猪肺炎支原体阳性和猪肺炎支原体阴性采样日期的平均气候变量的结果变量空气样本P值PRRSV（-）PRRSV（+）气压（百帕）9819780.45温度（）3.07.10.01相对湿度（%）88880.96风速（m/s）1.33.00.49阵风（m/s）2.34.30.49光照强度（瓦特/m2）74.320.10.0001光照强度在可见光光谱（400-700nm）中测量光子mol/m2/s54.011.00.0002降水（mm）2.51035.01030.66参考文献
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