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1、免疫组化在病理诊断中的应用,北京友谊医院病理科柳玮华,免疫组化介绍 免疫组化原理 Enlivision染色方法 免疫组化的使用范围各系统肿瘤的抗体表达,免疫组化的原理,根据抗原和抗体特异性反应的免疫学原理，应用标记抗体检测组织中未知抗原的方法。抗原+抗体（标记）抗原抗体复合物通过抗原和抗体的特异性结合检测组织中的化学成分（蛋白抗原）显示系统：抗原抗体复合物+检测系统将二抗和酶通过一个多聚葡聚糖骨架联接成一个多聚体（即EnVision）,Primary Antibody,tissue,Enlivision染色方法,(1)、将切片捞至APES胶片上，放入60温箱中烘烤1小时。(2)、经二甲苯脱蜡，
2、梯度酒精脱水后流水冲洗。(3)、过3 H2O2中20min后流水冲洗。(4)、修复高火3min后，低火15min后，自然冷却至室温。(5)、取出玻片放至湿盒，PBS冲洗，3minx3。擦干玻片，每张玻片加1滴或 50l的第一抗体40min。(6)、PBS冲洗，3minx3。擦干玻片，每张玻片加1滴或50l的聚合物增强剂(试剂A），室温孵育20min。(7)、PBS冲洗，3minx3。擦干玻片，每张玻片加1滴或50l的酶标鼠/兔聚合物(试剂B），室温下孵育30min。(8)、PBS冲洗，3minx3。擦干玻片，每张玻片加2滴或100l的DAB液，显微镜下观察，10min显色。(9)、流水冲洗，苏
3、木素复染1-2min，0.1盐酸分化，自来水冲洗后返蓝。(10)、梯度酒精脱水干燥，二甲苯透明，中性树胶封片。,免疫组化的使用范围,组织学标本中的应用细胞块中的应用,各系统肿瘤的抗体表达,对肿瘤进行来源分类 上皮性肿瘤的标记物 CK 间叶肿瘤的标记物 Vimentin 淋巴造血系统肿瘤的标记物 LCA 神经内分泌肿瘤的标记物 Syn、CgA、CD56各系统肿瘤的抗体表达,上皮性肿瘤中的腺癌,1、软组织,小圆细胞肿瘤,CK Vim EMA LCA NSE CgA Des S-100小细胞未分化癌+-+-神经内分泌癌+-+-+-神经母细胞瘤-+-+-+/-尤文肉瘤/PNET-+-+-+/-胚胎性横
4、纹肌肉瘤-+-+-恶性淋巴瘤-+-恶性黑色素瘤-+-/+-+(HMB45+)CK、Vim、NSE、CgA、Des、HMB45胞浆 EMA 胞膜/胞浆LCA 胞膜S-100 胞核/浆,间皮：EMA、Calretinin阳性横纹肌：Desmin(+)Actin、MyoD1（弱+）Myglobin 血管：CD31、CD34阳性颗粒细胞瘤：S-100、NSE,CD34 Bcl-2 S-100神经纤维瘤+孤立性纤维性肿瘤+-滑膜肉瘤-+-孤立性纤维性肿瘤CD99+滑膜肉瘤CK、Vimentin 双阳,2、乳腺,P63 CK5/6 E-cad 34E12导管原位癌+-+-浸润性导管癌-+-浸润性小叶癌-+
5、P63 胞核CK5/6 胞浆E-cad 胞浆、胞膜34E12 胞浆,乳腺病理,ER、PR显示肿瘤的内分泌表达，与肿瘤的内分泌治疗反应率相关CerbB-2肿瘤相关因子，靶向治疗KI-67显示细胞增殖指数ER、PR 胞核CerbB-2 胞膜KI-67 胞核,中间型上皮 成熟型 CK5/6+,CK8/18+CK5/6-,CK8/18+干细胞CK5/6+,CK8/18-SMA-,P63-中间型肌上皮 成熟型 CK5/6+,SMA+,P63+CK5/6-,SMA+,P63+CK5/6,CK8/18，SMA胞浆P63胞核,CerbB-2的染色意义,阳性强度的判断：强的着色是指4x或10 x物镜下易于观察到
6、，弱的强的着色是指需要用40 x物镜观察。,CerbB-2与治疗及预后的关系,不仅与浸润型乳腺癌的不良预后有关，并能预测多种化疗药机内分泌治疗的敏感性。靶向药物赫赛汀,CerbB-2的染色意义,0+浸润性肿瘤细胞无着色1+任何比例的浸润性肿瘤细胞呈弱而不完整的包膜着色或10%的肿瘤细胞呈弱且完整着色2+10%的肿瘤细胞呈现弱或不一致的、完整的包膜着色；或30%的肿瘤细胞呈现强且完整的包膜着色3+30%的浸润性肿瘤细胞呈强且完整包膜着色,指导治疗,ER,PR,CerbB-2,Ki-67ER+PR+:60-70%的内分泌治疗反应率ER-PR-:10%的内分泌治疗反应率ER+PR-:40%的内分泌治
7、疗反应率ER-PR+:46%的内分泌治疗反应率阳性分级（或阳性细胞数比例）与治疗反应的相关性尚缺乏统一认识,3、消化,CK7-/CK20+胃肠间质瘤CD117，CD34肝 TTF-1 浆阳、Hep、AFPCDX2主要表达于结肠，胃癌和卵巢粘液性腺癌也有表达CD117胞膜/胞浆，CD34胞膜CDX2胞核CK7，CK20，AFP，Hep胞浆,4、泌尿,肾,CK-H CK-L Vimentin E-cad CD10 EMA CD117透明细胞-+-+(膜)+-（乳头状癌）嫌色细胞癌+-+-/+（浆）Hale铁+（嗜酸细胞腺瘤）集合管癌+-Villin-CK-H、CK L、Vimentin胞浆 CD1
8、0胞膜 EMA、CD117、E-cad 胞膜/胞浆,移行上皮：正常CK7阳性，CK20阳性提示肿瘤,5、生殖,卵巢,上皮性肿瘤 CK7+/CK20-，CA125卵巢上皮（+）无性细胞瘤（女性）=精原细胞瘤（男性）Vimentin，PLAP，CD117胚胎性癌 AFP，CD30，PLAP,子宫,HCG HPL合体滋养叶+弱+细胞滋养叶-中间滋养叶+/弱+HCG，HPL胞浆,Vimentin ER CEA子宫内膜样癌+-宫颈癌-+Vimentin胞浆ER 胞核 CEA胞膜/胞浆,前列腺,基底细胞阳性标记：高分子量CK（34E12,CK5/6）P504s 肿瘤性腺泡（+），良性腺泡（-）PSA 前列
9、腺上皮（+）34E12，CK5/6，PSA，P504s胞浆,6、神经内分泌,甲状腺,TG TTF-1 Calcitonin CD56乳头状癌+-滤泡癌+-+髓样癌-+甲状腺乳头状癌Galectin-3，CK19TG、Calcitonin胞浆TTF-1 胞核CD56胞膜,肾上腺,皮质 Mart-1、Syn、NSE、inhibin 阳性髓质 CgA、Syn、CD15阳性Mart-1、Syn、NSE、CgA胞浆inhibin 胞核/胞浆CD15 胞膜/胞浆,7、肺,鳞状细胞癌CK14、CK5/6、34E12和p63；腺癌CK7和TTF-l；神经内分泌癌CD56、CgA、Syn、AE1/AE3、CK18、NSE。卫生部2011肺癌诊疗规范,鼻腔,嗅神经母细胞瘤NSE、Syn、CgA。畸胎癌肉瘤上皮性、间叶性、神经源性都表达一部分,8、神经系统,中枢神经系统,脑胶质瘤GFAP脑膜瘤EMAGFAP胞浆EMA胞浆/胞膜,周围神经系统,神经鞘瘤 S-100（+）神经纤维瘤S-100(+/-)二者的鉴别主要看形态S-100胞核/胞浆,胸腺瘤 器官型（胸腺样）组织特征，常出现（小叶状、血管周腔隙、未成熟的TdT+、CD1a、CD99+的T细胞）胸腺癌 CD5/CD70/CD117+,谢谢！,
