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1、.,1,第十章 巴比妥及苯并二氮杂卓类镇静催眠药物的分析,.,2,主要内容:,药物结构、理化性质鉴别试验杂质检查含量测定体内药物分析,.,3,一、巴比妥类药物的结构分析,基本结构:,1.环状丙二酰脲类2.R1=R2=H时,为巴比妥酸。3.多为巴比妥酸的 5,5-二取代物,少数为1,5,5-三取代物或C2为 硫取代。,第一节 巴比妥类药物的分析,.,4,代表药物:,5,5-二取代,R1 R2,巴比妥,苯巴比妥,戊巴比妥,异戊巴比妥,司可巴比妥(速可眠),.,5,1,5,5-三取代,甲苯巴比妥,.,6,己琐巴比妥,1,5,5-三取代,.,7,硫喷妥钠,C2上S取代,.,8,二、理化性质,.,9,(
2、一)弱酸性,.,10,二级电离:,#19.(五)紫外吸收光谱,.,11,(二)水解反应,红色石蕊试纸变蓝,应用:鉴别巴比妥类药物 JP(15)采用此反应鉴别异戊巴比妥和巴比妥,1、巴比妥类药物,2、巴比妥类药物钠盐,.,12,(三)与重金属离子的反应,1.与银盐的反应,白色沉淀,应用:鉴别、含量测定(Ch.P),巴比妥及苯并二氮杂卓类镇静催眠药物的分析.ppt#23.幻灯片 23,.,13,2.与铜盐的反应(Zwikker试验),.,14,注意:,a.巴比妥类药物呈紫堇色或生成紫色沉淀 鉴别试验(Ch.P),b.含S巴比妥类药物显绿色 硫喷妥特征反应,d.吡啶作用:1)吸收H+使巴比妥类易解离
3、 2)孤对电子生成配位体,c.可区别巴比妥类与硫代巴比妥类药物;5,5-二取代基不同的巴比妥类药物生成 的化合物在氯仿中的溶解度不同,可用 于本类药物的鉴别。,.,15,3.与钴盐反应(Parri试验),紫堇色,应用:鉴别、含量测定,.,16,注意:,反应在无水条件下;溶剂:无水乙(甲)醇,b.钴盐:醋酸钴、硝酸钴或氧化钴,c.碱:以有机碱为好异丙胺,.,17,4.与汞盐反应,.,18,(四)与香草醛反应,丙二酰脲基团中的H,.,19,(五)紫外吸收光谱,#10.幻灯片 10,.,20,.,21,(六)色谱行为,1.TLC2.HPLC,(七)显微结晶,生物样品中微量巴比妥类药物的检验,巴比妥:
4、长方形苯巴比妥:球形 花瓣状巴比妥铜吡啶:十字形紫色苯巴比妥铜吡啶:浅紫色细小不规则或类菱形,.,22,三、鉴别试验,母核的反应本类药物共有的反应,取代基的反应类内区别,.,23,(一)丙二酰脲类鉴别反应母核反应(ChP),1.银盐反应,取供试品约0.1g,加碳酸钠试液1ml与水10ml,振摇2min,滤过,滤液中逐滴加入硝酸银试液,即生成白色沉淀,振摇,沉淀即溶解;继续滴加过量的硝酸银试液,沉淀不再溶解。,取供试品约50mg,加吡啶溶液(1 10)5ml,溶解后加铜吡啶试液1ml,即显紫色或生成紫色沉淀。,2.铜盐反应,巴比妥及苯并二氮杂卓类镇静催眠药物的分析.ppt#12.幻灯片 12,.
5、,24,(二)特殊取代基或元素的鉴别反应,1.芳环反应苯巴比妥及钠盐,(1)硝化反应,黄色,(2)硫酸亚硝酸钠反应(苯巴比妥及钠盐Ch.P),苯巴比妥H2SO4-NaNO2 橙黄色 橙红色,.,25,(3)与甲醛硫酸反应(苯巴比妥及钠盐ChP),2.不饱和取代基的鉴别反应司可巴比妥钠,加成,加成,氧化,.,26,3.硫元素的反应硫喷妥钠(Ch.P),应用:区别硫代巴比妥与巴比妥类,(四)IR,巴比妥及苯并二氮杂卓类镇静催眠药物的分析.ppt#43.幻灯片 43,(三)测定熔点,.,27,四、特殊杂质检查,(一)苯巴比妥的特殊杂质检查 1.酸度副产物苯基丙二酰脲 2.溶液澄清度乙醇不溶性杂质 3
6、.中性或碱性物质副产物、分解产物 4.有关物质-HPLC 主成分自身对照(二)司可巴比妥钠的特殊杂质检查 1.溶液澄清度水不溶性杂质 2.中性或碱性物质副产物、分解产物,.,28,五、含量测定,(一)银量法,1.原理,白色,.,29,2.测定方法 取供试品用甲醇溶解,加入碳酸钠,照电位法,用硝酸银滴定液滴定。,3.终点指示,稍过量的Ag+与巴比妥类药物生成白色浑浊银玻璃电极电位法,.,30,4.举例 异戊巴比妥的测定方法(ChP)取本品约0.2g,精密称定,加甲醇40ml使溶解,再加新鲜配制的3%无水碳酸钠溶液15ml,照电位滴定法,用硝酸银滴定液(0.1mol/L)滴定,即得。每1ml硝酸银
7、滴定液(0.1mol/L)相当于22.63mg的C11H18N2O3。,.,31,5.讨论,(1)化学计量关系:1:1,(2)优点:操作简便、专属性强,(4)Na2CO3的作用,.,32,(二)溴量法,1.原理,Br2(定量过量),1C12H17N2NaO31Br2,.,33,司可巴比妥钠(ChP)取本品约0.1g,精密称定,置250ml碘瓶中,加水l0ml,振摇使溶解,精密加溴滴定液(0.05mol/L)25m1,再加盐酸5m1,立即密塞并振摇1min,在暗处静置15min后,注意微开瓶塞,加碘化钾试液l0ml,立即密塞,摇匀后用硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)滴定,至近终点时,加淀粉指
8、示液,继续滴定至蓝色消失,并将滴定结果用空白试验校正。每lml溴滴定液(0.05mol/L)相当于13.01mg的C12H17N2NaO3。,2.测定方法,.,34,3.讨论,(1)化学计量关系:1:1(2)密塞目的(3)为何在近终点时加指示剂(4)空白试验校正,.,35,(三)酸碱滴定法,1.原理,2.测定方法,(1)水乙醇混合溶剂,滴定剂:氢氧化钠,指示剂:麝香草酚酞,终点颜色:淡蓝色,电位法指示终点,.,36,(2)胶束水溶液 表面活性剂使巴比妥类药物的酸性增强,滴定剂:氢氧化钠,溶剂:有机表面活性剂:溴化十六烷基三甲基苄铵,指示剂:麝香草酚酞,电位法指示终点,(3)非水溶液 巴比妥类药
9、物的酸性增强,有机溶剂:二甲基甲酰铵、甲醇、丙酮等,滴定剂:甲醇钾(钠)、氢氧化四丁基铵,指示剂:麝香草酚蓝,电位法指示终点,.,37,(四)紫外分光光度法,1.原理,巴比妥类药物在碱性介质中电离为具有紫外吸收的结构,2.特点,(1)专属性强,灵敏度高(2)用于巴比妥类药物原料及制剂的含量测定(3)体内药物的检测,.,38,3.测定方法,(1)直接紫外分光光度法,a.根据样品溶液的pH值,选用对应的max b.采用对照品法,计算药物含量,.,39,取装量差异项下的内容物,混合均匀,精密称取适量(约相当于硫喷妥钠0.25g),置500ml量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,量取此溶液用0.4%氢氧化钠
10、溶液定量稀释制成每1ml中约含5g的溶液;另取硫喷妥对照品,加0.4%氢氧化钠溶液溶解并定量稀释制成每1ml中约含5g的溶液。照分光光度法,在304nm波长处测定吸收度,根据每支的平均装量计算。每1mg硫喷妥相当于1.091mg的C11H17N2NaS。,c.举例:,.,40,(2)提取分离后紫外分光光度法 苯巴比妥钠【USP(24)】,可消除干扰物质对测定的影响,.,41,(五)HPLC,RP-HPLCHPLC测定苯巴比妥片的含量(ChP),.,42,六、体内药物分析,RP-HPLC同时测定血清中巴比妥类的浓度GC-MS同时测定人体液中巴比妥药物HPCE法测定体内尿液中巴比妥和苯巴比妥两种药
11、物LC-MS联用技术监测巴比妥类药物,.,43,巴比妥及苯并二氮杂卓类镇静催眠药物的分析.ppt#26.幻灯片 26,苯巴比妥,.,44,第二节 苯并二氮卓类药物的分析 一、基本结构与主要化学性质 1.结构与典型药物:苯并二氮杂卓类药物为含氮杂原子、六元和七元环双并合而成的有机化合物。其中1,4-苯并二氮杂卓类药物是目前临床应用最广泛的镇静剂。,.,45,地西泮(1959年合成)氯氮卓(1955年合成),.,46,奥沙西泮,.,47,2.主要化学性质(1)二氮杂卓环为七元环,环上氮原子具有碱性,苯基的取代使碱性降低,可进行非水滴定法测定;(2)环一般比较稳定,可在强酸性下水解,形成相应的二苯甲
12、酮衍生物,可用于鉴别和比色测定。(地西泮水解生成芳仲胺基和甘氨酸)(3)UV吸收,用于含量测定;(4)本品多为游离碱,不溶于水,而溶于甲醇、乙醇和氯仿中。,.,48,二、鉴别试验(一)化学鉴别 1.沉淀反应生物碱性质 a.氯氮卓和阿普唑仑的盐酸液(91000),遇碘化铋钾试液,生成橙红色沉淀。b.盐酸氟西泮的水溶液和氯硝西泮的稀盐酸溶液遇碘化铋钾试液,也生成橙红色沉淀。c.阿普唑仑的盐酸溶液(91000),遇硅钨酸试液,生成白色沉淀。,.,49,2.硫酸荧光反应 苯并二氯杂卓类药物溶于硫酸后,在紫外光(365nm)下,呈现不同颜色的荧光。,地西泮 黄绿色 黄色 氯氮卓 黄色 紫色 艾司唑仑+H
13、2SO4 亮绿色+稀硫酸 天蓝色 硝西泮 淡蓝色 蓝绿色 奥沙西泮 淡黄绿色,.,50,3.水解后呈芳伯胺反应 氯氮卓、艾司唑仑和奥沙西泮的盐酸溶液(12),缓缓加热煮沸,放冷,加亚硝酸钠和碱性-萘酚试液,生成橙红色沉淀,而后者放置色渐变暗。,.,51,4.分解产物的反应 有机氯化合物,用氧瓶燃烧法破坏,生成氯化氢,以5氢氧化钠溶液吸收,加硝酸酸化,显氯化物反应。5.氯化铜焰色反应 含氯的药物,在铜网上燃烧发出氯化铜的绿色火焰。此反应药典未用于本类药物鉴别。,.,52,(二)紫外特征吸收和红外吸收光谱,.,53,(三)色谱法 TLC HPLC,.,54,三、特殊杂质的检查(一)有关物质检查 1
14、.氯氮卓中有关物质的检查 USP(24):薄层色谱法(杂质对照品法)BP(2003):薄层色谱法(高低浓度对比法、杂质对照品法)ChP:HPLC法(杂质对照品法、主成分自身对照法)溶液的澄清度控制中间体等水不溶性杂质 2.三唑仑中有关物质的GC法(USP),.,55,(一)非水溶液滴定法 是国内外药典采用较多的含量测定方法。对于:a.在水溶液中不能滴定的化合物,一些很弱的酸、碱以及某些盐类,在水溶液中进行滴定时,没有明显的滴定突跃,终点难于掌握;b.在水溶液中不溶的化合物,有些有机化合物在水中溶解度很小,以水作为滴定介质受到一定的限制。,四、含量测定,.,56,1.定义 非水滴定:在水以外的溶
15、剂中进行的酸碱滴 定分析方法。,(1)酸性溶剂:有机弱碱在酸性溶剂中可显著地增强相对碱度。(2)碱性溶剂:有机弱酸在碱性溶剂中可显著地增强相对酸度。(3)两性溶剂:具有酸、碱性能,如methanol。(4)惰性溶剂:没有酸、碱性的溶剂,丙酮、氯仿。,.,57,2.应用讨论(1)适用范围 pKb为813的弱碱性药物可用本法滴定。一般来说,当Kb为1081010时,宜选冰醋酸作溶剂;Kb为10101012时,宜选用冰醋酸与醋酐的混合溶剂作溶剂;Kb1012时,应用醋酐作溶剂。另外,在冰醋酸中加入不同量的甲酸,也能使滴定突跃显著增大,使一些碱性极弱的杂环类药物获得满意测定结果。,.,58,(2)终点
16、指示方法 常用电位法和指示剂法。指示剂:橙黄、萘酚苯甲醇、喹哪啶红、孔雀绿 电位法:玻璃电极-饱和甘汞电极 常用指示剂为结晶紫 结晶紫酸式色为黄色,碱式色为紫色。由碱区到酸区的颜色变化为:紫、蓝、蓝绿、绿、黄绿、黄。指示剂的终点颜色变化,需要电位法来确定。,.,59,3.应用实例 尼可刹米、地西泮及氯氮卓 药物的碱性强弱不同,测定时所采用溶剂、指示剂及其指示终点的方法也不尽相同。药物名称 取样量(g)溶 剂 指示剂 终点颜色 尼可刹米 0.15 冰醋酸10ml 结晶紫 蓝绿色 地西泮 0.2 冰醋酸、酸酐10ml 结晶紫 绿色 氯氮卓 0.3 冰醋酸10ml 结晶紫 蓝色,.,60,(二)紫外分光光度法 对照品法 吸收系数法,(三)高效液相色谱法,RP-HPLC,.,61,五、体内苯并二氮杂卓类药物的分析,HPLC LC-MS/MS P289,.,62,学习要求:1.掌握巴比妥类及苯并二氮杂卓类药物的主要结构和理化性质。2.掌握巴比妥类及苯并二氮杂卓类药物的鉴别试验原理。3.掌握本类药物含量测定的银量法、溴量法、非水溶液滴定法、紫外分光光度法,熟悉本类药物的其他含量测定方法。4.熟悉本类药物的鉴别试验和特殊杂质检查方法。5.了解本类药物的体内药物分析方法。,