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1、遗传学实验,实验5 小白鼠骨髓细胞染色体制片,指导老师：舒海燕,第5组：刘玄、南文浩、潘 哲、赵占超,这些是老鼠吗？,可爱不？,其实：小白鼠也很可爱哟,为什么通常都用小白鼠做科学实验？,1.哺乳动物，基因和人类接近 2.价格便宜，容易饲养，生活条件不高。3.种系纯，容易作比较，可以排除不同种系的干扰因素4.性格温顺，抓持方便，操作简单5.药物试剂等，腹腔注射，吸收效果良好，不用行血管注射（兔子和狗都要静脉或动脉注射）6.体积小，便于运输和实验，可以在室内大量饲养（一般随便弄上几百个没有问题，换乘其他动物，占地太大了。）,一：实验目的,1、学习并掌握动物骨髓细胞染色体标本制备的原理和基本过程。2
2、、观察小白鼠染色体的数目和形态。,二、实验原理,1.染色体是基因的载体。真核细胞染色体的数目和结构是重要的遗传指标之一。制备染色体标本是细胞遗传学最基本的技术，优良的染色体制片是进行染色体显带、组型分析、原位杂交等的先决条件。2.染色体的制备在原则上可以从所有发生有丝分 裂的组织和细胞悬浮液中得到。最常用的途径是从骨髓细胞、血淋巴细胞和组织培养的细胞中制备染色体。,3.小型动物的染色体制片最好最有效的材料就是骨髓组织。4.骨髓细胞中，有丝分裂指数相当高，因此可以直接得到中期细胞而不必象淋巴细胞或其它组织那样要经过体外培养。因此，仅给以一定剂量的秋水仙素就可使许多处于分裂状态的细胞被阻断在 有丝
3、分裂中期。5.对大型动物通常采用对骼骨、脊或胸骨穿刺术吸取红骨髓，小型动物多采用剥离术取股骨以获得骨髓细胞。,三、实验材料,2月龄的健康小白鼠（Mus musculus,2n=40）,四、实验器具和药品,1.器具：显微镜、离心机、载玻片、盖玻片、10ml离心管、吸管、吸水纸、注射器、恒温水浴锅、剪刀、解剖刀、解剖板、镊子、培养皿、废液缸。2.药品：0.075mol/L KCl溶液、甲醇、冰醋酸、Giemsa染色液、0.01%秋水仙素溶液,五、实验步骤,1.预处理：选取体重2030g小鼠一只，按3微克秋水仙素/g小鼠体重的量腹腔注射秋水仙素，34h后用断髓法处死小鼠。,用右手抓住小鼠尾巴，以左手
4、拇指及食指抓其颈背部皮肤，使小鼠仰卧于无名指和中指间，再以小指与无名指夹住小鼠尾巴。,抓小鼠的方法,颈椎脱臼法处死小鼠,2.取股骨：从髋关节处断其后腿，取下完整的股骨并剔净其上的肌肉，置生理盐水中。,14股骨 15髌骨16腓骨 17胫骨,剖出股骨，剔净股骨上的肌肉,3.低渗：将股骨剪断45节，放入含有5ml 37 预热的0.075mol/L KCl溶液的离心管中，用吸管吸打细胞悬液后置37水浴中低渗25min。4.离心：去掉骨头并以8001000rpm离心6min，弃上清液。（要小心，避免骨髓的损失）5.固定：加新配置的3:1甲醇冰醋酸固定液4ml,用吸管吹打成细胞悬液，室温下静置固定20mi
5、n。6.离心：以8001000rpm离心6min，弃上清液。7.固定：加1ml固定液，用吸管吹打成细胞悬液。,8.滴片：取出在洁净冰水中预冷的载玻片并放在桌面，稍倾斜。立即用吸管吸取13滴细胞悬液，从载玻片上方适当高度处滴到载玻片上，并对载玻片上的细胞悬液吹气，将细胞悬液吹散均匀，然后置于空气中自然干燥。,滴片操作,9.染色：载玻片充分干燥后，平放，用新配置的1:10的Giemsa磷酸缓冲液滴加在载玻片上，染色10min，然后流水缓缓冲去多余染液，盖上盖玻片，再用吸水纸吸干多余水分，晾干后即可镜检。10.镜检：制备好的染色标本片置于显微镜低倍镜下观察，选择染色体形态较好、分散适中的分裂相移至视
6、野中央换油镜观察。,11.小白鼠染色体形态观察：小白鼠染色体较小，呈“V”形。观察完毕，清洁油镜头。,小鼠骨髓细胞中期分裂相图,实验结果,问题与思考,1：两次向细胞悬液中加入固定液（3：1甲醇冰醋酸）的作用？2：载玻片为什么要提前预冷？3：低渗步骤中 37摄氏度预热的KCL渗透液的作用？,1、第一次固定可以使细胞表面轻微固定，以防止细胞结团。第二次固定，为了除去染色体中的蛋白质，使得染色体分散良好清晰可见，在实验中如果发现分散不够好，可采取延长固定时间或用甲醇：冰醋酸=3:1再固定一次可以改善染色体分散情况。2、目的使细胞核染色体更容易分散 3、目的是使低渗液在一定温度、一定时间内渗入细胞内，使细胞涨大，细胞膜变薄，在滴片时细胞才能破裂，染色体才能平铺在载玻片上。,谢谢大家欣赏,
