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1、蔬菜中农药六六六、DDT的残留分析摘 要 六六六、滴滴涕为高效广谱有机氯杀虫剂，具有化学性质稳定、易于在生物体内蓄积，在环境中残留半衰期长等特点，现已被禁用。该类化合物为我国蔬菜中农药残留的主要检测品种。运用气相色谱法和薄层色谱法对蔬菜中农药六六六、滴滴涕的残留进行分析。气相色谱法利用1电子捕获检测器对于负电性强的化合物具有较高的灵敏度, 可分别测出微量的六六六和滴滴涕，并对不同异构体和代谢物可同时分别测定。而薄层色谱法是根据样品处理后于硝酸银显色，经紫外线照射生成棕黑色斑点的特点，可分别测出蔬菜中微量的六六六和滴滴涕。关键词 六六六 滴滴涕 测定方法 气相色谱法 薄层色谱法前言 农业产业化的
2、发展使农产品的生产越来越依赖于农药、抗生素和激素等外源物质。我国农药在农产品中的用量居高不下，而这些物质的不合理使用必将导致农产品中的农药残留超标，影响消费者食用安全，严重时会造成消费者致病、发育不正常，甚至直接导致中毒死亡。农药残留超标也会影响农产品的贸易，世界各国对农药残留问题2高度重视，对各种农副产品中农药残留都规定了越来越严格的限量标准。农药会进入河流,湖泊和池塘污染水源，令水质变酸,导致在水中生活的生物生病和死亡，尤其对鱼类和两栖类动物的影响最严重。农药可分为有机磷农药、氨基甲酸酯类农药、拟除虫菊酯类农药、有机氯农药。有机磷农药3是广谱杀虫剂，应用广泛，主要有乐果、敌百虫、敌敌畏、内
3、吸磷、对硫磷、马拉硫磷等60余种。有机磷不稳定，挥发性强，在自然环境容易分解,进入生物体内易被酶分解，故不污染环境，在食物中残留时间也短，因此慢性中毒少，急性中毒多。氨基甲酸酯类农药4是应用很广的新型杀虫剂与除草剂，如杀螟威、西维因、残杀威等，其毒性跟有机磷相似，但毒性较轻，恢复也快。拟除虫菊酯类农药主要有氯氰菊酯 (灭百可)、溴氰菊脂(敌杀死)、杀灭菌脂(速灭杀丁)等，对人类低毒，但有蓄积性，中毒表现症状为神经系统症状和皮肤刺激症状。农药六六六、DDT属于有机氯农药5，已被我国禁用，但至今仍有违规使用的情况，尤其林丹、七O五四、毒杀芬、氯丹等仍继续使用。有机氯脂溶解性强，不易水解和降解，非常
4、稳定，聚集于人体脂肪，在自然和食物中能长期残留，停用后自然环境要经25110年才能复原。食物受有机氯污染常是从水体中经浮游生物吸食开始，鱼虾吃浮游生物，最终进入水鸟、人体，其富集可提高到800万倍。果蔬及粮、谷、茶、烟草都可残留有机氯，禽、鱼、蛋、奶等动物性食物污染率高于植物性食物，而且不会因其贮藏、加工、烹调而减少，很容易进入人体积蓄。有机氯农药可致急性或慢性中毒。急性中毒引发中毒者中枢神经症状。因其积蓄在人体脂肪，故急性中毒性低、症状轻，一般为乏力、恶心、眩晕、失眠；慢性中毒可造成人的肝、肾和神经系统损伤，DDT还有致癌性。 目前农药残留快速检测方法种类繁多，被列为国家推荐标准方法（GB/
5、T 5009.199-2003）6的生化测定法中的酶抑制率法由于具有快速、灵敏、操作简便、成本低廉等特点，已成为对果蔬中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留进行现场快速定性初筛检测的主流技术之一，得到了越来越广泛的应用。而色谱法对蔬菜中六六六、滴滴涕残留的检测具有结果准确、灵敏度高的优点。蔬菜中六六六、DDT残留的检测方法：气象色谱法和薄层色谱法。六六六也叫六氯环己烷，生产原料为苯和氯气，六六六的分子组成有6个碳、6个氢、6个氯，故称为六六六。由于各原子空间排列位置不同，有八种异构体7，分别为甲体、乙体、丙体、丁体、戊体、己体、庚体、辛体。其中丙体具有杀虫作用，不过丙体只占原粉的14%-15%，乙体不
6、易分解，丁体对植物毒害最大。六六六原粉在120摄氏度时开始分解。六六六是一种广谱性的杀虫剂，主要对象时咀嚼和刺吸口器害虫。它可用来防治水稻、经济作物、水果、蔬菜等多种害虫。如水稻三化螟、稻苞虫等。六六六也是一种重要的土壤杀虫剂用于防治蝼蛄，地老鼠、金针虫等。滴滴涕8（DDT）化学名称为二氯二苯基三氯乙烷，也有几种异构体，化学性质较稳定，分解缓慢，可溶于脂肪，一旦进如人体，就很难排除，可在肝脏中积累中毒，也可通过食物链中毒，滴滴涕在土壤中可维持十至十五年不分解，所以造成各种动、植物食品存在农药残留问题。9 1气相色谱法 1.1原理 样品中六六六、滴滴涕经提取、净化后用气相色谱法测定，与标准比较定
7、量。电子捕获检测器对于负电性强的化合物具有较高的灵敏度10, 利用这一特点, 可分别测出微量的六六六和滴滴涕。不同异构体和代谢物可同时分别测定。1.2试剂 使用的试剂一般为分析纯, 有机溶剂需经重蒸馏。丙酮；乙醚；95%乙醇；石油醚: 沸程为3060；苯；无水硫酸钠；草酸钾； 硫酸；2%硫酸钠溶液；过氯酸-冰乙酸混合液:1:1。六六六、滴滴涕标准溶液:精密称取甲、乙、丙、丁六六六四种异构体和、-666、p,p-DDT、p,p-DDD、p,p-DDE、o,p-DDT滴滴涕的六种异构体各10mg,溶于苯,分别移入100ml容量瓶中,加苯至刻度, 混匀,每毫升含农药100g,作为贮备液存于冰箱中。六
8、六六、滴滴涕标准使用液:临使用时各吸取2.0ml,分别移入10ml容量瓶中, 各加苯至刻度, 混匀。每毫升应相当与农药20g。在用气相色谱法测定时，根据仪器灵敏度还需以己烷稀释至适宜浓度，一般为0.01g/ml。载体: 硅藻土, 80100目, 气相色谱用。固定液:OV-17及QF-1。1.3 仪器 小型粉碎机或小型绞肉机；分样筛 ；组织捣碎机；电动振荡器 ；恒温水浴锅。气相色谱仪：具有电子捕获检测器。1.4 操作方法 1.4.1提取 蔬菜: 称取200g样品，置于捣碎机中捣碎12min(若样品含水分少，可加一定量的水)。称取相当于原样50g的匀浆，加100ml丙酮,振荡lmin, 浸泡1h，
9、过滤。残渣用丙酮洗涤三次,每次10ml，洗液并入滤液，置于500ml分液漏斗中，加80ml石油醚，振摇1min，加200ml2硫酸钠溶液，振摇1min，静置分层,弃去下层。将上层石油醚液放在有15g无水硫酸钠的漏斗,滤入另一分液漏斗中，再以少量石油醚分数次洗涤漏斗及其内容物，洗液并入滤液中，并以石油醚稀释至100ml。111.4.2 净化 于100ml样品石油醚提取液中加10ml硫酸(提取液与硫酸体积比为10:1)。振摇数下后，将分液漏斗倒置，打开活塞放气，然后振摇半分钟，静置分层。弃去下层溶液，上层溶液由分液漏斗上口倒至另一只250ml分液漏斗中，用少许石油醚洗原分液漏斗后，并入250ml分
10、液漏斗中，加100ml2硫酸钠溶液，振摇后静置分层。弃去下层水溶液，用滤纸吸除分液漏斗颈内外的水。然后将石油醚放在盛有15g无水硫酸钠的漏斗中过滤，并以石油醚洗涤盛有无水硫酸钠的漏斗数次。洗液并入滤液中，以石油醚稀释至一定体积，供气相色谱法用。经上述净化步骤处理过的样液，如在测定时出现干扰，可再以硫酸处理。 1.4.3色谱条件 氚源电子捕获检测器；气化室温度：190；色谱柱温度: 160。检测器温度: 165； 载气(氮气)流速：60ml/min。极化电压: 30V；Ni63电子捕获检测器；气化室温度：215；色谱柱温度：195。检测器温度：225；载气(氮气)流速：90ml/min。色谱柱：
11、内径34mm，长1.22m的玻璃柱，内装涂以1.5OV17和2QF1的混合固定液的80100目硅藻土。1.5测量与计算 电子捕获检测器的线性范围狭窄，为了便于定量，选择样品进样量使之适合各组分的线性范围。根据样品中六六六、滴滴涕存在形式，相应地制备各组分的标准曲线，从而计算样品中的含量。六六六、滴滴涕及其异构体或代谢物含量按下式计算:A11000X1 = M1 V2/V1 1000式中:X1样品中六六六、滴滴涕及其异构体或代谢物的单一含量,mg/kg; A1被测定用样液中六六六或滴滴涕及其异构体或代谢物的单一含量，ng; V1样品净化液体积，ml；V2样液进样体积，l。 m1样品质量，g。2薄
12、层色谱法2.1原理 样品中六六六、滴滴涕经用有机溶剂提取，并经硫酸处理，除去干扰物质，浓缩，点样展开后，用硝酸银显色，经紫外线照射生成棕黑色斑点，与标准比较，可概略定量。2.2试剂 丙酮；乙醚；95%乙醇；石油醚: 沸程3060；苯；无水硫酸钠；草酸钾；硫酸；2%硫酸钠溶液；过氯酸-冰乙酸混合液:1:1。六六六、滴滴涕标准溶液:精密称取甲、乙、丙、丁六六六四种异构体.和、-666、p,p-DDT、p,p-DDD、p,p-DDE、o,p-DDT滴滴涕的六种异构体各10mg,溶于苯,分别移入100ml容量瓶中,加苯至刻度, 混匀, 每毫升含农药100g,作为贮备液存于冰箱中。氧化铝G:薄层色谱用；
13、1硝酸银溶液。硝酸银显色液：称取硝酸银0.05g溶于数滴水中，加苯氧乙醇10ml，用丙酮稀释至100ml，加30过氧化氢溶液10l，混合后贮于棕色瓶中，放冰箱内保存。2.3仪器 小型粉碎机或小型绞肉机；分样筛；组织捣碎机；电动振荡器；恒温水浴锅；气相色谱仪：具有电子捕获检测器。脂肪提取器: 60ml,圆底烧瓶改制成尖底,并有刻度。全玻璃浓缩器；薄层板涂布器；玻璃板：520cm。展开槽: 内长25cm、宽6cm、高4cm ；玻璃喷雾器。紫外线杀菌灯: 15W ；微量注射器或血色素吸管。2.4 操作方法2.4.1提取 蔬菜: 称取200g样品，置于捣碎机中捣碎12min(若样品含水分少，可加一定量
14、的水)。称取相当于原样50g的匀浆，加100ml丙酮,振荡lmin, 浸泡1h，过滤。残渣用丙酮洗涤三次,每次10ml，洗液并入滤液，置于500ml分液漏斗中，加80ml石油醚，振摇1min，加200ml2硫酸钠溶液，振摇1min，静置分层,弃去下层。将上层石油醚液倒入盛有15g无水硫酸钠的漏斗,滤入另一分液漏斗中，再以少量石油醚分数次洗涤漏斗及其内容物，洗液并入滤液中，并以石油醚稀释至100ml。2.4.2净化 于100ml样品石油醚提取液中加10ml硫酸(提取液与硫酸体积比为10:1)。振摇数下后，将分液漏斗倒置，打开活塞放气，然后振摇半分钟，静置分层。弃去下层溶液，上层溶液由分液漏斗上口
15、倒至另一250ml分液漏斗中，用少许石油醚洗原分液漏斗后，并入250ml分液漏斗中，加100ml2硫酸钠溶液，振摇后静置分层。弃去下层水溶液，用滤纸吸除分液漏斗颈内外的水。然后将石油醚倒入盛有15g无水硫酸钠的漏斗过滤，并以石油醚洗涤盛有无水硫酸钠的漏斗数次。将全部溶液浓缩至1ml，进行薄层色谱测定。经上述净化步骤处理过的样液，如在测定时出现干扰可再以硫酸处理。2.4.3测定 薄层板的制备称取氧化铝G4.5g,加1ml1硝酸银溶液及6ml水，研磨至成糊状，立即涂在三块520cm的薄层板上,涂层厚度0.25mm，于100烘0.5h，置于干燥器中，避光保存。2.4.4点样 离薄层板底端2cm处，用
16、针划一标记。在薄层板上点10l样液和六六六、滴滴涕标准溶液，一块板可点34个。中间点标准溶液两边点样液。也可用滤纸移样法点样。2.4.5展开 在展开槽中预先倒入10ml丙酮-己烷(1:99)或丙酮-石油醚(1:99)溶液。将经过点样的薄层板放入槽内。当溶剂前沿距离原点1012cm时取出,自然干燥。2.4.6显色 将展开后的薄层板喷以10ml硝酸银显色液,干燥后距紫外光灯8cm处照1020min，六六六、滴滴涕等应该全部显现棕黑色斑点。2.5 计算X2= M2V4/ V3 1000待添加的隐藏文字内容2式中：X2样品中六六六、滴滴涕及其异构体或代谢物的单一含量，mg/kg;V3样品浓缩液总体积，
17、ml;V4点板样液的体积，ml；m2样品质量,g。结论随着科技的发展我国农产品越来越依赖于农药、抗生素和激素等外源物质。而这些物质的不合理使用必将导致农产品中的农药残留超标，影响消费者食用安全，严重时会造成消费者致病、发育不正常，甚至直接导致中毒死亡。尤其是禁用农药残留对环境人类健康影响更不能忽视，采用气相色谱法和薄层色谱法可以对蔬菜中残留有机氯农药六六六、滴滴涕进行检测。色谱法的优点是：应用范围广，能分析气体、液体和固体；灵敏度高，可测定微量物质，可进行mg级的定量分析，进样量可在1mg以下；分析速度快，仅用几分钟至几十分钟就可完成一次分析，操作简单；选择性高，可分离性能相近物质和多组分混合
18、物。另外，在操作上稍有失误不会损伤仪器、试祥分析费用低等特点。参考文献 1.林秋萍,贾斌,王铁良,郭丽萍.气相色谱法测定蔬菜中多种农药残留J. 河南农业科学. 2003(10) 2.王钟.气象色谱-质谱法测定蔬菜中有机磷农药和氨基甲酸酯类农药残留的研究D.山东大学20103.邹继红，季光辉，王静，赵春杰.蔬菜中有机氯和拟除虫菊酯农药残留量的测定. J沈阳药科大学学报.2007（03）4 李萍.氨基甲酸酯农药残留分析方法J. 国外医学(卫生学分册). 1999(06)5.张茂升，龚丽芬，余彬彬，曾景斌，袁宁，陈曦.超声波提取-超声波辅助固相微萃取色谱法测定蔬菜水果中有机氯、菊酯类农药残留分析J.
19、分析实验室.2008（04）6.张鑫,冯利青,刘岩.我国果蔬农药残留速测技术综述J. 郑州轻工业学院学报. 2005(04)7张超兰,汪小勇,姜文,廖荣胜,黄锋.有机氯农药六六六污染土壤的植物修复研究J. 生态环境. 2007(05)8.徐红,熊素玉.果蔬汁中六六六、滴滴涕含量测定浅析J. 中国质量技术监督. 2010(02)9.程雪梅.毛细管气相色谱法测定食品中六六六、滴滴涕农药残留J. 热带农业工程. 2003(01) 10.曾小星,万益群,谢明勇.气相色谱-电子捕获检测器同时测定茶叶中有机氯及拟除虫菊酯类农药残留J. 分析科学学报. 2008(06)11.郜红建，蒋新，常江，张自立.加速
20、溶解提取-气象色谱法测定蔬菜中的有机氯农药J.生态环境.2007（01） 致 谢在大学的学习过程中，毕业设计是两年多学习的总结和提高，是反映出自己所具有的专业基础知识和分析解决问题的能力。此次毕业设计是我们从大学毕业生走向未来工作重要的一步。在准备其间，查找资料，老师的指导，与同学的交流，反复的修改，每一个过程都是对自己能力的一次检验和充实。在此期间，我阅读了大量的相关资料，一方面是为毕业设计做准备，另一方面增加了自己的知识储备。一次实验的设计对启发我们的思维，对掌握实验设计的规范、流程、具体操作都很有帮助。所以通过这次的毕业设计，我也了解到了自己的很多不足，在今后的工作与学习中，我会不断的提高与改进。这次的农药残留分析的设计实验中我受益匪浅收获，学到了在许多书本上不可能收录的东西。例如一些设计的具体的规范，和一些实验的要求。如何把规范里的明文规定运用到实际上去，以及运用过程中的把握上。也学到了如何独立思考，如何自己查阅资料，如何与人相处融洽等实际经验。在此，感谢老师的细心指导和在生活与学习上的帮助，也谢谢老师给我们这样的锻炼机会。
