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1、第五章 植物检验检疫技术,第一节 常规检验检疫技术一、现场检验检疫技术1、直接检查：利用肉眼或放大镜注意有无害虫的排泄物、脱皮壳、卵、幼虫、蛹、茧和成虫诸虫态以及食痕和危害状等。,第五章 植物检验检疫技术,第一节 常规检验检疫技术一、现场检验检疫技术2、过筛检验：取样携回室内进行过筛检验，按粮谷、油料、豆类颗粒形状和大小，选用不同孔径的规格筛,第五章 植物检验检疫技术,第一节 常规检验检疫技术一、现场检验检疫技术2、过筛检验：将需用的筛层，按筛孔大小顺序套好(小筛孔放在下面)，将样品放人上层选筛内(不宜过多，约达筛层高度的23)，套上筛盖，电动或手动回旋转动一定时间后，按筛层将筛上物和筛下物分
2、别倒入白瓷盘中，用扩大镜或解剖镜检查，检出昆虫和螨类，同时还可检出虫粒、病粒、杂草籽和其它夹杂物。若检查时室温低于10，最下层筛出物须在2030下处理1520min，促使害虫活动，再行检查。,第五章 植物检验检疫技术,第一节 常规检验检疫技术一、现场检验检疫技术3、软X光透视检测4、检疫犬检查,第五章 植物检验检疫技术,第一节 常规检验检疫技术二、实验室检验检疫技术1、相对密度检验一定浓度的食盐水或其它溶液,第五章 植物检验检疫技术,第一节 常规检验检疫技术二、实验室检验检疫技术2、染色检验法检查粮粒中的谷象、米象等可将样品放在铁丝网中，在30的水中浸lmin，再移入1高锰酸钾溶液中lmin，
3、然后用清水冲洗或用过氧化氢硫酸液洗涤2030s，用扩大镜检查，挑出有直径约05mm黑斑点的籽粒，再行剖检。豆类可用1碘化钾或2碘酒染色115min，再移入05氢氧化钠或氢氧化钾液中2030s，取出用水冲洗30s，如粒面有12mm直径的黑圆点，则内部可能隐藏豆象。,第五章 植物检验检疫技术,第一节 常规检验检疫技术二、实验室检验检疫技术2、染色检验法对植物病原细菌检验可以用革兰氏染色法和鞭毛染色法，对于植物病原线虫则用透明染色法,第五章 植物检验检疫技术,第一节 常规检验检疫技术二、实验室检验检疫技术3、直接镜检,第五章 植物检验检疫技术,第一节 常规检验检疫技术二、实验室检验检疫技术4、洗涤检
4、验法用于检测种子表面附着的真菌孢子，包括黑粉菌的厚垣孢子、霜霉菌的卵孢子、锈菌的夏孢子以及多种半知菌的分生孢子等。,第五章 植物检验检疫技术,第一节 常规检验检疫技术二、实验室检验检疫技术4、洗涤检验法洗涤检验的操作程序如下：(1)洗脱孢子：将一定数量的种子样品放人容器内并加入定量蒸馏水或其它洗涤液，振荡5一lOmin，使孢子脱离种子，转移到洗涤液中。(2)离心富集：将孢子洗涤液移人离心管，低速离心(25003000rmin)1015min，使孢子沉集在离心管底部。,第五章 植物检验检疫技术,第一节 常规检验检疫技术二、实验室检验检疫技术4、洗涤检验法洗涤检验的操作程序如下：(3)镜检计数：弃
5、去离心管内的上清液，加入一定量蒸馏水或其它浮载液，重新悬浮沉集在离心管底部孢子，取悬浮液，滴加在血球计数板上，用高倍显微镜检查孢子种类并计数，据此可计算出种子的带菌量。(4)孢子生活力测定：用常规孢子萌发测定法、分离培养法或红四氯唑(TTC)染色法判定孢子死活。,第五章 植物检验检疫技术,第一节 常规检验检疫技术二、实验室检验检疫技术5、分离培养检验主要适用于潜伏于种子、苗木、繁殖材料及植物产品内的病原菌分离真菌一般用PDA培养基，分离培养细菌用牛肉汁培养基，对于特殊要求的菌类可以用选择性培养基,第五章 植物检验检疫技术,第一节 常规检验检疫技术二、实验室检验检疫技术5、分离培养检验方法有：组
6、织分离法 稀释分离法 划线分离法,第五章 植物检验检疫技术,第一节 常规检验检疫技术二、实验室检验检疫技术6、血清学检验方法有：免疫电镜技术 酶联免疫吸附技术 斑点免疫法 免疫荧光抗体法,第五章 植物检验检疫技术,第一节 常规检验检疫技术二、实验室检验检疫技术7、生理生化测定,第五章 植物检验检疫技术,第一节 常规检验检疫技术二、实验室检验检疫技术8、噬菌体检验法噬菌体是感染细菌的病毒，能在活细菌细胞中寄生繁殖，破坏和裂解寄主细胞，在液体培养时，使混浊的细菌悬浮液变得澄清，在固体平板上培养时，则出现许多边缘整齐，透明光亮的圆形无菌空斑，称为“噬菌斑”，肉眼即可分辩。,第五章 植物检验检疫技术,
7、第一节 常规检验检疫技术二、实验室检验检疫技术8、噬菌体检验法国内已采用噬菌体法检查水稻稻种是否带有白叶枯病菌。病田稻种的稻壳中通常都带有专化性的噬菌体或存活细菌，可据以确定稻种确系带菌。,第五章 植物检验检疫技术,第一节 常规检验检疫技术二、实验室检验检疫技术8、噬菌体检验法取10g稻种，脱下谷壳剪碎或磨碎，放入已灭菌处理的烧杯中，加灭菌水20ml浸泡30min，过滤后分别吸取滤液1.5、1.0和0.5ml，置于三个灭菌的培养皿内,第五章 植物检验检疫技术,第一节 常规检验检疫技术二、实验室检验检疫技术8、噬菌体检验法各加lml新培养的白叶枯细菌指示菌液(浓度为9X108ml以上)混匀后加入
8、10ml融化的肉汁胨琼脂培养基，摇匀凝成平板后，放在2528温箱中，培养1012h,第五章 植物检验检疫技术,第一节 常规检验检疫技术二、实验室检验检疫技术9、保湿萌芽检验保湿培养检验 吸水纸检验法通常用底部铺有三层吸水纸的塑料培养皿或其它适用容器作培养床。先用蒸馏水湿润吸水纸，将种子按适当距离排列在吸水纸上，再在一定条件下培养，对多数病原真菌，适宜的培养温度为2025，每天用近紫外光(NUV)灯或日光灯照明12h。,第五章 植物检验检疫技术,第一节 常规检验检疫技术二、实验室检验检疫技术9、保湿萌芽检验保湿培养检验 吸水纸检验法培养7一l0d后检查和记载种子带菌情况，检查时，用两侧照明的实体
9、显微镜逐粒种子检查。本法依据种子上真菌菌落的整个形象，即“吸水纸鉴别特征”来区分真菌种类。检查时应特别注意观察种子上菌丝体的颜色、疏密程度和生长特点、真菌繁殖结构的类型和特征,第五章 植物检验检疫技术,第一节 常规检验检疫技术二、实验室检验检疫技术9、保湿萌芽检验保湿培养检验 冰冻吸水纸法是前一个的改进版，可以减少杂菌污染、抑制种子发芽,第五章 植物检验检疫技术,第一节 常规检验检疫技术二、实验室检验检疫技术9、保湿萌芽检验保湿培养检验 琼脂平皿法用琼脂培养基代替了吸水纸,第五章 植物检验检疫技术,第一节 常规检验检疫技术二、实验室检验检疫技术9、保湿萌芽检验萌芽法检验 沙土萌发检验 土内萌发
10、检验 试管幼苗症状测定,第五章 植物检验检疫技术,第一节 常规检验检疫技术二、实验室检验检疫技术10、诱捕器诱集检验信息素诱饵,第五章 植物检验检疫技术,第一节 常规检验检疫技术二、实验室检验检疫技术11、鉴别寄主检测应用于植物病毒的鉴定、诊断及检疫中,第五章 植物检验检疫技术,第一节 常规检验检疫技术二、实验室检验检疫技术12、植物病原线虫的各种分离方法漏斗分离法：此法适于分离少量植物材料中有活动能力的线虫。基本装置是一个直径适当的漏斗，漏斗颈末端接一段乳胶管，用弹簧夹把管子夹住。漏斗放置在支架上，其内盛满清水。把检验的植物材料洗掉泥土后，切成05cm长的小段，放在纱布中包起来，轻轻地浸入漏
11、斗内。线虫从植物组织中逸出，经纱布沉落到漏斗颈底，经12h或过一夜后，打开弹簧夹使胶管前端的水流到玻皿内，镜检线虫,第五章 植物检验检疫技术,第一节 常规检验检疫技术二、实验室检验检疫技术12、植物病原线虫的各种分离方法浅盘分离法：原理同漏斗法,第五章 植物检验检疫技术,第一节 常规检验检疫技术二、实验室检验检疫技术12、植物病原线虫的各种分离方法简易漂浮分离法：本法利用干燥的线虫胞囊能漂浮在水面的特性分离土壤中的马铃薯金线虫(Globoderarostochiensis)和各种胞囊线虫(Heterodera)。,第五章 植物检验检疫技术,第一节 常规检验检疫技术二、实验室检验检疫技术12、植
12、物病原线虫的各种分离方法过筛分离法：本法用于从大量土壤中分离各类线虫。将充分混匀的土壤样品置于不锈钢盆或塑料盆中，加入23倍的冷水，搅拌土壤并振碎土块后过20目筛，土壤悬浮液流人第二个盆中并喷水洗涤筛上物，弃去第一个盆中和筛上的剩余物，第二个盆中的土壤悬浮液经lmin沉淀后再按上法过150目筛，从筛子背面将筛中物冲洗到烧杯中，盆中土壤悬浮液再继续过325目和500目筛。筛中物收集在烧杯中静置2030min，线虫沉集底部，弃去上清液，将沉集物转移到玻皿内镜检或吸取线虫鉴定。,第五章 植物检验检疫技术,第二节 植物检验检疫新技术的应用一、核酸杂交技术二、限制性片断长度多态性标记技术（RFLP）,第五章 植物检验检疫技术,第二节 植物检验检疫新技术的应用三、聚合酶链式反应（PCR）1、免疫PCR技术2、反转录PCR检测技术3、巢式PCR4、多重PCR5、实时荧光PCR,第五章 植物检验检疫技术,第二节 植物检验检疫新技术的应用四、随机扩增多态性DNA技术（RAPD）五、基因芯片检测技术,
