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1、Western电泳中样品定量的上样技巧Western电泳中样品定量的上样技巧 如何保持上样量一致且所加体积一致？ 首先，按以往计算出蛋白浓度标准曲线，各样品在A578的平均值，浓度，终浓度 例如： 上面各值的计算方法： 标准曲线：选择插入-图表-散点图，作出图表后右击图中的散点，选择添加趋势线， 在第三选项卡选择“显示公式”和“显示R平方值” 计算平均值，输入“=average 按照上述步骤：终浓度计算为“=浓度*稀释倍数*1.2”，其中1.2是加入6Xloading buffer扣除的体积。 下面重点介绍如何保持所有上样量相等且上演体积相等 1、 将终浓度*样品细胞所加裂解液的体积，得出各样
2、品的总的物质的量n，本实验是用100ul的裂解液来消化细胞的 2、 选择n最小的作为标准浓度，用来计算其他样品所需取的体积，目的是保持各样品总的物质的量一直，因为木桶效应，一批样品中能用的 是取决于最少样品的量，其他样品量多也不一定能用上。 计算“最小的n/ 需计算样品的终浓度” 3、 计算还需加入裂解液的体积，因为最小n的样品的体积是100ul，所以其他样品的体积也需要加入裂解液步加到100ul，则计算“=最小n的样品的总体积-该样品所需取的体积” 4、 具体操作过程：从非最小n的样品管里按“样品所需体积”吸到另一个新的500ul的EP管里，按“还需加裂解液的体积”加入裂解液，黄枪头吹打均匀。 5、 按照“总体积例如100ul/(6-1)”加入6x loading buffer，吹打均匀，放入沸水中煮5min，再用离心机低速3000rpm离心5min。用于上样或放于-20度冰箱保存。 例如：
