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1、仪器分析实验邻二氮菲分光光度法测铁条件试验实验一 邻二氮菲分光光度法测铁条件试验 一、目的要求 1了解分析测定中确定实验条件的基本原理和方法； 2学习722分光光度计和酸度计的使用方法。 二、实验原理 在可见光分光光度测定中，通常是将被测物质与显色剂反应，使之生成有色物质，然后测量其吸光度，进而求得被测物质的含量。因此，显色反应的完全程度和吸光度的物理测量条件都影响到测定结果的准确性。 显色反应的完全程度取决于介质的酸度、显色剂的用量、反应的温度和时间等因素。在建立分析方法时，需要通过实验确定最佳反应条件。为此，可改变其中一个因素，暂时固定其它因素，显色后测量相应溶液的吸光度，通过吸光度pH曲
2、线确定显色反应的适宜酸度范围。其它几个影响因素的适宜值，也可按这一方式分别确定。 本实验以邻二氮菲为显色剂，找出测定微量铁的适宜显色条件。 三、仪器与试剂 1仪器 722型分光光度计、酸度计、容量瓶、吸量管等。 2试剂 铁标准溶液 准确称取0.176克分析纯硫酸亚铁铵于小烧杯中，加水溶解，加入6molL HCl溶液5mL，定量转移至250mL容量瓶中稀释至刻度，摇匀。所得溶液每毫升含铁0.100 mg。 0.1邻二氮菲水溶液： 称取1g邻二氮菲，先用510mL 95乙醇溶解，再用蒸馏水稀释到1000mL。 10盐酸羟胺水溶液； HAcNaAc缓冲溶液： 称取136g醋酸钠，加60 mL冰醋酸，
3、加水溶解后，稀释到1000mL。 NaOH溶液：0.5 molL HCl溶液：0.5 molL 第 1 页 四、实验步骤 1酸度影响 于9只50 mL容量瓶中，用刻度吸量管各加入1.0 mL 0.100mgmL的铁标准溶液，再加入1 mL盐酸羟胺溶液和2mL邻二氮菲溶液，摇匀。然后按下表分别加入HCl和NaOH溶液： 编号 1 2 0.2 3 0.0 0.0 4 0.2 5 0.5 6 1.0 7 1.5 8 2.0 9 3.0 V/HCl 0.5 V/NaOH 用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。放置几分钟后分别测定各溶液的pH值和吸光度。 吸光度测定条件为：1cm比色皿，蒸馏水作参比，测定波长510
4、 nm。数据记入下表： 编号 pH值 吸光度 1 2 3 4 5 6 7 8 9 2显色剂用量的影响 取8个50 mL容量瓶，依次加入1.0 mL 0.100mgmL的铁标准溶液，1mL盐酸羟胺溶液和5mL HAcNaAc缓冲溶液，摇匀。然后分别加入邻二氮菲溶液0.1 mL、0.3 mL、0.5 mL、0.8 mL、1.0 mL、1.5 mL、2.0 mL、4.0 mL。用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。放置几分钟后测定各溶液的吸光度。 吸光度测定条件与前面测定相同，即：1cm比色皿，以蒸馏水作参比，测定波长510nm。 3显色反应时间的影响及有色溶液的稳定性 在第2步中加入2.0 mL邻二氮菲显色剂
5、的溶液配好后，立刻记下容量瓶稀释至刻度后的时间，立即以蒸馏水为参比溶液，在波长510 nm处测定该溶液的吸光度。然后依次测定放置5、10、30、60、90和120 min的吸光度，每次测完将溶液倒回原瓶中，下一时刻测定再取原瓶中的溶液测量。 五、数据记录和处理 1酸度的影响及最佳测定酸度的确定 根据酸度影响所测定的数据，在坐标纸上作出吸光度pH变化曲线，根据曲线确定显色反应适宜的pH值范围。 第 2 页 2显色剂用量的影响 将显色剂用量影响的测定数据记入下表中 编号 V显mL 吸光度 1 2 3 4 5 6 7 8 绘制吸光度显色剂用量曲线，根据所得曲线确定显色反应所需的最佳用量范围。 3显色
6、反应时间的影响及有色溶液的稳定性 时间t 0 5 10 30 60 90 120 吸光度 根据所得的数据绘制吸光度反应时间曲线并据此确定显色反应适宜的显色时间范围和显色溶液的稳定性。 六、问题讨论 1根据什么原则从吸光度pH曲线选定显色的适宜pH值范围？如果选择不当，其后果怎样？ 2从吸光度反应时间曲线确定适宜的显色时间范围时，主要应考虑什么问题？如果时间选择过短或过长对测定有何影响？ 附录：722型分光光度计使用方法 722型光度计是以碘钨灯为光源、衍射光栅为色散元件、端窗式光电管为光电转换器的单光束、数显式可见光分光光度计。波长范围330800nm，吸光度范围01.999，试样架有4个吸收
7、池，具有浓度直读功能。 操作使用方法和步骤： 1） 使用前开机预热15 30min 。 2） 仪器面版上只有4个按键，分别为： “A/T/C/F”功能转换键，用于选择测量功能； “SD”按键，用于与计算机通讯传输数据； “0”零点调节按键，用于测定时调节透光率0点，只有在选择透光率T状态下有效。在打开样品室盖的情况下，按下此键后稍等数秒钟，读数显示000.0 。此步骤称为“调零”； “100”参比调节键，用于调节参比溶液的透光率或吸光度，在A、T状态下有效。测定时将参比溶液置于光路中，关闭样品室盖，按此键后稍等，读数显示0.000或100.0。此步骤称为“调参比”。 3） 将参比溶液和待测溶液
8、分别注入比色皿中，按顺序依次放入比色皿架的吸收池中，靠拉杆第一个池位放参比溶液，后面3个池位放待测溶液；更换溶液时参比溶液不动，只更换3个待测溶液。 第 3 页 4） 选择好测定波长，然后按步骤2）的方法调零和调参比，即打开样品室盖调零点，合上样品室盖调参比，反复23次，直到数据稳定。 5） 将其余3个待测溶液的比色皿依次推入光路中，读取并记录所测的吸光度值。 比色皿使用注意事项 每台分光光度计配有一组4只1cm比色皿，为保证测定的精度和准确度，使用比色皿时注意： 1）拿取比色皿时，手指不能接触其透光面； 2）装溶液时，先用待测溶液润洗比色皿内壁23次；测定系列溶液时，通常按由稀到浓的顺序测定； 3）装液量以被测溶液装至比色皿的3/4高度为宜； 4）如比色皿外壁有水或溶液，可先用滤纸轻轻吸去比色皿外部的液体，再用擦镜纸顺一个方向小心擦拭透光面，直到洁净透明； 5）装好溶液的比色皿对光观察应该清澈透亮，内壁不能附着气泡，否则倒掉重装； 6）测量时参比溶液要放在比色皿架靠外第一格，并且一直保留；待测溶液放在后面三格，测完后再换； 7）实验中勿将盛有溶液的比色皿放在仪器面板上，以免玷污和腐蚀仪器；实验完毕，要及时把比色皿取出，倒去溶液并用蒸馏水洗净、晾干，放回比色皿盒中保存。 第 4 页
