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1、实验六 邻二氮菲分光光度法测铁,环境科学与工程学院,一、实验目的1掌握邻二氮菲分光光度法测铁的原理及方法。2学习吸收曲线的绘制方法，正确选择测定波长。3学会标准曲线的绘制方法，计算分析结果。4掌握分光光度计的使用方法。,1 物质对光的选择性吸收：,光在与物质作用时，物质可对光产生不同程度的吸收(呈现的颜色）。物质的结构决定了物质在吸收光时只能吸收某些特定波长的光（选择性）。,一 分光光度法的原理,透明物质：使光完全透过时，则为无色；对光完全吸收时，则呈现黑色；对光均匀吸收时，则呈现灰色；对光选择性吸收时，则呈各种颜色。,分光光度法（Absorption Photometry）：基于物质对光的选
2、择性吸收而建立的分析方法。利用物质的分子或离子对某一波长范围的光的吸收作用，对物质进行定性分析、定量分析及结构分析，所依据的光谱是分子或离子吸收入射光中特定波长的光而产生的吸收光谱。广泛用于无机物和有机物的定性和定量分析。,2 光谱分区,能 量,小,200nm,400nm,750nm,大,波 长,光谱区域,紫外光区,可见光区,红外,分析方法,紫外分光光度法,可见分光光度法,50um,红外分光光度法,紫、蓝、青、绿、黄、橙、红,（所吸收光的波长区域不同）,紫外可见分光光度法是历史悠久、应用最为广泛的一种光学分析方法。,通过测量物质对不同波长的光的吸收程度（吸光度），以波长为横坐标，吸光度为纵坐标
3、作图，就可以得到该物质在测量波长范围内的吸收曲线。这种曲线体现了物质对不同波长的光度吸收能力，称为吸收光谱。不同的物质因其分析结构不同而具有不同的吸收曲线；吸收曲线是吸光度法选择测量波长的依据。,3 吸收曲线,吸光度 A,吸 收 曲 线 图,400,500,600,0.100,0.200,0.300,0.400,光吸收的基本定律 朗伯比尔定律：A=Kbc,A-吸光度K-摩尔吸光系数C-被测物浓度b-液层厚度（光程长度）,朗伯比尔定律的物理意义：当一束平行光垂直通过某一非散射的吸光物质时，其吸光度（A）与吸光物质的浓度（c）及光程长度（b）成正比关系,K与入射光波长、溶液温度及吸光物质的组成有关
4、。,4.分光光度计,光源,光源,单色器,吸收池,检测器,显示器,复色光,单色光,电信号,比色皿的使用方法：拿取比色皿时，手指只能捏住比色皿的毛玻璃 面，不要触碰比色皿的透光面，以免沾污。清洗比色皿时，一般先用水冲洗，再用蒸馏水洗净。不能用毛刷清洗比色皿，以免损伤它的透光面。每次做完实验时，应立即洗净比色皿。比色皿外壁的水用擦镜纸或细软的吸水纸吸干，以保护透光面。测定有色溶液吸光度时，一定要用有色溶液润洗比色皿内壁几次，以免改变有色溶液的浓度。加入溶液体积不超过2/3另外，在测定一系列溶液的吸光度时，通常都按由稀到浓的顺序测定，以减小测量误差。,二 实验原理 在 pH 2-9 的溶液中，邻二氮菲
5、能与Fe2+反应生成稳定的配合物。邻二氮菲+Fe2+邻二氮菲-Fe2+配合物（无色）（红色）用分光光度计测定溶液吸光度，根据Beer 定律 A=K c采用标准工作曲线法测定铁的含量。,三、实验步骤 取7个50mL比色管，分别加入0.00，2.00，4.00，6.00，8.00，10.00mL铁标准溶液和10.00mL水样，然后加入1mL盐酸羟胺(?)，2.00mL邻二氮菲，5mLNaAc溶液(?)，每加入一种试剂都应初步混匀。用去离子水定容至刻度，充分摇匀，放置10min。,1、吸收曲线得绘制,选用1cm比色皿，以试剂空白为参比溶液，取4号比色管试液，选择440560nm波长，每隔10nm测一
6、次吸光度，以所得吸光度A为纵坐标，以相应波长为横坐标，在坐标纸上绘制A与的吸收曲线。从吸收曲线上选择测定Fe的适宜波长，一般选用最大吸收波长max为测定波长。,绘制吸收曲线的数据记录,吸光度,波长,max,2、标准曲线（工作曲线）的绘制,用1cm比色皿，以试剂空白为参比溶液，在选定波长（max）下，测定各溶液的吸光度。在坐标纸上，以铁含量为横坐标，吸光度A为纵坐标，绘制标准曲线。,数据记录,A,c,Ax,cx,标准曲线绘制,样品测定,水样吸光度,水样浓度,放入水样的50mL比色管，按以上方法显色，并测其吸光度。此步操作应与系列标准溶液显色、测定同时进行。依据试液的A值，从标准曲线上即可查得其浓度，最后计算出原溶液的含铁量（以ug/mL表示）。,3、试样中铁含量的测定,四、注意事项：1 试样和标准曲线的样品同时测定。2 标准曲线的质量是测定准确与否的关键，标准系列溶液配制时，必须严格按规范进行操作3 定容后必须充分摇匀后进行测量4 比色皿必须配套，装上待测液后透光面必须擦拭干净；切勿用手接触透光面5 试剂的加入要使用同一顺序，并且应用移液管加样。,
