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1、免疫组化SP法步骤 免疫组化SP法步骤 生 物 谷 网 站SP(streptavidin-perosidase)法,即链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法. 按标记物质的种类，如荧光染料、放射性同位素、酶(主要有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶)、铁蛋白、胶体金等，可分为免疫荧光法、放射免疫法、酶标法和免疫金银法等。按染色步骤可分为直接法(又称一步法)和间接法(二步、三步或多步法)；按结合方式可分为抗原抗体结合，如过氧化物酶-抗过氧化物酶法和亲和连接，如卵白素-生物素-过氧化物酶复合物法、链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法等，其中SP法是最常使用的方法。 一般的sp法步骤啊,具体如下： 1.烤片，
2、68，20分钟, 2. 常规二甲苯脱蜡，梯度酒精脱水；二甲苯I 20min -二甲苯II 20 min-100%酒精I 10min -100%II 10min -95% 5min- 80% 5min- 70% 5min 3.阻断 灭活内源性过氧化物酶：3%H2O2 37孵育10min，PBS冲洗3X5min； 4. 抗原修复:置0.01M枸橼酸缓冲液中用煮沸，自然冷却20min 以上，再用冷水冲洗缸子，加快冷却至室温，PBS冲洗3X5min。 5. 正常羊血清工作液封闭，3710 min，倾去勿洗. 6. 滴加一抗4 冰箱孵育过夜，PBS冲洗3X5min； 滴加生物素标记二抗, 37孵育30min, PBS冲洗3X5min; 7. 滴加辣根过氧化物酶标记的链霉素卵白素工作液，37孵育30min, PBS冲洗3X5min; 8. DAB/ H2O2反应染色，自来水充分冲洗后， 苏木素复染，常规脱水，透明，干燥，封片。
