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1、实验四 植物细胞有丝分裂实验实验四 观察植物细胞的有丝分裂 实验目标 1观察植物细胞的有丝分裂过程，识别有丝分裂的不同时期。 2学会制作洋葱根尖有丝分裂装片的技术 3学会使用高倍显微镜和绘生物图的方法 实验原理 在植物体中，有丝分裂常见于根尖、茎尖等分生区细胞，高等植物细胞有丝分裂的过程，分为分裂间期和有丝分裂期的前期、中期、后期、末期。可以用高倍镜观察植物细胞的有丝分裂的过程，根据各个时期细胞内染色体的变化情况，识别细胞处于有丝分裂的哪一个时期。细胞核内的染色体容易被碱性染料染色。 材料用具 略 方法步骤 1洋葱(大蒜)根尖的培养 选个大、饱满的大蒜头，分囊后用铁丝或竹签将蒜瓣穿成一排，搁于
2、盛有清水的容器上培养，使每囊蒜瓣的底部都浸没于水中，在室温20上下阳光充足的晴天养34天，期间换1-2次水，根尖就可长到22.5cm，即可剪取备用。 2.根尖的固定： 将剪取的根尖置于固定液中固定，使根尖的生长点细胞变成乳白色，根尖下沉，一般需1224小时，然后用70%酒精漂洗，再置于70%的酒精中保存，随用随取。 实验六 细胞有丝分裂的制片及观察 实验目的 1. 初步掌握植物细胞有丝分裂临时压片的方法。 2. 通过对动植物细胞有丝分裂标本的观察，掌握细胞分裂过程及其特点。 3. 了解动、植物细胞有丝分裂过程的主要区别。 实验原理 多细胞生物的生长、发育均以细胞分裂的方式实现。细胞分裂有无丝分
3、裂、有丝分裂、减数分裂几种方式，其中有丝分裂是最主要的方式。有丝分裂在处于增殖状态的组织中广泛存在，根据这一现象，我们取分裂旺盛的组织如植物的根尖、动物的骨髓细胞，胚胎细胞进行特殊处理，制成光镜切片或压片，在显微镜下即可对有丝分裂进行观察和分析，从而了解各分裂时期的形态特点及变化规律。 实验用品 1. 材料：新鲜洋葱根尖标本、洋葱根尖纵切片、马蛔虫子宫切片。 2. 器材：显微镜、盖玻片、载玻片、小烧杯、吸水纸、剪刀、镊子、吸管、恒温培养箱、酒精灯、刀片。 3. 试剂：甲醇、冰醋酸、70%酒精、1mol/l hcl、苯酚、品红、0.5%甲苯胺蓝、山梨醇、福尔马林、蒸馏水、秋水仙素。 实验内容与方
4、法 一、植物细胞有丝分裂制片及观察 (一)植物根尖压片的制备 1. 药品配制 (1)卡诺氏固定液：95% 酒精15ml，冰醋酸5ml，混合(也可用纯酒精30ml、氯仿15ml、 冰醋酸5ml混合)。 (2) 0.5% 甲苯胺蓝染液：甲苯胺蓝0.5g，蒸馏水100ml，混合摇匀。 (3) 改良碱性品红染液：该染色液是先配成a液，然后再配成b液、c液及工作液，配方如下： a液：碱性品红3g，70%乙醇10ml。 b液：a液10ml加5%苯酚水溶液90ml。 c液：b液55ml加冰醋酸6ml、37%福尔马林6ml。 工作液：c液10ml加45%冰醋酸90ml，山梨醇1.8g混合溶解。 2. 根尖培养
5、及处理：取洋葱鳞茎，剪去老根，置于盛满清水的小烧杯里，使部分鳞茎浸入水中，室温或放25c左右的恒温箱中培养。约34天后，鳞茎长出不定根，于晚12时至1时或中午12点左右将根剪下，放入0.05%0.1%的秋水仙素溶液中，经24小时后移入卡诺氏固定液中固定。根尖也可剪下后直接投入固定液中，材料经固定24小时后取出放70%酒精中保存。用70%酒精保存的根尖半年后使用仍可保持其观察效果。 3. 解离和压片：将固定后的根尖用清水冲洗后放入盛有少量1mol/l hcl的小烧杯中，置60c热水中解离10分钟左右，待根尖发白变软后取出，放蒸馏水中漂洗30分钟，然后移至载玻片上，用吸水纸吸去多余的水份。滴加0.
6、5%甲苯胺蓝或改良苯酚品红染液12滴加盖玻片，用铅笔头或指头轻轻敲击，见根尖压扁铺开后置于显微镜下观察。 (二)洋葱根尖有丝分裂的观察 观察洋葱根尖压片和洋葱根尖切片标本，按图所示观察分裂各期的特点。观察时先用低倍镜找到根尖较前端生长点部位，此处细胞略呈方形，排列紧密，染色较深，该处可见到许多处于不同分裂期的细胞。转换高倍镜观察，可见间期及有丝分裂各期的细胞，如图5-1所示。各期特点如下： 1. 间期：细胞核呈圆形，核膜清楚，核内染色质分布较均匀，呈细网状。由于染色质易与碱性染料结合，故细胞核的染色比细胞质为深。核中可见到13个染色较浅的呈球状的核仁。 2. 前期：核较间期膨大，核内染色质逐渐
7、螺旋化为丝状的染色丝，其后染色丝进一步缩短变粗，形成一定形态和数目的染色体，核膜、核仁逐渐消失。 3装片的制作 解离：把根尖放入15%的盐酸中解离，由于大蒜根尖纤细，解离时间只需810分钟，就能使生长点细胞基本酥散。 注意：解离充分是实验成功的必备条件；解离的目的用药液溶解细胞间质，使组织细胞分开。 漂洗：把已解离的根尖取出放入盛有清水的大烧杯中，用玻璃棒或镊子轻轻搅动漂洗3分钟，期间换一次清水，再将漂洗后的清水倒出，即可进入下一步染色。 注意：漂洗的目的是洗去根中多余的解离液，如果不把多余的解离液洗去，一方面会影响效果，另一方面碱性的染料会腐蚀显微镜的镜头。 染色：a、把漂洗后酥软的根尖用镊
8、子从清水中取出置于载玻片中央，并用吸水纸将根尖吸干，目的使染液保持一定的浓度。 b、用刀片在载玻片上切取乳白色米粒样的生长点细胞，并将生长点有规律地纵剖，取其1/31/5生长点细胞为染色材料。 c、滴两滴2%醋酸的龙胆紫染液或醋酸洋红染液进行染色，染色时间2%醋酸龙胆紫染液染色2分钟左右，醋酸洋红染色5分钟或用肉眼观察染色材料变红即可。 注意：本实验观察的重点是染色体、染色质，而染色体、染色质都容易被碱性染料染成深色，便于观察。 压片：染色后盖上盖玻片，在盖玻片上垫35层吸水纸，用拇指重压，但不能研转，使生长点细胞均匀地压成一薄薄的雾状细胞层，然后从低倍到高倍镜检观察，效果极好。 3洋葱根尖细
9、胞有丝分裂的观察 1低倍镜 把制作成的洋葱根尖装片先放在低倍镜下观察，慢慢移动装片，要求找到分生区细胞，它的特点是：细胞呈正方形，排列紧密，有的细胞正在分裂。 2高倍镜观察 找到分生区细胞后，换上高倍镜，用细准点螺旋和反光镜把视野调整清晰，直到看清细胞物象为止。 3仔细观察，可先找出处于细胞分裂期中期的细胞，然后再找出前期、后期、末期的细胞。注意观察各个时期细胞内染色体变化的特点。 4在一个视野里，往往不容易找全有丝分裂过程中各个时期的细胞。如果是这样，可以慢慢地移动装片，从邻近的分生细胞中寻找。 有丝分裂图像识别原则 图像在具备同源染色体的前提下还有下列特点之一，便可判断为有丝兮裂： 染色体加倍有丝分裂后期； 所有染色体着丝点排在赤道板上有丝分裂中期； 子细胞中染色体数目同母组胞有丝分裂末期。 作业 绘出洋葱根尖细胞有丝分裂的各个时期分裂相图。
