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1、微生物碳氮的测定方法熏蒸提取法二、土壤微生物量碳、氮的测定方法熏蒸提取法 1 主题内容与适用范围 本方法采用氯仿熏蒸提取测定土壤微生物量碳、氮，适用范围广，既适用于中性和 微碱性土壤，也适用于强酸性土壤，并且适用于滞水土壤和新施有机肥土壤。 2 方法提要 土样经氯仿熏蒸和未熏蒸两种不同处理后，用K2SO4溶液浸提，提取液一部分用K2CrO7氧化法测定微生物量碳，另一部分用浓H2SO4消煮、碱化蒸馏法测定微生物量氮。 3提取液的制备 3.1仪器、设备：抽气皿、无醇氯仿、抽气机、大铝盒、分析天平、小烧杯、大塑料瓶、大三角瓶、4C的冰箱 、定量滤纸、漏斗、保鲜膜 3.2试剂的制备：0.5 M K2S
2、O4溶液、 无醇氯仿 3.3分析步骤： 3.3.1 称取12.50g鲜土(取土要准确、均匀，不要夹入有机残体)于大铝盒中。在抽气皿中放入盛有25ml无醇氯仿的小烧杯，小烧杯中放几张小纸片以便于观察沸腾。放入装土的大铝盒，连上抽气机，抽真空使氯仿沸腾5分钟，关紧活塞，关闭抽气机。包上黑布，置于阴暗处熏蒸24小时。到时间后，取出小烧杯后反复抽真空23次，排除氯仿。 另称取一批同等重量的土放入大塑料瓶中，不做熏蒸处理，同样包上黑布，置于阴暗处24小时。 3.3.2 将步骤(3.1.1)中的两批土样转移到离心管中。用注射器注入每瓶50ml 0.5M K2SO4溶液，盖紧瓶塞，振荡30分钟，离心5分钟后
3、取出，用15ml定量滤纸过滤到150ml大三角瓶中，应立即测定。如不立即测定，用保鲜膜封口，保存在4C的冰箱中。 4 生物量碳的测定K2CrO7氧化法 4.1仪器、设备：DOC测定仪(冷凝装置4套、配套沸瓶装16个)、玻璃沸珠、1500W电炉两个、变压器两个、滴定管 4.2试剂的制备：蒸馏水、混合酸(浓硫酸:浓磷酸=2:1,分析纯) 、0.1000N K2CrO7标准溶液 邻菲罗啉指示剂、66.7mMK2CrO7溶液 0.02M (NH4)2Fe(SO4)2溶液：取15.69g/L溶于蒸馏水，用20ml浓硫酸酸化，而后定容至1L、 4.3分析步骤： 4.3.1吸取2ml 0.4 N K2CrO
4、7溶液放入沸瓶，再吸15ml 混酸放入沸瓶，混合，加入等量的玻璃球。吸取步骤中的过滤液810ml，放入到电炉上，安装好冷凝系统，调压至130伏开始加热。从玻璃球沸腾时开始记时，保持沸腾30分钟，其间应摇匀两次。在30分钟到前2分钟关上电炉，利用余热保持沸腾至30分钟，随后从冷凝管上口加入20ml蒸馏水，清洗冷凝管壁，降低沸瓶温度。 4.3.2 取下沸瓶，待冷却至室温，加入23滴指示剂，用准确标定过的(NH4)2Fe(SO4)2 溶液滴定。颜色从黄色深绿色天蓝色浅灰色红棕色到终点。同时用0.5M K2SO4代替过滤液作空白，注意两个电炉间的差异。 注：(NH4)2Fe(SO4)2溶液的标定：在三
5、角瓶内放入0.1000 N K2CrO7标准溶液10ml，加入混合酸15ml，摇匀冷却，用(NH4)2Fe(SO4)2 溶液滴定，颜色反应同上。一般在测定开始和结束时各标定一次，取平均值，保留4位小数。 4.4分析结果的表述： 计算公式：C=(V空白V样品)*N(NH4)2Fe(SO4)2*3*1000/吸取样品的体积数(ml) C=C(ug/ml)*提取液的总体积数(ml)/W干土(g) EC=C熏蒸C未熏蒸 微生物量碳BC=EC/0.38 4.5允许差 4.5.1取平行测定结果的算术平均值作为测定结果。 4.5.2平行测定的绝对差值10ug/g。 5 微生物量氮的测定消煮、碱化蒸馏法 5.
6、1仪器、设备：定氮仪、烘箱、开氏瓶、移液管、小漏斗、小三角瓶 5.2试剂的制备：去离子水、浓硫酸、硼酸指示剂、10M NaOH溶液、CuSO4溶液 5.3分析步骤： 5.3.1 吸取步骤3.2.2中的过滤液25-30ml放入到开氏瓶中，加入2ml浓硫酸。放入到烘箱中在60700C烘23天，直至瓶内还剩下3ml左右溶液，取出。加入3ml浓硫酸和1ml0.19MCuSO4溶液，放上小漏斗在电炉上消煮。消至瓶内颜色呈天蓝色为止，取下冷却。同时用0.5N K2SO4溶液50ml代替滤液作空白。 5.3.2 用去离子水洗清小漏斗内外壁，少量多次冲洗开氏瓶，将开氏瓶中的液体全部转移到定氮仪中，加入20ml
7、 10N NaOH溶液进行碱化蒸馏，冷凝管下口放装有5ml硼酸指示剂的小三角瓶，接收蒸馏液，待蒸馏液达到60ml时停止蒸馏。蒸馏前应检查蒸馏装置是否漏气，并进行空蒸馏清洗管道。 5.3.3 用0.02N硫酸标准溶液滴定馏出液，加入指示剂，颜色由蓝色刚变成紫红色为终点，记录消耗硫酸标液的体积。 5.4分析结果的表述： 计算公式：N =(VV0)*NH2SO4*14.0*稀释倍数*1000*2.22/W烘干土 微生物量氮BN=N熏蒸N未熏蒸 其中： V ：滴定样品所消耗的硫酸数，ml； V0：滴定空白所消耗的硫酸数，ml； 稀释倍数：总过滤液是所吸取的过滤液的倍数，； 2.22：无机氮转化为有机氮的转化系数。 5.5允许差 5.5.1取平行测定结果的算术平均值作为测定结果。 5.5.2平行测定的绝对差值5ug/g。
