《气相色谱分离的原理.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《气相色谱分离的原理.docx（12页珍藏版）》请在三一办公上搜索。
1、气相色谱分离的原理峰面积：组分流出的曲线与基线所包围的面积。表示：符号A 峰底：色谱峰下面的基线延长线 峰高：色谱峰最高点至峰底的垂直距离AB 表示符号:h 峰宽(W)：沿色谱峰两侧拐点所作的切线与峰底相交两点之间的距离。IJ。符号： 半峰宽(Wh/2)：峰高为0.5h处的峰宽。 标准偏差()：峰高0.607h处峰宽EF的一半。 区域宽度：色谱峰的区域宽度是色谱流出曲线的重要参数之一，可用于衡量色谱柱的柱效及反映色谱操作条件下的动力学因素。宽度越窄，其效率越高，分离的效果也越好。 保留时间：试样从进样到出现峰极大值时的时间。它包括组份随流动相通过柱子的时间t0和组份在固定相中滞留的时间。 死时
2、间：不与固定相作用的物质从进样到出现峰极大值时的时间，它与色谱柱的空隙体积成正比。由于该物质不与固定相作用，因此，其流速与流动相的流速相近。 调整保留时间：某组份的保留时间扣除死时间后的保留时间，是组份在固定相中的滞留时间。 死体积：色谱柱管内固定相颗粒间空隙、色谱仪管路和连接头间空隙和检测器间隙的总和。 保留体积Vr：指从进样到待测物在柱后出现浓度极大点时所通过的流动相的体积。 调整保留体积：某组份的保留体积扣除死体积后的体积。 净保留体积：用压力梯度校正因子修正后的组分调整保留体积，VN 比保留体积：组分在每g固定液校正到273.15K时的净保留体积，Vg 相比率：气相与吸附剂或固定液体积
3、之比=VG/VS，VG/VL 相对保留值：相同操作条件下，组分与参比物质的调整保留值之比ri,s 柱外效应:是指色谱柱之外的造成色谱峰展宽的成因 ,主要由进样装置、检测池及它们与柱之间的连接管路所产生. 即从进样系统到检测器之间色谱柱以外的流路部分，由于进样方式、柱后扩散等因素对柱效能所产生的影响。 反吹：一些组分被洗脱后,将载气反向通过色谱柱,使另一些组分向相反方向移动的操作.目的是为了使组分从色谱柱相反方向洗脱,可节省时间,或使组分不进入会受其污染的另一色谱柱. 老化:色谱柱在高于使用柱温下通过载气进行处理的过程.老化温度不可超过固定液的允许最高使用温度,老化时间一般为10小时左右. 色谱
4、柱老化的目的：是彻底除去填充物中的残留溶剂和某些挥发性的物质；另一方面是促进固定液均匀牢固地分布在担体的表面上 柱流失:所有的色谱柱都有柱流失的现象，来源于固定相由于各种原因降解而产生的被洗脱物质。柱流失会随着温度的升高而加剧。 基线噪声又称噪音，定义为没有溶质通过检测器时，检测器输出的信号变化，以RN表示。噪声是指与被测样品无关的检测器输出信号的随机扰动变化。 漂移是指基线随时间的增加朝单一方向规律性移动。造成漂移的原因是电源电压不稳；检测器本身或附属电子元件性能不佳;或者温度及流动相流速的缓慢变化；固定相从柱中冲刷下来；更换的新溶剂在柱中尚未达到平衡等 检测器的线性范围定义为在检测器呈线性
5、时最大和最小进样量之比，或叫最大允许进样量与最小检测量之比。 检测器的灵敏度灵敏度可定义为信号对进人检测器的组分量的变化率 检测器的检测限如果要把信号从本底噪声中识别出来，则组分的响应值就一定要高于N。检测器响应值为2倍噪声水平时的试样浓度，被定义为最低检测限。 最小检测量指产生二倍噪声峰高时，色谱体系所需的进样量。 响应速度(响应时间):响应时间指进入检测器的某一组分的输出信号达到其真值的63所需的时间。响应速度快。一般都小于1s。 使用温度:检测器的使用温度要求高于柱温,否则分离后的各组分容易冷凝而滞留于检测器或管路中,造成检测器的污染而降低灵敏度,甚至引起池体或喷嘴的堵塞,使检测器不能正
6、常工作. 气相色谱分离的原理 混合物中各组分在两相间进行分配,其中一相是不动的固定相,另一项是携带混合物流过此固定相的流动相气体(也叫载气).当流动相中所含化合物经过固定相时,就会与固定相发生作用.由于各组分在性质和结构上的差别,与固定相发生作用的大小,强弱有差异,因此,在同一推动力作用下,不同组分在固定相中的滞留时间有长有短,从而,按先后不同的顺序从固定相中流出. 程序升温是指色谱柱的温度按设置的程序连续地随时间线性或非线性逐渐升高，以使低沸点组分和高沸点组分在色谱柱中都有适宜的保留、色谱峰分布均匀且峰形对称。各组分的保留值可用色谱峰最高处的相应温度即保留温度表示。 程序升温优点采用程序升温
7、后不仅改善分离，而且可以缩短分析时间，得到的峰形也很理想。 应用：宽沸程的多组分混合物可采用程序升温法，即在分析过程中按一定速度提高柱温，在程序开始时，柱温较低，低沸点的组分得到分离，中等沸点的组分移动很慢，高沸点的组分还停留于柱口附近；随着温度上升，组分由低沸点到高沸点依次分离出来。 对固定液的选择并没有规律性可循。一般可按“相似相溶”原则来选择。在应用时，应按实际情况而定。 分离非极性物质：一般选用非极性固定液，这时试样中各组分按沸点次序流出，沸点低的先流出，沸点高的后流出。 分离极性物质：选用极性固定液，试样中各组分按极性次序分离，极性小的先流出。极性大的后流出。 分离非极性和极性混合物
8、：一般选用极性固定液，这时非极性组分先流出，极性组分后流出。 分离能形成氢键的试样：一般选用极性或氢键型固定液。试样中各组分按与固定液分子间形成氢键能力大小先后流出，不易形成氢键的先流出，最易形成氢键的最后流出。 复杂的难分离物质：可选用两种或两种以上混合固定液。 检测器的分类 浓度型检测器 测量的是载气中某组分浓度瞬间的变化，即检测器的响应值和组分的浓度成正比。如热导检测器和电子捕获检测器。 质量型检测器 测量的是载气中某组分进入检测器的速度变化，即检测器的响应值和单位时间内进入检测器某组分的量成正比。如火焰离子化检测器和火焰光度检测器等。 热导检测器是利用被测组分和载气的导热系数不同而响应
9、的浓度型检测器 。被测组分的蒸气与载气具有不同的热导系数。热丝阻值随温度变化而变化。利用惠斯登电桥测量 热导检测器优缺点由于结构简单，性能稳定，几乎对所有物质都有响应，通用性好，而且线性范围宽，价格便宜，因此是应用最广，最成熟的一种检测器。主要缺点是灵敏度较低。 影响热导检测器灵敏度的因素 桥电流 桥电流增加，使钨丝温度提高，钨丝和热导池体的温差加大，气体就容易将热量传出去，灵敏度就提高。响应值与工作电流的三次方成正比。 池体温度 池体温度降低，可使池体和钨丝温差加大，有利于提高灵敏度。但池体温度过低，被测试样会冷凝在检测器中。池体温度一般不应低于柱温。 载气种类 载气与试样的热导系数相差愈大
10、，则灵敏度愈高。故选择热导系数大的氢气或氦气作载气有利于灵敏度提高。如用氮气作载气时，有些试样的热导系数比它大就会出现倒峰。 热敏元件的阻值 阻值高、温度系数较大的热敏元件，灵敏度高。 出峰特点同一种物质，峰面积越大，浓度越大 不同物质，与载气的导热系数相差越大，峰面积越大，灵敏度越大 应用热导检测器是一种通用的非破坏型浓度型检测器，有利于样品的收集，或与其它仪器联用。 TCD特别适用于气体混合物的分析 对于那些氢火焰离子化检测器不能直接检测的 TCD用峰高定量，适于工厂控制分析。 氢火焰离子化检测器 氢火焰离子化检测器是以氢气和空气燃烧的火焰作为能源，利用含碳有机物在火焰中燃烧产生离子，在外
11、加的电场作用下，使离子形成离子流，根据离子流产生的电信号强度，检测被色谱柱分离出的组分。 它的特点是：灵敏度很高，比热导检测器的灵敏度高约103倍；检出限低，可达10-12gS-1； 优点：能检测大多数含碳有机化合物；死体积小，响应速度快，线性范围也宽，可达106以上；而且结构不复杂，操作简单， 主要缺点是：不能检测永久性气体、水、一氧化碳、二氧化碳、氮的氧化物、硫化氢等物质。 火焰离子化机理:至今还不十分清楚其机理，普遍认为这是一个化学电离过程。有机物在火焰中先形成自由基，然后与氧产生正离子，再同水反应生成H30+离子。 影响操作条件的因素:离子室的结构对火焰离子化检测器的灵敏度有直接影响，
12、操作条件的变化，包括氢气、载气、空气流速和检测室的温度等都对检测器灵敏度有影响。 电子捕获检测器(electron capture detector, ECD) 优缺点电子捕获检测器也称电子俘获检测器，它是一种选择性很强的检测器，对具有电负性物质的检测有很高灵敏度。它是目前分析痕量电负性有机物最有效的检测器。 它的缺点是线性范围窄，只有103左右，且响应易受操作条件的影响，重现性较差。 ECD使用特别注意 载气 用纯度高于99.999%N2。第一次使用ECD时，要用大量高纯N2吹扫24h以上。短时停机不停气。 ECD出口必须引出室外。 分析电负性强的物质时，进样量要10-9g。以防放射源能量大
13、大降低而失效。 火焰光度检测器(flame photometric detector, FPD) 火焰光度检测器，又称硫、磷检测器，它是一种对含磷、硫有机化合物具有高选择性和高灵敏度的质量型检测器，检出限可达10-12gS-1或10-11gS-11。这种检测器可用于大气中痕量硫化物以及农副产品，水中的毫微克级有机磷和有机硫农药残留量的测定。 工作原理:根据硫和磷化合物在富氢火焰中燃烧时，生成化学发光物质，并能发射出特征波长的光，记录这些特征光谱，就能检测硫和磷 气相色谱分离条件的优化 1.柱长的选择 增加柱长可使理论塔板数增大，但同时使峰宽加大，分析时间延长。因此，填充柱的柱长要选择适当。过长
14、的柱子，总分离效能也不一定高。一般情况下，柱长选择以使组分能完全分离，分离度达到所期望的值为准。 2.载气种类及其流速的选择 当u较小时，分子扩散项B/u是影响板高的主要因素，此时，宜选择相对分子质量较大的载气，以使组分在载气中有较小的扩散系数。当u较大时，传质阻力项Cu起主导作用，宜选择相对分子质量小的载气(H2,He)，使组分有较大的扩散系数，减小传质阻力，提高柱效。 当然，载气的选择还要考虑与检测器相适应 3.柱温的选择 在使最难分离的组分有尽可能好的分离前提下，采取适当低的柱温，但以保留时间适宜，峰形不拖尾为度。另外，柱温的选择还应考虑固定液的使用温度，柱温不能高于固定液的最高使用温度
15、，否则固定派挥发流失对分离不利。 固定液T最高T老化Tc固定液T最低 4.气化温度和检测室温度选择 一般选择Ti比Tc高出1050即可。在汽化室中，稍低于组分的正常沸点，也可完全汽化。但要注意：TDTi 5.载体粒度及筛分范围的选择 载体的粒度愈小，填装愈均匀，柱效就愈高。但粒度也不能太小。否则，阻力压也急剧增大。 6.进样量的选择 1准确、适量;控制在柱容量和仪器的线性范围之内，保证液体试样瞬间汽化。外标法定量时还要求准确定量进样。2在实际分析中最大允许进样量应控制在使半峰宽基本不变，而峰高与进样量成线性关系。如果超过最大允许进样量，线性关系遭破坏。3一般说来，色谱柱越粗、越长，固定液含量越
16、高，容许进样量越大。 7.进样速度选择 快且稳 保证试样立刻全部汽化集中被载气带入色谱柱。 裂解气相色谱 原理在一定条件下,高分子及非挥发性有机物遵循一定的规律裂解，即特定的样品能够产生特征的裂解产物及产物分布，据此可对原样品进行表征。把待测样品置于裂解器中，在严格控制的条件下快速加热，使之迅速分解成为可挥发的小分子产物，然后将裂解产物送到色谱柱中进行分离分析，通过对裂解产物的定性和定量分析，以及和裂解温度、裂解时间等操作条件的关系，可以研究裂解产物和原样品的组成、结构和物化性能的关系，并可以研究裂解机理和反应动力学。 应用裂解气相色谱法是一个样品破坏性的仪器分析方法，它的主要研究对象是天然和
17、合成高聚物、生物大分子、地质有机大分子和不挥发性有机物。 液相色谱分离 原理1被分离混合物由流动相液体推动进入色谱柱。根据各组分在固定相及流动相中的吸附能力、分配系数、离子交换作用或分子尺寸大小的差异进行分离。2色谱分离的实质是样品分子与溶剂以及固定相分子间的作用，作用力的大小，决定色谱过程的保留行为。 分类根据分离机制不同，液相色谱可分为：液固吸附色谱、液液分配色谱、化学键合相色谱、离子交换色谱以及分子排阻色谱等类型。 梯度洗脱，就是在分离过程中，让流动相的组成 (含有两种或两种以上极性不同的溶剂)按一定程序连续变化。梯度洗脱十分类似气体色谱中的程序升温，通过改变流动相组成，来达到改变组分k
18、的目的。改变流动相的极性、离子强度、pH值、盐浓度，从而产生了相应的浓度梯度、极性梯度、离子强度梯度、pH梯度、盐梯度。 梯度洗脱的优点是：(1)改善分离，加快分析速度，(2)改善越形，减少施尾，增加柱效，有利于痕量组分的检测；(3)增加峰容量(4)由于强烈滞留的组分不容易残留在柱上，因而可保持柱性能长期良好。 梯度洗脱的缺点是：仪器成本高，进行下次分析时，更换流动相需要时间；不同溶剂的紫外吸收程度稍有差异，可能引起基线漂移。 梯度洗脱原理：在液相色谱中用2种不同极性的流动相，在分离过程中按一定的比例连续的变化，通过自身配比的改变而改变其极性，以实现对复杂物质的分离。 应用 具有较宽k值范围的
19、样品; 大分子样品; 样品含有晚流出干扰物; 溶于弱溶剂的样品稀溶液。 注意事项 柱外展宽是指色谱柱外的因素所引起的峰展宽，主要包括进样系统、连接管道及检测器中存在死体积。柱外展宽可分柱前和柱后展宽。进样系统是引起柱前展宽的主要因素，因此高效液相色谱法中对进样技术要求较严。 1.预防堵塞 柱易被极细的颗粒堵塞，因此必须将流动相仔细地蒸馏、过滤。防止细菌生长的办法是加入抑制剂，抑制剂不能干扰分离和测定 2.柱子堵塞后需要仔细拆洗 柱压明显升高，柱子可能部分堵塞。堵塞最容易发生在极窄的入口接头处以及入口、出口筛板处。堵塞后需要仔细拆洗，清除堵塞物，但必须防止较强的机械震动，以防扰动柱内的固定相层，
20、使柱效发生变化。 3柱子的实际操作压力应低于填装时的最高压力，最好在最高压力的一半以下。实际操作压力过高，易使入口的固定相层下沉，形成一个空穴。若空穴形成，应重新装柱。在空穴中加入新的匀浆或玻璃微珠，也无法恢复到原来的柱效。 4用进样阀进样 不用注射器进样，以防止注射隔膜碎屑集聚在柱入口。 5无特殊说明的柱子不得反冲(流动相逆向流动)，否则使固定相层位移， 柱效下降。 6柱子两端用金属螺帽封闭，保存在纯净的有机溶剂中。 应该将柱子保存在以下pH范围内的水溶液流动相中：2pH 8.5。为了长期保存，最好用纯有机溶剂(如甲醇)清洗柱子。 7一定要防止柱子干涸，特别是硬胶柱。 8使用卫柱(Guard
21、 Column) 连续注射含有强烈滞留依赖较小 d: 选择性好，优于紫外 缺点: a:适用范围有一定的局限性 只适用于有荧光基团衍生化之后有荧光基团的化合物 b: 定量分析时线性范围较窄 6:蒸发光散射检测器 (ELSD) 原理:色谱柱流出液进入雾化器形成微小液滴，与通入的气体 (通常是氮气)混合均匀，经过加热的漂移管，蒸发除去流动相，样品组分形成气溶胶，用强光或激光照射气溶胶，产生光散射，用光电二极管检测散射光。 ELSD检测分为三个步骤：用惰性气体(一般是用N2)雾化脱洗液:流动相在加热管中蒸发:样品颗粒散射光后得到检测 重要参数与影响的因素: a: 雾化室温度:影响不大 b: 氮气流速:
22、气体流速增大，使响应值减小，故最佳气体流速是在可以接受的噪声基础上所产生的最大检测响应值的最低气体流速。 c: 漂移管温度:温度过低则流动相得不到充分挥发，使基线水平较高；温度过高则可能带来更大的噪声。 最佳温度是在流动相基本挥发的基础上产生可接受噪音的最低温度 d: 流动相流速: e盐对基线噪音的影响：对于高浓度的盐，盐的不完全挥发会造成基线增高，使样品响应值受气体流速的影响相对变小；对于低浓度的盐，盐的完全挥发使响应值受其影响较大所以，对用做缓冲液的盐，既要容易挥发，又要具有好的纯度一般盐的挥发性越大，所需的气体流速和漂移管温度越低！ 1因为ELSD在检测前将流动相蒸发，所以基线的噪声和漂
23、移都很小，因此基线稳定和特点2流动相的蒸发使得ELSD和梯度脱洗相容，因而可提高色谱分离的样品检测的灵敏度高。3不像紫外检测器，ELSD的激光源无需更换大大降低了运行成本。分辨率和缩短分离时间。 ELSD优点:a: 灵敏度大大提高，S/N高5-10倍,检测限可达ng级 b: 能进行梯度脱洗 是多成分分析中强有力的检测手段 c: 对环境温度变化不敏感 ,d:基线稳定,不会产生漂移 缺点:a: RID上使用的流动相不受特殊的制约，但是，ELSD由于以流动相挥发为大前提，限定为挥发性物质 (不能使用磷酸缓冲液等 ) b: RID可在宽广的范围内取得直线性，而ELSD由于原理上物质量与散射强度成为指数
24、关系，必需采用双对计算使工作曲线线性化。 反相健合相色谱法 应用：可以分离A、复杂的稠环芳烃以及大气中的这类痕量污染物；B、可以分离亲脂化物；C、可以用于人血清中药物残留量分析，以及激素分析；D、可以用于天然产物分析；E、用于农药以及环境中农药残留量的分析，等等。 反相键合相色谱的固定相：是采用极性较小的键合固定相，如硅胶-C18/C8/C4、硅胶-苯基 流动相：是采用极性较强的溶剂，如水-甲醇、水-乙腈、缓冲溶液等。 分离对象：多用于分离多环芳烃等低极性化合物； 优点反相键合相色谱法具有柱效高，能获得无拖尾色谱峰的优点。 实验条件的影响 1.温度:反相键合相色谱流动相为含有机溶剂的水溶液，粘
25、度高，因此最好在较高柱温下操作，以减小粘度。 2pH值:对于可离解的组分，改变流动相的pH值，可以改变分离的选择性。 3有机溶剂 4盐类:在反相色谱中，将合适的盐类加到流动相中，可以减少拖尾 。 5水的纯度:在反相色谱中，污染物会在柱头浓集。进行梯度洗脱时，随着流动相中有机溶剂含量逐渐增加，污染物就会被洗脱下来，影响分离和检测。 6进样量:样品过载，通常会引起峰形变差，导致前拖、后拖或平头峰 离子抑制法：对于在水溶液中能够离解的弱酸或弱碱样品，在反相键合相色谱中，通过调节流动相的pH值，抑制它们的离解，从而提高柱效得到对称的色谱峰，这种技术称为离子抑制法。 薄层色谱法将固定相均匀涂布在表面光滑的平板上形成薄层而进行色谱分离和分析的方法. 特点:分离能力强、灵敏度高、展开时间较短、显色方便。 分离机理: 吸附薄层色谱：固定相为吸附剂的薄层色谱。利用吸附剂对不同组分的吸附能力差异而实现分离.经过吸附、解吸、再吸附、再解吸最后混合物得到分离.K大，Rf值小，移动慢；K小，Rf大，移动快。 分配薄层色谱：固定相为液体，吸留在载体上的薄层色谱。利用被分离组分在固定相与流动相中的分配系数不同而被分离。常用的是反相薄层色谱法，固定相是烷基化学键合相，展开剂是水及与水相溶的有机溶剂。
