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1、一 .无菌室标准化规程1.无菌室应设有无菌操作间和缓冲间，无菌操作间洁净度应达到10000级，室内温度保持在20-24，湿度保持在45-60%。超净台洁净度应达到100级。 .2.无菌室应保持清洁，严禁堆放杂物，以防污染。 .3.严防一切灭菌器材和培养基污染，已污染者应停止使用。 .4.无菌室应备有工作浓度的消毒液，如5的甲酚溶液，70的酒精，0.1的新洁尔灭溶液，等等。 .5.无菌室应定期用适宜的消毒液灭菌清洁，以保证无菌室的洁净度符合要求。 .6.需要带入无菌室使用的仪器，器械，平皿等一切物品，均应包扎严密，并应经过适宜的方法灭菌。 .7.工作人员进入无菌室前，必须用肥皂或消毒液洗手消毒，
2、然后在缓冲间更换专用工作服，鞋，帽子，口罩和手套(或用70%的乙醇再次擦拭双手)，方可进入无菌室进行操作。 .8.无菌室使用前必须打开无菌室的紫外灯辐照灭菌30分钟以上，并且同时打开超净台进行吹风。操作完毕，应及时清理无菌室，再用紫外灯辐照灭菌20分钟。 .9.供试品在检查前，应保持外包装完整，不得开启，以防污染。检查前，用70的酒精棉球消毒外表面。 .10.每次操作过程中，均应做阴性对照，以检查无菌操作的可靠性。 .11.吸取菌液时，必须用吸耳球吸取，切勿直接用口接触吸管。 .12.接种针每次使用前后，必须通过火焰灼烧灭菌，待冷却后，方可接种培养物。 .13.带有菌液的吸管，试管，培养皿等器
3、皿应浸泡在盛有5%来苏尔溶液的消毒桶内消毒，24小时后取出冲洗。 .14.如有菌液洒在桌上或地上，应立即用5%石碳酸溶液或3的来苏尔倾覆在被污染处至少30分钟，再做处理。工作衣帽等受到菌液污染时，应立即脱去，高压蒸汽灭菌后洗涤。 .15.凡带有活菌的物品，必须经消毒后，才能在水龙头下冲洗，严禁污染下水道。 .16.无菌室应每月检查菌落数。在超净工作台开启的状态下，取内径90mm的无菌培养皿若干，无菌操作分别注入融化并冷却至约45的营养琼脂培养基约15ml，放至凝固后，倒置于3035培养箱培养48小时，证明无菌后，取平板35个，分别放置工作位置的左中右等处，开盖暴露30分钟后，倒置于3035培养
4、箱培养48小时，取出检查。100级洁净区平板杂菌数平均不得超过1个菌落，10000级洁净室平均不得超过3个菌落。如超过限度，应对无菌室进行彻底消毒，直至重复检查合乎要求为止。二 p2微生物实验室要求：1、 符合BSL-2实验室建设要求。2、 实验室门口带锁并可自动关闭。实验室的门有可视窗。3、 有足够的存储空间摆放物品以方便使用。在实验室工作区域处还有供长期使用的存储空间。4、 在实验室的工作区域处应有存放个人衣物的条件。6、 在实验室所有的建筑内配备高压蒸汽灭菌器，并按期检查和验证，以保证符合要求。7、 在实验室内配备生物安全柜。8、 设洗眼设施，必要时应有应急喷淋装置。9、 考虑机械通风，
5、如使用窗户自然通风，有防虫纱窗。10、有可靠的电力供应和应急照明。必要时，重要设备如培养箱、生物安全柜、冰箱等应设备用电源。11、实验室出口有在黑暗是可明确辨认的标识。 三 万级无菌室是微生物里面的指标要求达到一个点，比如尘埃粒子，沉降菌，气压，温度，湿度，光照度，等等四 P2（二级生物安全）实验室消毒隔离要求1 要求1.1 实验室相对独立，通过隔离门与公共部位相隔。实验核心区应包括实验室间及与相连的缓冲走廊，明确划分为清洁区、半污染区和污染区。1.2 实验室内所有物品应专用，需带出时必须严格消毒。1.3 实验室工作人员进入实验室应穿戴好个人防护用品1.4 培养基、组织、体液等必须放入防漏密闭
6、的容器内储运。1.5 血清学试验、致病菌检测、样品处理及分装应在II级生物安全柜内进行。1.6 样本离心时，离心机应放在排毒柜内或生物安全柜内进行，以防产生气溶胶或溅出。1.7 实验过程中使用的器材、实验废弃物均应按规定进行消毒、灭菌处理。1.8 实验完毕，先消毒物体表面，再按规定程序脱下个人防护用品，并进行空气消毒。1.9 离开实验室前，必须按有关规定清洁消毒双手。1.10 仪器设备运出实验室前必须按有关规定进行严格消毒。2 消毒方法2.1 实验室内空气消毒2.1.1 可使用送排风系统加强通风。2.1.2 紫外线灯管、灯车适用于无人室内空气、物体表面的消毒。常用的室内悬吊式紫外线灯对室内空气
7、消毒时安装的数量为平均1.5W/m3（照射强度70MW/cm2），照射时间不少于60分钟。2.2 实验室表面消毒2.2.1 地面实验室地面要湿式拖扫，禁止干拖干扫。需消毒时，可用有效氯为500-1000mg/L的含氯消毒液喷洒或拖地，消毒液用量不小于100ml/m3。污染区和清洁区拖把应专用，不得混用。使用后，用上述消毒液浸泡30分钟，再用水清洗干净，悬挂晾干，最好在阳光下晒干后备用。2.2.2 物体表面的消毒实验台、桌、椅、凳、门把手等可用有效氯为500-1000mg/l的含氯消毒液喷洒或擦拭，并作用10-15分钟后及时用清水擦洗，以除去残留的消毒液。2.2.3 手的消毒实验室工作完毕后应立
8、即进行手的清洗和消毒。采用感应式自动洗手设备，使用瓶装式液体皂，洗手后可用一次纸巾擦拭，最好用烘干机烘干。离开实验室前，脱掉工作服后，应进行手的清洗。2.2.4 病原微生物实验污水消毒按GB(8466-2001医疗机构污水排放要求执行。清洁管理制度1 实验室清洁的原则实验室的清洁工作要在保证生物安全的前提下进行，符合生物安全防护的要求，遵守先消毒后清洁的原则。一般情况下，生物安全实验室应由专门人员进行消毒，但每名实验室工作人员都有责任做好实验室清洁和消毒工作。2 清洁和消毒用品实验室应备有必要的清洁和消毒用品，主要包括拖把、抹布或纱布、水桶、消毒液、配好的75%乙醇等。3 消毒剂主要是过氧乙酸
9、、含氯消毒剂等。4 消毒器械主要是紫外线灯、紫外线灯车。紫外线的穿透能力特别弱，因此必须定时定期对紫外线灯进行清洁。一般情况下每月使用浸有75%乙醇的抹布擦拭灯管一次，擦拭前，先拔掉插头并冷却10分钟；还应经常检测紫外线灯的照射强度，当照射强度低于原始照射强度的70%时，就应由专业人员更换灯管，一般情况下每三个月检查一次紫外线灯的照射强度。5 保持实验室环境的整洁实验室内禁止饮食、吸烟、会客和喧哗。每项工作完成后，必须清洁台面，恢复实验室的待运行状态。实验室台面和器械应在每次实验操作完成后及时用消毒液擦拭表面。6 实验室地面的清洁实验室地面要湿式拖扫，禁止干拖干扫。需消毒时，可用0.1%过氧乙
10、酸或有效氯为500-1000mg/l的含氯消毒液喷洒或拖地，消毒液的用量不得少于100ml/m2。污染区和清洁区拖把应专用 ，不得混用。使用后，用上述消毒液浸泡30分钟，再用水清洗干净，悬挂晾干，最好在阳光下晒干后备用。每次实验完毕后由工作人员使用消毒液拖地，每月彻底清洗一次。7 实验台、桌、椅、凳。门把手的清洁可用0.1%过氧乙酸拖地或有效氯为500-1000mg/l的含氯消毒液喷洒或擦拭，作用10-15分钟后及时用清水擦洗，以除去残留的消毒液。8 纺织品的清洁棉织工作服、帽子、口罩等放入专用的污物袋中，用70以上热水加洗涤剂洗涤；有明显病原微生物污染时，随时喷洒消毒液消毒或放入专用污物袋中
11、，进行高压蒸汽灭菌处理。9 仪器设备的清洁可用消毒液或75%乙醇擦拭表面消毒，再用中性洗涤剂和清水擦洗去污。10 手的清洗实验室工作完毕后应立即进行手的清洗和消毒。采用感应式自动洗手设备，使用瓶装式液体皂，洗手后可用一次纸巾擦拭，最好用烘干机烘干。离开实验室前，脱掉工作服后，应进行手的清洗。消毒隔离制度1 及时消毒1.1 当实验微生物污染实验环境时，应立即停止实验，用有效消毒液进行消毒处理。1.2 实验室被空气和气溶胶传播的病原微生物污染时，应立即关闭实验室进行消毒处理。1.3 可疑污染的物品带出生物安全实验室前，应进行彻底灭菌或消毒处理。菌株和相关样本应对样本的载体和包装容器表面进行严格灭菌
12、或消毒处理后，方可带出，且在取出样本时应对载体进行再次消毒处理，对包装容器进行灭菌或消毒处理。1.4 盛装污染微生物实验耗材的容器应有足量的消毒液，用过的耗材立即浸入消毒液中。1.5 实验结束后，应立即对实验环境进行消毒处理，如擦洗、消毒工作台面、地面，开启紫外线灯照射1小时以上。1.6 实验完成后，对实验废弃物应立即进行高压灭菌或消毒等无害化处理。1.7 实验人员在实验结束后应立即清洗消毒双手，洗脸，必要时应洗澡更衣。2 彻底消毒2.1 对需消毒的物品应采取彻底的消毒措施，不留死角。2.2 消毒液浸泡消毒时，要将被消毒物品全部浸泡在消毒液中，对有管腔的物品，应将消毒液灌入管腔，排除气栓。2.
13、3 消毒剂擦拭消毒时，要将消毒液擦拭需要消毒物品的所有表面并保持充分作用时间。2.4 消毒对象的选择要根据试验情况而定，凡可能接触试验微生物的实验器材、试验环境(包括台面、地面、墙壁、空气)、人员(个体及防护用品等)均应采取相应消毒处理。3 有效消毒3.1 要根据消毒对象和微生物的种类选择合适的消毒和灭菌方法。3.1.1 对细菌芽孢、真菌孢子污染的物品，选用高水平消毒或灭菌法。对于受高抵抗力致病因子污染的器材必须用氢氧化钠和高压蒸汽(136，60分钟)进行消毒处理。3.1.2 对受到分枝杆菌、真菌、亲水病毒、螺旋体、支原体、衣原体等病原微生物污染的物品，选用中水平以上消毒方法。3.1.3 对受
14、到一般细菌繁殖体、亲脂病毒等污染的物品，选用中水平或低水平消毒方法。3.14 存在较多有机物(如血液、分泌物、排泄物)的物品消毒时，应加大消毒药物的使用剂量和/或处长作用时间。3.1.5 消毒物品上微生物污染特别严重时，应加大消毒剂的的使用剂量和/或处长作用时间。3.1.6 选择表面消毒方法，应考虑表面性质，光滑表面可选择紫外线消毒器近距离照射或消毒液擦拭，多孔材料表面可采用喷雾消毒法。3.2 消毒器械和消毒液应有卫生许可批文。3.2.1 消毒产品应在有效期内使用，应按照说明书标示的作用浓度(或强度)、作用时间和使用方法进行消毒操作。连续使用的消毒剂应定期测试有效成分含量并及时更换。3.2.2
15、 消毒、灭菌设备应定期测定消毒或灭菌效果。大型消毒、灭菌设备在正式使用前和大修后，应通过性能检测，证明可以有效使用。4 注意事项4.1 要减少消毒处理对人体的伤害、对物品的破坏、对环境的影响。4.2 根据被消毒物品的理化性状，选择相容性好的消毒剂。耐高温、耐湿的物品和器材，首选高压蒸汽灭菌；金属、玻璃器材、油剂类和干粉类等可选干热灭菌。畏热、畏湿、畏腐蚀及贵重物品，可选环氧乙烷薰蒸消毒、灭菌。4.3 用于人体消毒的消毒剂应选择对人体皮肤粘膜刺激较小的消毒剂。4.4 用于环境消毒的消毒剂，要严格按照消毒对象、目标污染物种类以及污染程度，以其达到有效消毒、又不污染环境为前提，合理选择消毒剂使用浓度
16、和作用时间。实验室废弃物管理1 实验后的废弃物如不及时处置则会污染环境，从而对工作人员造成危害，因此有关人员必须严格按规定执行。2 实验样本在处理和进行实验室检测时产生的废弃物，如平皿、吸头盒、塑料试管等应放入适当的容器或严格防漏的高压袋内。3 实验过程中产和生的污染性液体物质、废弃的液体标本、培养物等应放在盛有消毒液的严格防漏的专用容器中，并及时加盖。4 进行实验所必须使用的锐器，如一次性注射器、针头、微量移液器吸头、玻璃器具、手术刀片及碎玻璃，必须放入指定专用的坚壁容器中，加盖密封。5 以上所有盛有废弃物的容器，在每次实验完成后，应送高压灭菌。6 实验室所有垃圾及用过的乳胶手套、隔离衣、口
17、罩、一次性帽子等，装于相应的污物袋内，经高压消毒处理后丢弃。7 所有临床标本在留验期过后，均应高压消毒处理后再进行后续处理。8 高压锅应有专人负责，严格按使用说明操作，确保在121条件下，高压至少30分钟，以达到有关灭菌消毒要求。9 所有实验产生的废弃物，必须经严格高压消毒后方能运出实验区，并送到指定地点集中焚烧处理。10 空化学制品容器10.1 非危险性的空化学制品：依照通则消毒后，按普通废弃物分类处理。10.2 危险性空化学制品：不得将危险性空化学品容器按普通废弃物处理。根据有关危险化学制品处理办法进行相应无害化处理或由上级主管部门处理。11 如果遇到本作业指导书中未提及的情况，请与实验室
18、安全部门联系。常规安全操作规程1 禁止非工作人员进入实验室，参观实验室等特殊情况须实验室主任批准方可进入。2 严禁在实验室工作区饮食、吸烟、处理隐形眼镜、化妆、存放食物和日常生活用品。3 与实验无关的物品不得带入实验室。4 接触微生物或含有微生物的物品后，要洗手；离开实验室前要脱掉并洗手。5 实验过程中，严格按有关操作规程操作，降低溅出和气溶胶的产生。6 每天至少消毒一次工作台面，活性物质溅出后要随时消毒。7 以移液器吸取液体，严禁口吸。8 所有培养物、废弃物在运出实验室前必须经可行的消毒或灭活，如高压消毒。需运出实验室消毒的物品应置于防渗漏的专用密闭容器内。9 制定尖锐器具的安全操作规程。1
19、0 制定有效的防鼠防虫措施。11 实验室入口须贴上醒目的生物危险标志，注明危险因子、生物安全级别、实验室负责人及其他相关负责人姓名、电话。第二章 特殊安全操作规程1 实验室相对独立，明确划分清洁区、半污染区和污染区，三区不得交叉，人流与物流分开。2 进行感染性实验时，禁止他人进入实验室，或必须经实验室主任同意方可进入；免疫耐受或正在使用免疫抑制剂的工作人员不得进入实验室，或必须经实验室主任同意方可进入。3 工作人员应接受必要的免疫接种和检测（如乙型肝炎疫苗、卡介苗等）。4 必要时收集从事危险性工作人员的基本血清留底，并根据需要定期收集血清样本，检测并出具报告，如有问题及时解决。5 实验室主任应
20、制定规章制度和生物安全程序，并纳入生物安全手册，由实验室负责人专门保管，工作人员在进入实验室前要阅读并在工作中遵照执行；其他人员须告知其潜在风险并符合进入实验室要求，经实验室主任允许方可进入。6 工作人员须接受有关的潜在危险知识的培训，掌握预防暴露及暴露后的消毒处理程序；每年要接受一次最新的培训。7 除特殊情况，禁止在实验室使用锐器，尽可能使用塑料器材代替玻璃器材，必须使用时应严格遵守锐器安全操作规程。8 培养基、组织、体液及其他具有潜在危险性的废弃物须按废弃物处理制度处理。9人员暴露于感染性物质时，应及时向实验室负责人汇报，并记录事故经过和处理方案。10 禁止将无关动物带入实验室。11 实验过程中应使用验收合格的二级生物安全柜。
