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1、不同浓度卡铂对宫颈癌Hela细胞抑制作用的研究摘要：采用MTT比色法测定卡铂对Hela细胞增殖的抑制效果，研究不同浓度卡铂对体外培养Hela细胞的抑制作用。结果表明：卡铂的浓度越大，对Hela细胞的增殖抑制越大。关键词：卡铂，不同浓度，Hela细胞，增殖抑制卡铂(cis- diammine- 1, 10- cyclobutane dicarboxylate platinum , CBDCA, JM- 8)又名碳铂。固态卡铂为白色结晶粉末,微溶于水,不溶于乙醇等有机溶剂。温度高于120 时外观逐渐变色,分解温度247 258 。固态卡铂对光较稳定,在水溶液中不稳定,易发生降解,降解产物有二水二氨
2、合铂,紫外光照射加速其降解1。卡铂是顺铂的衍生物, 属第二代铂类复合物,由于其抗肿瘤作用较强, 而消化道反应及肾毒性较低, 因而得到广泛应用。卡铂作为一种细胞周期时相的非特异性药物与烷化剂的作用类似, 是金属配位剂,卡铂分子内的铂与DNA 的相邻鸟嘌呤基团结合而产生的链间和链内的交联, 通过破坏DNA 的化学结构使肿瘤细胞无法进行自我复制而抑制了肿瘤细胞的生长1。1 材料、试剂和方法1.1 材料体外培养Hela细胞。1.2 试剂5 mg/ml MTT溶液、二甲基亚砜（DMSO）、DMEM液+20%小牛血清（FCS）、DMEM液+0.25%胰蛋白酶、卡铂等。1.3 方法1.3.1 接种：收集对数
3、期细胞，调整细胞悬液浓度，使细胞浓度为23*104/ml，每孔加入细胞悬液200l，使每孔内的细胞数为4000- 6000个。1.3.2 培养与药物处理：培养箱内培养2436h，吸出培养液加入不同浓度梯度（0.6ug/mL,1.2ug/mL，2.4ug/mL，4.8ug/mL）的卡铂各200l，每个浓度接种4孔作为重复实验，否则难以反应真实情况。1.3.3 呈色：培养箱内继续培养到第3天，于倒置显微镜下观察细胞生长情况后，每孔加5 mg/ml的MTT溶液20l，继续孵育4h，终止培养；快速翻转培养板，弃去孔内培养上清液；然后每孔加DMSO 150l，振荡30min，使结晶物充分融解。1.3.4
4、 比色：选择490nm波长，在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值，记录结果。1.3.5 计算与分析：按照公式（如下）计算卡铂处理对细胞增殖率的影响。若该值为正说明药物对细胞增殖具有抑制作用，若值为零表明药物对细胞增殖无影响；若值为负说明药物对细胞增殖具有促进作用。 细胞增殖抑制率=（对照组吸光值 - 药物处理组吸光值）/对照组吸光值*100%1.3.6 对照设置：本实验设置调零孔（培养基、MTT、二甲基亚砜），且必须设置对照孔（细胞、培养液、MTT、二甲基亚砜）。2、实验结果与分析：表一：实验结果与分析数据表空白（不加卡铂和Hela细胞）对照（不加卡铂）卡铂浓度（ug/mL）项目0.61.240
5、80光吸收值0.0680.8010.6370.5040.4940.4990.0620.9170.7660.6120.4870.4660.0770.8590.5020.5610.4720.5060.0730.7990.6560.4940.4850.369平均光吸收值0.070.8440.640 0.543 0.485 0.460 去空白后值0.7740.570 0.473 0.415 0.390 抑制率26.32%38.92%46.45%49.61%图一：卡铂浓度对Hela细胞抑制率的标准曲线由表一和图一可分析：卡铂浓度越高，对应的吸光度值越低，其对Hela细胞的抑制率就越高。其中个浓度的抑制率
6、大小排列为：0.6ug/ml1.2 ug/ml 2.4 ug/ml 4.8 ug/ml.由实验结果可以得出：卡铂的浓度越大，对Hela细胞的增殖抑制越大。3.讨论：MTT法是二十世纪八十年代发展起来的一种快速、简便的以活细胞代谢物还原剂MTT噻唑蓝为基础的一种检测细胞数量的方法，由Mosmann 在1983年首先在鼠淋巴细胞系的研究中应用于检测IL-2等细胞因子对细胞存活和增殖的影响2。卡铂是一种类烷化剂的抗肿瘤药物，主要是通过选择性地攻击DNA碱基的氮原子，特别是鸟嘌呤的第7位氮原子，它也可与胞嘧啶的第3位氮原子结合。由于和DNA呈交叉联接，对DNA的构型有明显影响，使双螺旋解旋使分子变短；
7、可与DNA形成链内交联，也可形成链间交联或DNA-蛋白质间的交叉联结，由于其可使DNA的模板作用失活，从而抑制DNA合成而抑制肿瘤的生长3。参考文献：1 1金宜纫,杨一昆,黄天术,等.抗癌新药卡铂的化学特性.中国药学杂志,1994,29 (1):4143.2 唐亚辉，马葵，韩居然，等MTT药物敏感试验在指导胃癌及原发肝癌化疗中的作用J肿瘤防治研究，2001，28(1)：37383 王晓慧.P63、P53基因在卵巢癌中的表达及其在卡铂诱导卵巢癌细胞凋亡的变化.博士学位论文，2006，第1-114页. 4陈启蒙.抗癌药卡铂的临床应用进展.JournalofChinesePh ysician,2000,2(9):144-145.5 秦婷婷，唐东平,MTT方法体外应用新进展J,现代肿瘤医学2008年10月
