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1、 河北农业大学本 科 毕 业 论 文题 目：刺萼龙葵生物碱分离及对小菜蛾毒力测定的初步研究学 院： 植物保护学院学 生 姓 名： 专 业：植 物 保 护 班 级 学 号：2011032010116指导教师姓名： 指导教师职称：教 授 刺萼龙葵生物碱分离及对小菜蛾毒力测定的初步研究 （河北农业大学 植物保护学院 保定 071000）摘要：本实验研究了刺萼龙葵中生物碱对小菜蛾的杀虫活性，并对其活性成分进行了提取分离。结果表明，对刺萼龙葵种粉95%乙醇粗提物中的生物碱进行小菜蛾毒力测定时，药膜法对小菜蛾的毒力测定效果比用浸渍法要好，小菜蛾的校正死亡率达26.71%；方案一、方案二分离后的生物碱对小菜
2、蛾的杀虫活性均有提高，小菜蛾的校正死亡率分别为36.37%、31.82%，方案一对刺萼龙葵中生物碱分离效果比方案二要好。关键词：刺萼龙葵；生物碱；分离；小菜蛾；毒力测定；A preliminary study of separation of alkaloid of Solanum rostratum Dunal and virulence test against Plutella xylostellaStudent:Zhao yanxingAdvisor:Zhang Jinlin(Agriculture University of Hebei Baoding 071000)Abstract
3、: This paper have studies the insecticidal activity of alkaloids of the Solanum rostratum Dunal against the Plutella xylostella ,and the extraction and separation of its active ingredients.The results showed that when use alkaloids of 95% ethanol crude extraction of the Solanum rostratum Dunal for v
4、irulence test of Plutella xylostella,The pellicles law is better than Impregnation method when dovirulence determination to the Plutella xylostella ,the Plutella xylostella corrected mortality was 26.71%；insecticidal activity against the Plutella xylostella of separated alkaloids increased both in t
5、he program one and program two ,option one:the Plutella xylostella corrected mortality was 36.37%;option two:the Plutella xylostella corrected mortality was 31.82%,therefor, program one is better than Option two in the separated effect of alkaloid of Solanum rostratum Dunal.Keywords:Solanum rostratu
6、m Dunal;Alkaloid;Separate; Plutella xylostella;Virulence test1引 言人类赖以生存的生态环境与世界人口日益增长的需要决定了化学农药仍然是人类用于控制病、虫、草等有害生物为害的一项重要手段，并在农林生产的发展中起着积极的作用1。但由于人类广泛并大量使用化学农药，有害生物的抗药性已成为病、虫、草等有害生物防治所面临的严峻挑战。尤为突出的是，由于化学杀虫剂的广泛使用而导致害虫抗性的问题十分严重，为解决害虫的抗药性问题，人们开始利用新型杀虫剂。由于植物源杀虫剂不产生抗性、无药害、有肥效、对作物生长有刺激作用、可兼治病虫害，而且取自自然，用于自
7、然，能迅速降解，无环境问题，有高选择性，对人畜安全等优点，并且随着IPM理论、可持续发展战略的实施，市场上对植物源农药等无公害农药需求日趋迫切。因此，植物源农药的研究与开发日益受到人们的重视。目前，植物源农药研究的主流在于为创制新农药探索具有生物活性的先导化合物，这是一项要求刻意创新、追求原始性创新的工作。植物在与昆虫协调进化过程中产生了许多次生代谢物质，如生物碱。植物次生代谢物质在防御害虫侵害和调节植物本身以适应其生存环境方面起着重要作用。选择开发天然植物次生代谢物质，如研究各种外来入侵植物以及从大量的药用植物的次生代谢物质中筛选出对害虫有较好杀灭作用同时对非靶标生物安全、对环境友好的次生代
8、谢物质作为植物保护剂的原料，是保护植物免遭害虫侵害、克服害虫抗药性、避免环境污染的有效途径之一，有重要的理论意义和广阔的应用前景。1.1刺萼龙葵的形态特征刺萼龙葵（Solanum rostratum Dunal）又名堪萨斯蓟、黄花刺茄，英文名buffalobur、Kansas thistle或prickly night- shade等，是茄科（Solanaceae）茄属植物2，一年生杂草，植株高50 - 60 cm；通体自地茎绿色部位起除花瓣外都密布淡棕色的硬刺及星状毛，茎直立、多分枝，株形似茄秧；叶单片互生羽状不规则深裂，叶两面具刺，以中脉和叶柄处较多；总状花序生于叶腋外，花冠5，黄色，辐射
9、对称；花萼5，密被星状毛，筒钟状；雄蕊异形，大雄蕊1枚，小雄蕊4枚；雌蕊1，子房球形2室。果实为浆果椭圆球形，绿色，包被于具尖刺的宿存萼片内，成熟时黄褐色3。果实内含种子多数。种子不规则肾形，厚扁平状，黑色或深褐色4。1.2刺萼龙葵的来源与分布刺萼龙葵是新热带区和美国西南部的本土种，该种适生性极强，生长快而健壮。适生于温暖气候条件下的砂质土壤，在干硬或潮湿的耕地中也能正常生长，耐瘠薄、干旱，在牲畜栏里也能生长。由于该物种的入侵性很强，目前已在美国、加拿大、墨西哥、俄罗斯、韩国、孟加拉国、奥地利、保加利亚、捷克、斯洛伐克、乌克兰、德国、丹麦、南非、澳大利亚和新西兰等10多个国家和地区发生5-8。
10、刺萼龙葵在美国被列为有害杂草，在加拿大被列为入侵植物，被俄罗斯列为境内限制传播的检疫杂草9。我国农业部植物检疫研究所早在1982年就在辽宁省朝阳县进行了报道，并将它列为限制输入的检疫杂草。随后在东北吉林、河北及北京等地也相继发现了该植物10。1.3刺萼龙葵的为害刺萼龙葵是一种重要的外来入侵性植物，其入侵性很强。入侵物种可导致本地生物多样性的减少和生态系统的破坏，并带来严重的经济损失11。刺萼龙葵适应性强，生长快，分布广，与本地物种争夺阳光、营养、水分和生存空间，对作物具排挤性危害，可导致土地荒芜。主要危害小麦、玉米、棉花和大豆等农作物12-13，也降低草场质量14。刺萼龙葵不仅严重影响入侵地生
11、态系统多样性，同时还能伤害家畜、影响生活和农事操作14。刺萼龙葵全株具刺，能够直接对人和牲畜造成伤害，对绵羊羊毛质量有破坏性影响15-7;并能产生对中枢神经系统尤其对呼吸中枢有显著麻醉作用的神经毒素茄碱；茄碱的毒性高，牲畜食用后中毒症状为身体虚弱、呼吸困难、全身颤抖等，死于果实中毒的牲畜常表现为涎水过多的症状13。同时刺萼龙葵是马铃薯甲虫（Leptinotarsa decemlineata）、马铃薯金线虫(Heteroderarostochiensis)的重要寄主和马铃薯卷叶病毒（PLRV）的寄主，其中马铃薯甲虫作为中国一类危险性有害生物16。1.4研究目的及意义近年来，小菜蛾的抗性问题越来越
12、严重，给农业防治造成了很大困难。小菜蛾属鳞翅目菜蛾科，主要危害十字花科蔬菜。在夏季多雨年份发生较轻，而在少雨年份特别是十字花科蔬菜种植面积大、复种指数高的地区小菜蛾发生严重。1龄幼虫潜叶钻食叶肉，2龄幼虫啃食叶肉残留上表皮，成为透明的斑块。在留种田除取食嫩叶外还啃食嫩茎、钻食幼荚、食空种荚，伤口易腐烂并引发病害，严重影响蔬菜的商品性，严重发生时，造成蔬菜减产甚至绝收，对蔬菜生产形成很大威胁。为解决害虫的抗性问题，人们开始寻找适宜的植物源杀虫剂。刺萼龙葵的次生代谢产物生物碱是其杀虫活性的主要成分。植物的次生代谢是指有些生物体利用某些初生代谢产物为“原料”，在一系列酶的催化下，形成一些特殊的化学物
13、质的过程，这些特殊的化学物质即为次生代谢产物18。植物次生代谢产物可分为苯丙素类、醌类、黄酮类、单宁类、萜类、甾体及其甙、生物碱七大类18-21。生物碱的主要类型有:有机胺类(麻黄碱、益母草碱、秋水仙碱)、吡咯烷类(古豆碱、千里光碱、野百合碱)、吡啶类(菸碱、槟榔碱、半边莲碱)、茛菪烷类(阿托品、东茛菪碱)、咪唑类(毛果芸香碱)、喹唑酮类(常山碱)、 嘌呤类(咖啡碱、茶碱)、甾体类(茄碱、浙贝母碱、澳洲茄碱)、二萜类(乌头碱、飞燕草碱)、其他类(加兰他敏、雷公藤碱)。生物碱在植物体内的分布，往往是集中在某一部分或某一器官，是许多药用植物的有效成分，目前临床应用主要表现为抗癌、抗肿瘤、抗病毒、抗
14、菌、抗炎作用。一些生物碱因其具有防治病虫害等作用，被开发为植物源农药产品，成为近年来研究的新热点。据本实验室前期研究，发现刺萼龙葵的次生代谢产物生物碱对小菜蛾有杀虫活性，因此，在其基础上本实验对该生物碱进行了粗提取、分离，希望寻找到对小菜蛾有杀虫活性的具体生物碱类别，为开发防治抗性小菜蛾植物源杀虫剂进行了探索。1.5生物碱提取与分离一种植物中往往含有几种或几十种生物碱。因此，提取出来的总生物碱还需进一步分离，去除杂质、排除干扰物，保证分析结果的准确性。近年来，应用不同的溶剂探索出以下4种提取生物碱的方法：水提取法、酸性水溶液提取法、碱性水溶液提取法和有机溶剂提取法。生物碱的分离方法也很多，既有
15、经典的分离方法，如溶剂萃取法、蒸馏法、沉淀法、盐析法、结晶法、膜渗透升华法等；也有现代较为先进的分离方法，如色谱分离法。现把几种常用的方法介绍如下：硅胶柱色谱分离法，硅胶层析柱适用范围广，既能用于非极性生物碱也能用于极性生物碱，且成本低，操作方便，是常见的生物碱的分离方法。Al2O3柱色谱分离法，以Al2O3作为填料的层析分离法，适合于酸性大、活化温度较高的生物碱的分离。大孔树脂分离法，用大孔树脂分离提取生物碱，已有较多的研究。离子交换树脂分离法，已应用于生物碱的分离提取中。离子交换技术设备简单，操作方便，具有生产周期短、能源省、成本低、产品纯度高、不吸潮、不加辅料就可以成型等优点。高速逆流色
16、谱分离法，高速逆流色谱分离法是一种新的分离技术，它对生物碱的分离和制备具有很大的优势，特别是对进样量较大的样品具有独特的优点，其应用前景越来越引人注目22。本研究对刺萼龙葵的有效杀虫成分-生物碱进行了提取、分离，并对其进行了小菜蛾毒力测定，为进一步利用刺萼龙葵的化学成分开发天然产物农药提供理论依据。2. 材料与方法2.1 供试材料2.1.1 供试昆虫小菜蛾（Plutella xylostella）在养虫室（温度251，湿度70%，光照14 h，黑暗10 h）用蛭石培养的萝卜苗饲养。2.1.2 供试植物 刺萼龙葵（Solanum rostratum Dunal）采收于河北省张家口市万全县。2.1
17、.3 供试试剂 甲醇、95%乙醇、氯仿均为分析纯（天津市天大化工实验厂）；浓硫酸 (天津市天大化工试剂厂)；盐酸 (天津市天大化工试剂厂)；氨水、氢氧化钠均为分析纯（天津市科密欧化学试剂有限公司）；正丁醇（北京化学试剂公司）；2.1.4 设备仪器旋转蒸发仪（RE-52AA，上海亚荣生化仪器厂）；循环水式真空泵（河南省豫华仪器有限公司）；超声波清洗机（SB-5220，上海新芝生物技术研究所)；pH计（Delta320型，上海梅特勒托利多仪器有限公司)；电子天平（BS210S，北京赛多里斯天平有限公司)；水浴氮吹仪（北京成萌伟业科技有限公司）；离心机（上海新芝生物技术研究所）；植物样本粉碎机（周口
18、地区五七农业机械厂）；高速万能试样粉碎机（FW80，河北省黄骅市中兴仪器有限公司）。2.2 研究方法2.2.1 小菜蛾生物活性测定 （1）药膜法。将药液喷雾到洗净的新鲜的甘蓝叶上，待液滴挥发干，放入垫有润湿滤纸的培养皿中，挑取健康、生长一致的3龄幼虫供试。每个培养皿15头，用保鲜膜封口，扎适当多的小孔透气，放在适宜的条件下培养，并设有相应的吐温对照，每个处理重复三次，于药后24h分别检查小菜蛾的死亡虫数并计算死亡率。 （2）浸渍法。将洗净的新鲜的甘蓝叶放入垫有润湿滤纸的培养皿中，挑取健康、生长一致的供试3龄幼虫15头浸于药液中15 s，然后放入培养皿中，用保鲜膜封口，扎适当多的小孔透气，放在适
19、宜的条件下培养，并设有相应的吐温对照，每个处理重复三次，于药后24h分别检查小菜蛾的死亡虫数并计算死亡率。死亡标准：以试虫不能正常活动或者轻轻触动虫体无任何反应视为死亡。生物活性测定的平均数据均以“平均数标准误”表示。方程计算和统计分析均采用SPSS软件进行。 死亡虫数（头）死亡率（%）= 100 (1) 处理虫数（头） 处理死亡率（%）-对照死亡率（%）校正死亡率（%）= 100 (2) 1-对照死亡率（%）2.2.2刺萼龙葵95%乙醇粗提物的毒力测定 （1）种粉的制备 将已经风干的刺萼龙葵种子用细粉碎机进行粉碎，制成种粉并收集装袋，置于4冰箱冷贮保存供试验用。 （2）种粉中生物碱的粗提取
20、称取刺萼龙葵种粉200g，加入5倍体积的95%乙醇浸提12h，抽滤，然后再加入等量体积的95%乙醇第二次提取，抽滤合并两次滤液，滤液用旋转蒸发仪浓缩至膏状，将浸膏（粗生物碱）置于4冰箱冷贮备用，其步骤如图1所示。减压浓缩浸膏刺萼龙葵种粉95%乙醇1000ml浸提12h，超声波提取10min，过滤提取液图1 95%乙醇粗提刺萼龙葵杀虫物质（3）毒力测定将刺萼龙葵95%乙醇粗提物用0.2%吐温-80水溶液系列稀释成10000mg/L、5000mg/L、2500mg/L、1250mg/L、625mg/L的测定液，并以0.2%吐温-80水溶液作为空白对照，按照2.2.1的方法对小菜蛾进行生物活性测定。
21、2.2.3刺萼龙葵种粉中生物碱的分离方法（1）方案一用2%硫酸溶液对刺萼龙葵种粉中生物碱进行溶解、过滤，再用无机盐溶液、有机溶剂（苯、氯仿、正丁醇等）等进行层次萃取、分液、旋转蒸发、浓缩、定容等一系列操作分离得到5种类别的生物碱：分别为酚性弱碱性生物碱、非酚性弱碱性生物碱、酚性叔胺生物碱、非酚性叔胺生物碱、水溶性生物碱，按照2.2.1的方法对小菜蛾进行生物活性测定，其步骤如图2所示。刺萼龙葵种粉内生物碱酸水滤液2%H2SO4溶解、过滤CHCl3萃取有机溶剂层碱水层1%2%NaOH萃取碱水层CHCl3层酚性叔胺生物碱3CHCl3有机溶剂层非酚性叔胺生物碱4pH12正丁醇萃取正丁醇层水溶性生物碱5
22、酸水层（中强、强碱性生物碱）1） 氨水调pH9102） 有机溶剂萃取有机溶剂层碱水层 有机溶剂层非酚性弱碱性生物碱22222有机溶剂层（弱酸性生物碱）1%2%NaOH 液萃取CHCl3酚性弱碱性生物碱1图2 刺萼龙葵种粉内生物碱的分离流程方案一 （2） 方案二 用pH=2.0的盐酸溶液对刺萼龙葵种粉中生物碱进行溶解、过滤后，用氨水进行碱化，利用pH计分别调节为10、10.5、11三个类别，再用CHCl3对这三个类别分别进行萃取、分液、旋转蒸发、浓缩、定容等一系列操作，最终得到6个不同类别生物碱，按照2.2.1的方法对小菜蛾进行生物活性测定，其步骤如图3所示。碱水层6有机溶剂层3有机溶剂层5碱水
23、层2碱水层4有机溶剂层1pH=2.0的HCl溶解、过滤滴加氨水调节pHCHCl3萃取CHCl3萃取CHCl3萃取刺萼龙葵种粉内生物碱酸水溶液pH=10的溶液pH=10.5的溶液pH=11的溶液 图3 刺萼龙葵种粉内生物碱的分离流程方案二 3. 结果与分析3.1 刺萼龙葵种粉95%乙醇粗提生物碱不同浓度对小菜蛾毒力测定结果将刺萼龙葵95%乙醇粗提生物碱用0.2%吐温-80水溶液系列稀释成10000mg/L、5000mg/L、2500mg/L、1250mg/L、625mg/L的测定液，对小菜蛾分别采用喷雾饲喂法和浸渍饲喂法进行了毒力测定，24h后观察结果。结果表明（见表1、2），喷雾饲喂法校正死亡
24、率最大值为29.55%，浸渍饲喂法校正死亡率最大值为25.00%。综合比较喷雾饲喂法比浸渍饲喂法对小菜蛾毒力测定结果好一些。如图4、5所示，随着粗提生物碱浓度的增大，校正死亡率增大。浓度（mg/L）Concentration24h校正死亡率（%）Corrected mortality（%）of 24h1000050002500125062526.716.5318.186.8213.643.944.5502.283.94图4 药膜法对小菜蛾毒力测定结果线性关系图Figure 4 Linear diagram of film of the results with the Plutella xyl
25、ostella virulence text by pellicles law 表1 刺萼龙葵95%乙醇提取物不同浓度对小菜蛾的毒力测定结果（药膜法）Table1 The virulence test resultsagainst Plutella xylostella of 95% ethanol extract at different concentration in Solanum rostratum by pellicles law表2 刺萼龙葵95%乙醇提取物不同浓度对小菜蛾的毒力测定结果（浸渍法）Table2 The Virulence test against Plutella
26、 xylostella of 95% ethanol extract at different concentration in Solanum rostratum by impregnated method浓度（mg/L）Concentration24h校正死亡率（%）Corrected mortality（%）of 24h1000050002500125062523.36.5313.6410.429.093.934.556.820.0033.94图5 浸渍法对小菜蛾毒力测定结果线性关系图Figure 5 Linear diagram of film of the results with
27、the Plutella xylostella virulence text by impregnation method 3.2 刺萼龙葵种粉95%乙醇粗提生物碱方案一分离对小菜蛾毒力测定结果表3 方案一分离刺萼龙葵生物碱对小菜蛾的毒力测定结果（药膜法）Table3 The Option One virulence assay results against Plutella xylostella of separated alkaloids of the Solanum rostratum (pellicles law)将刺萼龙葵种粉95%乙醇粗提生物碱，用2%硫酸溶液溶解、过滤后，再用无
28、机盐溶液、有机溶剂（苯、氯仿、正丁醇等）等进行层次萃取、分液、旋转蒸发、浓缩、定容等一系列操作分离得到5种类别的生物碱：分别为酚性弱碱性生物碱、非酚性弱碱性生物碱、酚性叔胺生物碱、非酚性叔胺生物碱、水溶性生物碱，依次编号为1、2、3、4、5。分别称取这5种生物碱各0.8g，用0.2%吐温-80水溶液分别稀释成10000mg/L的测定液，采用喷雾饲喂法对小菜蛾进行毒力测定，24h后观察结果。结果表明（见表3），刺萼龙葵种粉95%乙醇粗提生物碱进行分离后，对小菜蛾的杀虫作用有所增强。比较5种类别生物碱对小菜蛾的毒力测定结果，如图6所示，可知5种类别的生物碱对小菜蛾的杀虫活性强弱为：35241。生物
29、碱类别(Alkaloid category)24h校正死亡率（%）Corrected mortality（%）of 24h1234511.368.8027.786.8136.373.9320.456.8234.093.94图6 5种类别的生物碱对小菜蛾的毒力测定结果Figure 6 The Plutella xylostella virulence test result of 5 types of alkaloids 待添加的隐藏文字内容23.3 刺萼龙葵种粉95%乙醇粗提生物碱方案二分离对小菜蛾毒力测定结果刺萼龙葵种粉95%乙醇粗提生物碱，用pH=2.0的盐酸溶液对刺萼龙葵种粉内生物碱进行
30、溶解、过滤后，用氨水进行碱化，利用pH计分别调节为10、10.5、11三个类别，再用CHCl3对这三个类别分别进行萃取、分液、旋转蒸发、浓缩、定容等一系列操作，最终得到六个不同类别，编号依次为1、2、3、4、5、6。分别称取这6种生物碱各0.8g，用0.2%吐温-80水溶液分别稀释成10000mg/L的测定液，采用喷雾饲喂法对小菜蛾进行毒力测定，24h观察结果。结果表明（见表4），随着pH的增大，校正死亡率增大。如图7所示，可知其6个类别生物碱中杀虫活性较高的种类是5号。表4 方案二分离刺萼龙葵生物碱对小菜蛾的毒力测定结果（药膜法）Table4 The Option Two Plutella
31、xylostella virulence assay results of separated alkaloids of the Solanum rostratum (pellicles law)不同pH值(Different pH values)生物碱类别(Alkaloid category）24h校正死亡率（%）Corrected mortality（%）of 24h1012345615.9110.419.114.1925.01022.7310.4231.82029.553.9310.511 图7 6种类别的生物碱对小菜蛾的毒力测定结果 Figure 7 the Plutella xylo
32、stella virulence test results of 6 types of alkaloids 4.结论与讨论4.1结论（1） 通过用刺萼龙葵95%粗提生物碱分别采用药膜法、浸渍法对小菜蛾毒力测定得出采用药膜喂法对小菜蛾进行毒力测定比较好些。（2） 通过对刺萼龙葵95%粗提取物中生物碱进行系统分离，得出5种粗分的生物碱类别。它们分别为酚性弱碱性生物碱、非酚性弱碱性生物碱、酚性叔胺生物碱、非酚性叔胺生物碱、水溶性生物碱。通过对小菜蛾的毒力测定，得出分离后的各类别生物碱，对小菜蛾的杀虫活性较没分离前的偏高些；5种类别生物碱的杀虫活性依次为：非酚性叔胺生物碱酚性叔胺生物碱酚性弱碱性生物碱
33、水溶性生物碱非酚性弱碱性生物碱。（3） 通过对刺萼龙葵95%粗提取物中生物碱，利用生物碱的碱性差异原理进行分离,得出3种pH下的6种不同类别,通过对小菜蛾的毒力测定,得出分离后的各类别，对小菜蛾的杀虫活性较没分离前的偏高些；其6个类别中杀虫活性较高的种类是5号。（4） 综合比较两种分离方法：方案一小菜蛾的最高校正死亡率为36.37%；方案二小菜蛾的最高校正死亡率为31.82%。可初步得知分离方法方案一比方案二较好些。4.2讨论植物次生代谢物质结构千差万别，对不同溶剂，其溶解度差异较大。活性成分的分离就是根据化合物结构的这种“相似相溶”的原理，采用极性由强到弱的几种不同极性的溶剂进行分步提取，使
34、各成分依其在不同极性溶剂中溶解度的差异而分离得到。比较不同溶剂提取物的活性特点，可以明确活性物质的最佳提取溶剂。据本实验室前期研究结果，本实验选择了95%乙醇作为溶剂对刺萼龙葵种粉进行提取。4.2.1刺萼龙葵95%粗提生物碱对小菜蛾毒力测定方法的筛选用95%乙醇作为溶剂对刺萼龙葵种粉进行提取，结合杀虫试验进行了提取物活性追踪。得出药膜法对小菜蛾生物活性测定结果比较好。用浸渍法处理时，可能浸虫的程度不同，没有把握好时间，导致结果不佳。因此，本实验选药膜法为分离类别生物碱对小菜蛾杀虫活性毒力测定的方法。对于更佳的对小菜蛾毒力测定的方法还有待进一步研究。4.2.2刺萼龙葵种粉95%粗提生物碱的粗分离
35、方案刺萼龙葵为茄科茄属植物，茄属植物含有多种类型的化学成分，主要为生物碱。生物碱是一类具有高效杀虫活性的物质。为了验证分离前后的生物碱对小菜蛾的杀虫活性是否有差异，本实验有目的地对活性物质生物碱进行了分离。结果表明：分离后的生物碱对小菜蛾的杀虫活性强些。本实验只是探索性的摸索总生物碱的粗分方法。实验中采用了两种方案对粗提生物碱进行分离，得到的各类别对小菜蛾的杀虫活性不同。由于时间等方面原因，实验没有明确分离后具体各类别究竟是什么物质。因此，有待于继续实验证明。生物碱呈碱性，还可以用其他的方法进行分离。这些方法既有经典的分离方法,如蒸馏法、沉淀法、结晶法、膜渗透升华法等,也有现代较为先进的分离方
36、法,如色谱分离法。因此，最佳的分离提纯方法有待于进一步筛选、研究。4.2.3实验存在的问题实验毒力测定结果：小菜蛾的死亡率不高，可能是：1、实验过程中（提取、分离、生测）操作不当导致；2、实验的处理和重复数目少；3、生测时培养条件（温度、湿度）的控制对小菜蛾生长的影响；4、实验采用的方法有欠缺：刺萼龙葵中提取的活性物质是粗提物，对其分离也只是粗分离。因此，本实验在方法（提取、分离、生测）上需要进行深入研究与试验。此外，对所得活性物质生物碱的鉴定不仅要定性还要定量，真正明确其为何物。以便更好的应用于解决小菜蛾的抗性问题上。 参考文献1徐汉虹.植物化学保护学(第四版)M.北京:中国农业出版社,20
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41、,2005, 27(1):28-31.21陆景陵.植物营养学M.北京:中国农业大学出版社,2003,192-210.22温衍生,赵冬香.杀虫生物碱的研究进展J.中国热带农业科学院环境与植物保护研究所,海南儋州2007( 6):571-737.致谢本论文是在我的导师张金林教授的悉心指导下完成的。衷心感谢张老师给予我在本实验室实习的机会，并在整个实习中对我的悉心的指导和帮助。张老师严谨的治学态度，务实的工作精神深深地感染着我，并激励着我。在此向张老师致以最崇高的敬意和诚挚的谢意！感谢实验室中的所有师兄师姐，特别是李建强师兄、龚占虎师兄、霍静倩师姐。在我的实验过程中他们给了我很多帮助。感谢一起实习的同学们。感谢农药实验室这个团结协作、互助互爱、互相理解、积极向上、勇于进取的集体。正是在这个充满关爱、充满上进、充满和谐的农药实验室：我掌握了一些基本的实验技能，顺利完成自己的毕业论文，圆满结束了自己的毕业实习。学到了许多书本上学不到的知识！通过这段时间的实习我收获了很多，不仅在学习和生活上，更重要的是在思想上。这一段实习经历必将铭记我心，为我今后的学习生涯，乃至整个人生保驾护航。再次衷心感谢，陪伴我度过这个难忘的本科毕业实习的，所有老师、师兄、师姐和同学们！ 2012年9月20日 于河北农业大学
