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1、中兽医基础与临床 实验教学,1,中兽医基础与临床 实验教学,实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用理论验证性实验,2,中兽医基础与临床 实验教学,实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用,大纲要求：【教学目标】通过实验使学生加深对延胡索功效的认识，加深对中药材功能的理解和记忆,并验证延胡索镇痛的药理作用。,3,中兽医基础与临床 实验教学,【实验考核】,实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用,实验考勤实验态度操作过程实验报告实验分析实验关键技术,4,中兽医基础与临床 实验教学,延胡索（第九节理血药2）,【基源】本品为罂粟科植物延胡索Corydalis yanhusuo W.T.Wang 的干燥块茎。,【相关理论】,
2、实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用,5,中兽医基础与临床 实验教学,延胡索,【产地分布】主产于浙江、江苏、湖北、湖南、辽宁、山东等地。,【相关理论】,实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用,6,中兽医基础与临床 实验教学,延胡索,【性状】本品呈不规则的扁球形，直径0.5 1.5cm。表面黄色或黄褐色，有不规则网状皱纹。顶端有略凹陷的茎痕，底部常有疙瘩状凸起。质硬而脆，断面黄色，角质样，有蜡样光泽。气微，味苦。,【相关理论】,实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用,7,中兽医基础与临床 实验教学,延胡索,【炮制】延胡索 除去杂质，洗净，干燥，切厚片或用时捣碎。醋延胡索 取净延胡索，照醋炙法（参照兽药典附录）炒
3、干，或照醋煮法（参照兽药典附录）煮至醋吸尽，切厚片或用时捣碎。,【相关理论】,实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用,延胡索,醋延胡索,炙,醋炙：引药归肝经，加强镇痛效果。,8,中兽医基础与临床 实验教学,延胡索,【性味归经】辛、苦，温。归肝、脾经。【功能】活血散瘀，行气止痛。【主治】“诸痛”气滞血瘀，跌打损伤，产后瘀阻，风湿痹痛。,【相关理论】,实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用,9,中兽医基础与临床 实验教学,延胡索,【化学成分】本品主要含生物碱，其主要成分为延胡索甲素、延胡索乙索、延胡索丙素(原阿片碱)、延胡索丁素等。尚含淀粉、挥发油、树脂、去氢紫堇碱等。,【相关理论】,延胡索素,实验五、延胡索
4、对小白鼠的镇痛作用,延胡索乙素,10,中兽医基础与临床 实验教学,延胡索,【现代研究】（1）有明显的镇痛作用。（2）有镇静、催眠作用。（3）减少胃液分泌。（4）扩张冠状血管。,【相关理论】,实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用,11,中兽医基础与临床 实验教学,【实验原理】热板法,延胡索能活血行气止痛，是止痛的良药。热板法是筛选镇痛药的经典方法：小鼠的足部受热板刺激而产生疼痛时，就发生舔足的特殊反应。以接触热板到舔后足所需的时间作为痛阈值，以此为观测指标。,舔足,t 30,550.5,第一组：延胡索液,第二组：哌替啶注射液,第三组：生理盐水,实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用,舔足,12,中兽医基础
5、与临床 实验教学,【实验原理】热板法,延胡索能活血行气止痛，是止痛的良药。热板法是筛选镇痛药的经典方法：小鼠的足部受热板刺激而产生疼痛时，就发生舔足的特殊反应。以接触热板到舔后足所需的时间作为痛阈值，以此为观测指标。,550.5,第二组：哌替啶注射液,第三组：生理盐水,实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用,舔足,杜冷丁,13,中兽医基础与临床 实验教学,【实验原理】热板法,延胡索能活血行气止痛，是止痛的良药。热板法是筛选镇痛药的经典方法：小鼠的足部受热板刺激而产生疼痛时，就发生舔足的特殊反应。以接触热板到舔后足所需的时间作为痛阈值，以此为观测指标。,舔足,t 30,550.5,第一组：延胡索液,第
6、二组：哌替啶注射液,第三组：生理盐水,实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用,舔足,14,中兽医基础与临床 实验教学,【实验组织】,班级进行分组，每组名学生；每组用15只预选合格实验动物；每组有一名专业教师或实验教师（兼职教师）进行指导。,实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用,15,中兽医基础与临床 实验教学,实验动物 小白鼠（合格15/组）。,1,【实验准备】,实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用,雌性为什么？,16,中兽医基础与临床 实验教学,实验器材 鼠笼、水浴锅、烧杯（500ml）、天平、注射器、秒表、钳子、镊子、棉棒等。,2,【实验准备】,实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用,17,中兽医基础与临床
7、实验教学,实验药品 哌替啶注射液lmgml延胡索水煎醇沉液4gml。生理盐水苦味酸（标记用）,3,【实验准备】,实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用,18,中兽医基础与临床 实验教学,【课程组织过程】,教师演示关键步骤和技术。学生在教师的指导下亲自操作各种按摩手法。结果统计和讨论以及分析总结。,实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用,19,中兽医基础与临床 实验教学,【方法与步骤】,要求：浓度：2；温度：室温（0）,醇沉,（一）延胡索的煎制水煎醇沉（提前准备）,实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用,水煎,醇沉：水煎剂经浓缩到一定浓度（12g/ml）后，加入23倍量95%乙醇（使含乙醇量达到6070%），边加
8、边搅拌，即有沉淀析出，置冰箱内24小时使沉淀完全。过滤，滤液回收乙醇后以蒸馏水溶解。过滤后稀释成规定浓度即可，必要时可以重复此乙醇沉淀23次。,20,中兽医基础与临床 实验教学,【方法与步骤】,调节水浴锅，使温度恒定在550.5，每次取小鼠1只，放入烧杯内。记录自放入烧杯至出现舔后足所需时间(s)，作为该鼠的痛阈值。,（二）预选实验动物结合给药前第一次痛阈值测定,550.5,t 30,第1次,实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用,21,中兽医基础与临床 实验教学,【方法与步骤】,t30为合格动物 预选合格小鼠15只/每实验小组。,（三）预选实验动物结合给药前痛阈值测定,t 30,550.5,第1次
9、,实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用,22,中兽医基础与临床 实验教学,【方法与步骤】,分3组 每组5只。,（四）实验动物分组（15只）第2次测定给药前痛阈值,第2次,第一组：实验组 a,第二组：阳性对照组 b,第三组：阴性对照组 c,再次测定痛阈值，计算平均数，作为该鼠给药前的痛阈值 a1_ a15;b1_ b15;c1-c15.,实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用,23,中兽医基础与临床 实验教学,【方法与步骤】,（五）用药,第一组：实验组 a,第二组：阳性对照组 b,第三组：阴性对照组 c,第一组：延胡索液 0.2ml10 g,第二组：哌替啶注射液0.2ml10g,第三组：生理盐水 0.2m
10、l10g,腹腔注射,0.2ml10 g体重,实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用,腹腔注射（ip）左手固定小鼠，使腹部在上，头部下倾，右手持注射器，取45角刺入一侧下腹部向头端刺入腹腔（图）。进针部位不宜太高，刺入不能太深，以免伤及内脏。注射量一般为0.10.2 ml/10g体重。,24,中兽医基础与临床 实验教学,【方法与步骤】,（五）测定给药后小鼠痛阈值,给药后的15、30、60、90min测定各鼠痛阈值。,若小鼠在热板上60s仍无痛觉反应，应取出，按60s计。,a,b,c,15 30 60 90,实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用,25,中兽医基础与临床 实验教学,【方法与步骤】,（五）数据记
11、录,实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用,26,中兽医基础与临床 实验教学,【方法与步骤】,（六）数据处理（1）组内处理,实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用,27,中兽医基础与临床 实验教学,【方法与步骤】,（六）数据处理（2）班级12小组数据汇总,实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用,28,中兽医基础与临床 实验教学,【方法与步骤】,（六）数据处理（2）,痛阈提高百分率,用药后平均痛阈值,用药前平均痛阈值,用药前平均痛阈值,100%,实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用,29,中兽医基础与临床 实验教学,【方法与步骤】,数据参考,实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用,30,中兽医基础与临床 实验教学,【注意事
12、项】,室温以1520为宜，过低则小鼠反应迟钝，过高则过于敏感，而引起跳跃，影响实验的准确性。正常小鼠一般放入烧杯后1015s内出现不安，举前肢，舔后足，踢后肢，跳跃等现象。这些动作均不作为疼痛指标，只有舔后足才作为疼痛的指标。一般不选用雄性小鼠，因雄性小鼠阴囊可触及烧杯底部，易呈现敏感反应，影响实验结果。,实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用,31,中兽医基础与临床 实验教学,【开始演示】,教师演示,实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用,32,中兽医基础与临床 实验教学,学生操作,【指导操作】,捉小鼠称重选择实验动物（给药前第一次痛阈值测定）实验动物分组（第2次痛阈值测定）测定给药后15、30、60、90的痛阈值数据记录数据处理实验动物处理,实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用,33,中兽医基础与临床 实验教学,【实验总结】,数据收集发现问题布置作业实验报告实验考核,【问题讨论】,试述延胡索镇痛的有效成分及机理。,实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用,34,中兽医基础与临床 实验教学,本次实验结束！,实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用,35,
