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1、摘要本文主要对淮山多糖的制备及其抗氧化活性进行了研究。首先，是利用水提取法提取粗品的淮山多糖，得到白色的固体。其次，对苦瓜多糖在清除羟基自由基、超氧自由基和DPPH自由基能力方面作了研究。生物学活性研究表明其具有抗氧化活性，而且随着浓度的增加而增加，最终达到稳定。关键词：淮山多糖、提取、抗氧化性AbstractThe extraction technology of polysaccharide from Chinese yam polysaccharide and the biological Activity of Anti-oxidation on polysaccharidewhich
2、 extraction from that were studied in this paperThe first, 22222222222222222222222222222222222222222222222222222222222222222222222222222222222222222222222222222222222222It extracted the crude Chinese yam polysaccharide that is some white solid using water extraction method. The second,The study for
3、activity of Anti-oxidation also show that polysaccharide of Chinese yam polysaccharide could eliminate O 2- ，OH and DPPH,and with the high ion concentration demonstrating the high removal rates.Keywords: Chinese yam polysaccharide, Polysaccharide，Extraction, Deoxidization目 录1.绪论11.1淮山及淮山多糖的概况11.2淮山的
4、药理研究21.3淮山的生理功能及应用51.3.1淮山生理功能51.3.2淮山应用于治病61.4淮山化学成分81.5淮山多糖91.6淮山多糖的提取方法91.7淮山多糖的分离纯化91.8题目背景及目的101.9国内外研究状况111.10展望111.11本课题研究的内容121.11.1研究淮山多糖的提取工艺121.11.2研究淮山多糖的抗氧化活性122实验部分132.1实验目的132.2材料与方法132.2.1主要材料132.2.2主要试剂132.3主要仪器设备132.4实验方法132.4.1提取工艺132.4.2淮山多糖的抗氧化性测定142.4.3清除率与抑制率计算152.5实验步骤152.6实验
5、结果162.7分析与讨论173结论19参考文献20致谢221.绪论1.1淮山及淮山多糖的概况 淮山，种名：薯蓣。拉丁语学名：Dioscorea opposite。别 名：山药、怀山药、淮山药、土薯、山薯、山薯、玉延。根茎粗，直生，长可达1米。叶互生，至中部以上对生，罕或3枚轮生，叶腋间常生珠芽（零余子），叶片形状多变化，三角状卵形至三角状广卵形，常3浅裂至深裂。花雌雄异株，极小，绿白色，均成穗状，雄花序直立，雌花序下生。蒴果有3翅。多年生缠绕草本；有块状或根状的地下茎；叶互生，稀对生，单叶或为掌状复叶，全裂或分裂；花雌雄异株；很少同株，组成穗状、总状或圆锥花序；花被片6，2轮，基部合生；雄蕊6
6、，有时3枚发育，3枚退化；雌花和雄花相似，惟雄蕊退化或缺；子房下位，8室，花柱3，分离；蒴果或浆果；种子具翅。 淮山为单子叶植物，10属650种，广布于全球的温带和热带地区，中国有薯蓣属Dioscorea 1属，约80种。原产山西平遥、介休，现分布于中国华北、西北及长江流域的江西、湖南等地区。中国主产于河南省北部，山东、河北、山西及中南、西南等地区也有栽培。冬季茎叶枯萎后采挖，切去根头，洗净，干燥。中国栽培的山药主要有普通的山药和田薯两大类。普通的山药块茎较小，其中尤以古怀庆府（今河南焦作境内，含博爱、沁阳、武陟、温县等县）所产山药名贵，习称“怀山药”，素有“怀参”之称，为全国之冠。现国内有三
7、个地方的山药已申请了国家地理标志保护产品，一种是“铁棍山药”其产自河南焦作温县；一种是“陈集山药”其产自山东省菏泽市陈集镇，包括“鸡皮糙山药”和“西施种子山药”；一种为“佛手山药”，产地为湖北武穴；另外，江西瑞昌市南阳乡的山药最近也申请了国家地理标志保护产品。 山药的主要品种有薯蓣、参薯、褐色薯蓣、山薯、野山药、日本薯蓣等。薯蓣系缠绕草质藤本植物，茎通常带紫红色，右旋，单叶，在茎下部互生，中部以上对生，少为3片轮生；叶片卵状三角形至宽卵形或戟形，变异大，长39厘米，宽27厘米，顶端渐尖，基部深心形、宽心形或近截形，边缘常3浅裂至3深裂，中裂片卵状椭圆形至披针形，侧裂片耳状，圆形，近方形至长圆形
8、。花单性，雌雄异株，成细长穗状花序，雄花序长28厘米，近直立，28个生于叶腋，偶呈圆锥状排列；花序轴呈明显“之”字形曲折；苞片和花被片有紫褐色斑点；雄花的外轮花被片为宽卵形，内轮卵形，较小；雄蕊6；雌花序13个生于叶腋。蒴果三棱状扁圆形或三棱状圆形，长1.22厘米，宽1.53厘米，外有白粉。种子着生于每室中轴中部，四周有膜质翅。花期69月，果期711月。其块茎肉质肥厚，略呈圆柱形，长可盈米，直径27厘米，外皮灰褐色，生有须根。参薯栽培品的块茎变异大，有长圆柱形、圆锥形、球形、扁圆形而重叠，或有各种分枝。圆锥形或球形的块茎通常外皮为褐色或紫黑色，断面白色带紫色。其茎具4条狭翅，叶片绿色或带紫红色
9、，卵形至卵圆形，顶端尾尖或凸尖，基部心形、深心形至箭形；叶柄绿色或带紫红色；雄花通常2至数个簇生或单生于花序轴上排列成圆锥花序。蒴果长1.52.5厘米，宽2.54.5厘米。花期11月至翌年1月，果期12月至翌年1月。药材名淮山，又名理毛条、方山药。主产浙江、福建、湖南、湖北、广东、贵州、四川、云南。其中福建、广东有大量栽培。山薯为块茎长圆柱形，干时外皮不脱落。叶片纸质，宽披针形，长椭圆状卵形。长414厘米，宽1.58厘米，顶端渐尖或尾尖，基部变异大，近截形、圆形、浅心形、宽心形、深心形至箭形，有时为戟形，两耳稍开展。有时重叠。蒴果三棱状扁圆形，长1.53厘米，宽24.5厘米，花期10月至翌年1
10、月，果期12月至翌年1月，生长于海拔501150米的山坡、山凹、溪沟边或路旁的杂木林中。分布于浙江、福建、广东、广西、湖南筹地。褐色薯蓣，叶表面网脉明显，茎具有48条棱，茎、叶柄和叶片干时常呈红褐色。花期7月至翌年1月，果期9月至翌年1月。生长于海拔1001950米的山坡、路旁、山谷杂木林中或灌木丛中。广西、湖南、广东、贵州、云南、福建及浙江等地有分布。 野山药，又名戟叶薯蓣，叶片短三角状卵形，叶基深心耳形。叶缘常3浅裂至3深裂，质薄，叶腋无珠芽。主产宝岛台湾。 日本薯蓣，叶片三角状披针形，长椭圆状狭三角形至长卵形，基部心形至箭形或戟形，有时近截形或圆形，叶缘无明显3裂，雄穗状花序通常2至数个
11、或单个着生于叶腋。蒴果长1.52厘米，宽1.53厘米。花期510月，果期711月。分布于安徽、江苏、浙江、江西、福建、台湾、湖北、广东、广西、贵州、四川等地，日本、朝鲜也有分布，日本的山药需求量每年85吨左右1.2淮山的药理研究调节或增强免疫功能山药富含多糖，可刺激或调节免疫系统的功能。国外文献报道山药水煎液给小鼠灌胃可增加前列腺、精囊腺的重量，有增强雄性激素样作用。山药多糖可明显提高环磷酰胺所致免疫功能低下小鼠腹腔巨噬细胞吞噬百分率和吞噬指数，促进其溶血素和溶血空斑的形成以及淋巴细胞转化，并明显提高外周血T淋巴细胞比率。研究表明，山药的磷脂成分主要为磷脂酰胆碱，含量60以上，其次为溶血磷脂酰
12、胆碱，含量约为11，磷脂类成分具有提高免疫功能的作用，但其作用机制尚待进一步研究。147调整胃肠功能山药能抑制正常大鼠胃排空运动和肠推进作用，也能明显对抗苦寒泻下药引起的大鼠胃肠运动亢进。胃肌电显示：山药可降低大鼠胃电慢波幅，同时能明显对抗大黄所引起的慢波波幅升高。进一步的研究还表明，山药能明显拮抗氯乙酰胆碱及氯化钡引起的大鼠离体回肠强直性收缩，却不能对抗盐酸肾上腺素引起的离体十二指肠或回肠的抑制作用。提示山药有缓解肠管平滑肌痉挛及对抗神经介质的作用，还能增强小肠吸收功能，抑制血清淀粉酶的分泌，但对胆汁分泌及胃液分泌均无明显影响。此外，山药中所含尿囊索能修复上皮组织，促进皮肤溃疡面和伤13愈合
13、，具有生肌作用，可用于胃及十二指肠溃疡。1降血糖作用山药历来是医家和民间治疗消渴病的要药。据Maurica M报道，薯蓣属植物粗提取物对禁食大鼠和兔有降血糖作用，能控制四氧嘧啶引起的高血糖，其乙醇提取物的水溶液部分与降血糖活性有关，氯仿提取物能使饥饿的Wistar大鼠血糖升高。山药块茎多糖在甲醇一水1：1中，提取物能显著降低小鼠血糖浓度。山原条二等曾用山药粉末29kg给链佐星糖尿病大鼠灌服4日，没有发现其降血糖作用。用山药水煎剂309kg，609kg灌胃7日或10日，可降低正常小鼠血糖，对四氧嘧啶引起的小鼠糖尿病有预防及治疗作用，并可对抗肾上腺素或葡萄糖引起的小鼠血糖升高。1类激素样作用，薯莎
14、总皂昔是合成可的松等幽体激素类药物及性激素的主要原料, 其煎液用治各种风湿病、大骨节病、某些代谢性皮炎、过敏性皮炎、结合膜炎、支气管炎等往往产生生理良性反应, 如增加食欲、抑制牙龋出血等山。有动物实验证明，穿山龙水煎液可降低CIA认大鼠躁关节肿胀率和改善棵关节的病理状态, 对CIA 大鼠有治疗作用。2抗衰老作用早在本经中记载山药可以“轻身不饥延年”，现代研究表明山药具有抗衰老作用。山药多糖具有明显的体外和体内抗氧化活性，它能降低维生素CNADPH及Fe2+半胱氨酸诱发的微粒体过氧化脂质的含量，并对黄嘌呤一黄嘌呤氧化酶体系产生的超氧自由基及Fenton反应体系产生的羟自由基有清除作用，还能明显提
15、高衰老模型小鼠体内红细胞超氧化物歧化酶(SOD)活力及血过氧化氢酶(CAT)活力，降低衰老模型小鼠血、脑匀浆和肝匀浆过氧化脂质(LPO)水平。研究表明，单味怀山药能延长家蚕龄期，但作用不显著。怀山药能明显抑制单胺氧化酶(MAO)活性，增加体内谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPX)的活性，降低过氧化脂质(LPO)含量，具有一定的抗自由基作用。148抗炎作用，穿龙薯蓣对急性痛风性关节炎有治疗作用, 其疗效具有一定的剂量依赖性。从盾叶薯蓣中分离出的多体皂苷成分对大多数植物病原真菌有广谱高效的抑制作用, 而其根茎的粗提物抑菌效果最好 。34降脂作用国外报道以山药提纯淀粉喂食有动脉粥样硬化的小鼠，能降低脂类浓
16、度，同时降低主动脉和心脏的糖浓度。对已饲喂过游离胆固醇和含有胆固醇食物的小鼠，山药能降低其胆固醇的浓度。1468祛痰作用，小鼠口服薯孩皂昔或腹腔注射均有显著的祛痰作用。临床证明穿山龙(穿龙薯裁的根茎)片对咳、痰、喘、炎均有疗效,尤以镇咳、祛痰作用较强。复方穿山龙注射液具有良好的祛痰效果, 一般在用药后1 一2 d 即可使痰液变稀, 随之痰量显著减少, 但镇咳作用不够强。256杀灭钉螺的作用,一定浓度盾叶薯蓣植物根粉液浸杀和喷洒施药7d后, 活螺平均密度下降率均在90% 以上, 且有效的抑制钉螺上爬 。10mgL- 1药液对ld 和5d 卵龄。湖北钉螺卵具有良好的灭杀作用, 杀灭ld卵龄螺卵的有
17、效率可达80% , 其LD50为10.28mg L- 1, 杀灭20d卵龄螺卵的有效率 5%, 测定的生物效应与螺卵的卵龄成负相关。24抗血小板聚集作用，有实验证明薯蓣中的皂苷元对大鼠体内外血栓形成及血液黏度的影响有积极作用，薯蓣皂苷元能抑制大鼠体外血栓形成，降低血栓干、湿重；能延长大鼠体内血栓形成时间；降低全血黏度和血浆黏度，为临床治疗缺血性心、脑血管疾病提供了实验依据。6对心血管的作用，以薯蓣皂苷作用于培养的乳鼠心肌细胞造成缺氧/ 复氧损伤，经薯蓣皂苷各剂量组给药后，受损心肌细胞培养液中SOD 活性明显升高，MDA 及NO 含量明显下降，说明薯蓣皂苷可通过抗氧化作用发挥对缺氧/ 复氧心肌细
18、胞的保护作用。薯蓣皂苷干预组心肌细胞搏动频率、细胞存活率、线粒体膜电位( m) 与A/R 组比较明显升高；细胞内平均钙离子荧光强度显著低于A/R 组。采用大鼠冠状动脉结扎心肌梗塞模型，测定心肌梗塞范围及血管活性物质，表明薯蓣皂苷元可显著降低心肌梗塞面积，抑制血清肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH) 的升高，显著降低增高的丙二醛(MDA) 水平，升高超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO) 水平。此外，以Ang 增加内皮细胞凋亡率，观察并表明薯蓣皂苷对Ang 的抑制作用、并且有保护内皮细胞、调节细胞的凋亡作用和防治动脉粥样硬化。2678对甲状腺的作用，有实验证明，利用穿山龙提取液作用于Gra
19、vse 病（毒性弥漫性甲状腺肿）大鼠模型，得出穿山龙（穿龙薯蓣根茎入药称穿山龙）具有抗甲状腺作用的结论。在此工作的基础上，采用类似作用手段，测定NIS mRNA表达，结果表明穿山龙具有较强的抑制NIS mRNA 表达，从而抑制碘捕获的作用。78抗肿瘤作用体外实验证明，山药可作为抗癌作用的扶正药，这可能与其具有很强的免疫调节功能有关。薯蓣皂苷可以通过抑制瘤细胞分裂、增殖, 诱导瘤细胞分化、凋亡, 增强抑癌基因表达等途径来抑制肿瘤的生长, 从而延缓肿瘤的进展速度, 提高肿瘤患者的生存率和生活质量。14678其他作用山药中的尿囊素具有抗刺激物、麻醉镇痛、促进上皮成长、消炎和抑菌作用，常用于治疗手足皲
20、裂、鱼鳞病、多种角化皮肤病。山药碱皮内注射，对豚鼠有局部麻醉作用。有报道山药有诱生Ct干扰素的作用。11.3淮山的生理功能及应用1.3.1淮山生理功能淮山因其营养丰富，自古以来就被视为物美价廉的补虚佳品，既可作主粮，又可作蔬菜，还可以制成糖葫芦之类的小吃。在本草求真记载中有：“入滋阴药中宜生用，入补脾肺药宜炒黄用。”淮山本属食物，气虽温而却平，为补脾肺之阴。是以能润皮毛，长肌肉，味甘兼咸，又能益肾强阴。”对与女性，能益气养血暖手脚。手脚发凉常对女性“情有独钟”。中医认为，手脚冰凉与体质虚弱有密切关系，而山药乌鸡汤和龙眼山药羹均具有很好的补中、益气、养血作用，特别适合手脚发凉症患者。对于男性，能
21、防止“老胃病”复发。在“老胃病”病人中，有相当多属于溃疡病，而秋季是溃疡病容易发生或复发的季节。现代药理研究证实，山药中所含尿囊素有助于胃黏膜的修复。可用鲜山药制成山药扁豆糕、或小米山药糕，蒸熟后食用。对于老人，能补益中气防感冒。山药具有健脾益气的作用，因此，多汗、反复感冒的气虚患者在秋季应该适度增加山药的摄入量。可以把山药炒食、蒸食、拔丝，也可以与大米、小米、大枣一起煮粥食用。对于儿童，能防治腹泻好帮手。每年812月是小儿腹泻的多发季节，用山药粉治疗腹泻，比较容易被接受。具体做法为：将山药研细磨粉与米粉按12的比例给患儿混合服用，每天喂食23次即可。补中益气：铁棍山药因富含18种氨基酸和10
22、余种微量元素，及其它矿物质，所以有健脾胃、补肺肾、补中益气、健脾补虚，固肾益精、益心安神等作用，李时珍本草纲目中有“健脾补益、滋精固肾、治诸百病，疗五劳七伤”之说。 消渴生津：该山药有消渴生之功效：中医治疗虚劳消渴（糖尿病）处方中常有山药单味使用，或与其它药物合用，效果更佳。 保健：由于鲜山药富含多种维生素、氨基酸和矿物质，可以防治人体脂质代谢异常，以及动脉硬化，对维护胰岛素正常功能也有一定作用，有增强人体免疫力，益心安神，宁咳定喘，延缓衰老等保健作用。 养颜：元代脾胃专家李杲说：“治皮肤干燥以此物润之。“李时珍写到：“山药能润皮毛。“山药对滋养皮肤，健美养颜有独特疗效。 铁棍山药特殊药理功能
23、：山药中的铜离子与结缔组织对人体发育有极大帮助，对血管系统疾病有明显疗效，铁棍山药中的钙，对伤筋损骨、骨质疏松，牙齿脱落有极高的疗效，对冻疮、糖尿 病、肝炎、小儿泻泄、遗尿症、婴儿消化不良、溃疡性口腔炎、肺结核、妇女月经带下等患者也有很好的疗效，久用可耳聪目明，延年益寿。 1.3.2淮山应用于治病心腹虚胀，手足厥逆，不思饮食。用薯蓣半生半炒为末。每服二钱，米汤关定。一天服二次。 禁口痢。治方同上。 小便数多。用薯蓣（矾水煮过）、白茯苓，等分为末。每服二钱，水送下。 尿频，遗尿。该品辛散温通，入肾与膀胱而温肾散寒，缩尿止遗。常与益智仁、山药等同用，治肾阳不足、膀胱虚冷之小便频数、小儿遗尿，如缩泉
24、丸（校注妇人大全良方）。 痰风喘急。用生薯蓣（捣烂）半碗，加甘蔗汁半碗，和匀，一次饮服。脾胃虚弱，不思饮食。用薯蓣、白术各一两，人参七钱半，共研为末，加水和糊做成丸子，如小豆大。每服四十至五十丸，米汤送下。 湿热虚泄。用薯蓣、苍术等分，加饭做成丸子米汤送服。 肿毒初起。用带泥的薯蓣、蓖麻子、糯米等分，水泡过，研细敷涂即散。 手足冻疮。有薯蓣一截，磨泥敷上。 根茎入药，滋养强壮，治脾胃亏虚等，也可作副食品和酿酒原料。 盾叶薯蓣，为薯蓣科植物，根茎横生，形似生姜，又称黄姜。以根部入药。盾叶薯蓣的根茎主要用于提取薯蓣皂素，薯蓣皂素为合成肾上腺皮质激素药物的良好原料。现在国际国内用薯蓣皂素为原料生产6
25、0至70种甾体激素药，广泛用于治疗癌症，心脑血管疾病，呼吸道疾病，避孕药物等方面。治脾胃虚弱 不思进饮食：山药、白术各一两 人参三分上三味 捣罗为细末煮白面糊为丸 如小豆大 每服三十丸 空心食前温米饮下 治湿热腹泻：山药、苍术等分饭丸 米饮服 治噤口痢：干山药一半炒黄色 半生用研为细末 水饮调下 治脾肺阴分亏损 饮食懒进 虚热劳嗽 外治一切阴虚之证：土山药二两 生薏米二两 柿霜饼八钱上三味 先将山药、薏米捣成粗渣 煮至烂熟 而将柿霜饼切碎 调入融化 随意服之治疗糖尿病山药600g，晒干研成细粉，每次用水吞服lOg，1日3次，20日为1个疗程。治疗胃癌山药60g(刮丝)，粟米90g，石莲子50g
26、(去心、磨粉)，冰糖30g。用清水适量煮粟米、山药半小时，再放入石莲粉、冰糖，煮成胶状稀粥服食。治疗食欲不振山药500g，羊肉、糯米各250g。先将羊肉煮烂，再加入山药、糯米煮成粥，分早晚2次服食。此方还适用于腰酸尿多，体虚胃寒。治疗慢性肾炎黄芪1530g，山药、薏苡仁各15g，龟板、玉米须各30g，水煎服。治疗慢性消化不良山药250g研成细粉，加入熟糯米粉250g拌匀，每早4汤匙，加入白糖和少许胡椒粉，煮成糊状食用。治疗痛经山药、山茱萸、菟丝子、炮姜、淫羊藿各9g，水煎服。用于治疗妇女行经后腹痛。治疗白带山药、生薏苡仁、莲子米各30g，用文火煮熬成羹服食，每日2次，7日为1个疗程。适用治疗脾
27、虚自带。治疗产后自汗、盗汗山药、黄芪各15g，羊肉90g，桂圆肉lOg。先将羊肉用沸水稍煮后入冷水浸泡除膻，再用沙锅将水煮开，放人羊肉和三味药同煮，饮汤食用。治疗小儿遗尿山药、益智仁、乌药各60g，猪脬l具。将三味药研成细末，塞入猪脬内炖热，吃肉饮汤。治疗冻疮将山药在新瓦上磨成泥，涂患处。治疗痈疽肿毒鲜山药一段，去壳蓖麻子2粒，捣烂外敷患处。11.4淮山化学成分根茎部分化学成分 穿龙薯蓣根茎入药称穿山龙，其有效成分主要为甾体皂苷类，包括薯蓣皂苷（Dioscin）、纤细薯蓣皂苷（Gracillin）、延龄草皂苷（Trillin）、薯蓣皂苷元-3-O-L 鼠李糖（13）-L- 鼠李糖（14）-L-
28、 鼠李糖（14）-D-葡萄糖皂苷Diosgenin-3-O-L-rhamnopyranosyl(13)-L-rhamnopyranosyl(14)-L-rhamnopyranosyl(14)- -glucopyranoside, 总皂苷水解产生薯蓣皂苷元（Diosgenin）；且有穗菝葜皂苷（Asperin）、25- - 螺甾-3,5- 二烯（25- -spirosta-3,5-diene）、对羟基酒石酸（Piscidic acid）、甾醇、尿囊素、树脂、多糖类、淀粉和黄酮，尚有少量25-D- 螺甾-3,5- 二烯（25-D-spirosta-3,5-diene）。采用HPLC-ESI-MS
29、方法分析穿龙薯蓣中的皂苷成分， 得到甾体皂苷26-O-Dglucopyranosyl25(R)- 5,22(23)-furostan dien-3,26-diol 3-O-L-rhamnopyranosyl(12)-Lrhamnopyranosyl(14)- -D-glucopyranoside，Dioscoresides A，Dioscoresides C，Hypoglaucine A 和相对分子量为414 的甾体皂苷元epi-sarsasapogenin的双脱氢产物共5 个化合物。采用硅胶柱法从根茎中分离出3 个新的呋喃甾烷型皂苷化合物。对穿龙薯蓣水溶性化学成分进行研究，分离得到14 个化
30、合物，包括有3 个酚苷类化合物、2 个环二肽类化合物、3 个甾体皂苷类化合物和6 个其他类化合物。2、3、8地上部分化学成分 为了扩大药源，穿龙薯蓣地上部分的化学成分研究也有报道。应用多种色谱技术，从穿龙薯蓣地上部分分离出20 个化合物，分别鉴定为7- 羟基-2，6- 二甲氧基-1，4- 菲醌、山柰酚-3-O- 芸香糖苷、山奈酚-3-O-D- 吡喃葡萄糖苷、（3S）-6，8- 二羟基-3- 苯基-3，4- 二氢异香豆素（montroumarin）、4，5- 二羟基-3，3-二甲氧基联苄、薯蓣皂苷元、胡萝卜苷、- 谷甾醇、甘露醇、正癸烷。采用GC-MS 联用技术研究穿龙薯蓣地上部分油状物的化学成
31、分, 共分离出30 多种化合物，含量较高的成分分别为二十九烷（41.52）、三十一烷（84.61）、二十七烷（7.67）和庚烯（2.83）等。81.5淮山多糖淮山多糖是由鼠李糖，阿拉伯糖，甘露糖，葡萄糖和半乳糖组成的杂多糖，水溶性活性多糖。1.6淮山多糖的提取方法先将淮山削皮，切片，烘干。再将已烘干的淮山放进粉碎机里面粉碎，成固体粉末。放进烧杯加水混合，然后水浴加热5h。使淮山固体粉末与水形成糊状。利用高速离心机，将其在6000r/min条件下离心12min，待离心结束后，收集上清液。用95%的乙醇洗涤，使混合液的乙醇含量大于80%。再将混合液在6000r/min条件下离心10min，收集白色
32、沉淀。将收集得到的白色沉淀分别加入无水甲醇、丙酮、乙醚洗涤，在6000r/min下离心，并取上清液，收集沉淀。最后所得白色沉淀，烘干，沉重。1.7淮山多糖的分离纯化 将水提多糖粗品置于索氏提取器中加入石油醚90回流提取1 h挥干溶剂后溶于适量蒸馏水配成多糖水溶液；采用三氯乙酸法去除粗多糖中大量蛋白质后，再经两次Sevage法去除少量的残留蛋白质；然后用活性炭脱色、脱蛋白、脱色后多糖液装入透析袋中用自来水流水透析2472 h。再经过蒸馏水透析24 h。将透析后多糖液浓缩配成1 溶液上凝胶柱26 cm70 cm用01 molI NaC1洗脱上样量为5 mL流速为05 mLmin每管收集5 mL苯酚
33、一硫酸法检测。纸层析。新华中速滤纸(35 cm30 cm)点样量为05 DFPNI和DFPAI水溶液各20l，展开剂为分析纯正丙醇、浓氨水、水(60：45：j)饱和2 h室温展开6 h，取出后吹干用苯胺一邻苯二甲酸显色剂染色，吹干后105 烘烤10min至斑点出现。比旋光度的测定。 采用WZZ一2A型自动数显旋光仪。将DFPNI和DFPA1分别溶于重蒸水。用100 mm试管。20下钠光测定不同浓度乙醇沉淀出来的多糖精品的旋光度。按下列公式计算出比旋光度：D2u=(LC)式中：a 测得的旋光度；C一溶液的质量浓度，gmI ；J 试管的长度，dm。多糖分子质量测定 采用凝胶柱层析法 。测定：将Se
34、phadex G一200层析柱(20 cm56 cm)先用01 molI NaC1溶液以3 mLh平衡3 d。用已知分子质量的Dextran TlO、T4O、T5o、T7O、Tgo分别相继上柱，上柱量各为5 mg，用01 molL NaC1溶液洗脱。流速为6 mLh，流出液按每管1 mI 体积分步收集用苯酚一硫酸法检测多糖，分别求得洗脱体积 。然后再用蓝色葡聚糖(平均分子质量为210 )上柱求得柱的外水体积 。以 为纵坐标。lg M 为横坐标得到分子质量测定标准曲线。分别取待测分子质量DFPN I和DFPA I 5 mg上样按与Dextran标准品层析相同的条件操作求得相应的洗脱体积查标准曲线
35、可求得多糖的平均分子质量。多糖理化性质的测定。溶解性测定苯酚硫酸反应斐林试剂反应，三氯化铁反应十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)络合反应双缩脲反应考马斯亮蓝染色反应碘一碘化钾反应硫酸咔唑反应。糖含量测定采用苯酚硫酸法 测定多糖含量硫酸咔唑法。测定半乳糖醛酸含量。1.8题目背景及目的在社会飞速发展的今天，人们越来越重视自己的身体健康。对此，会经常买一些保健食品，用于调节自身的身体环境，促进新陈代谢，去除自由基，延缓衰老。同时，有很多研究证明，植物多糖具有多种生理活性，例如：抗氧化，去除自由基，延缓衰老、调节免疫功能，增强特异性面议和非特异性免疫，增强巨噬细胞吞噬功能，促进淋巴细胞的增值和分化、降血
36、糖，有效预防糖尿病、降血脂，预防高血压和动脉粥样化、抗肿瘤、抗病毒、抗菌等。植物多糖及其衍生物因具有特殊生理活性的，都成为近些年的一些研究的对象，人们试从天然药物中提取出其有效成分，并制成具有特定种功能的功能食品。从这些众多的研究中，得到启发，试从我们生活中常见的植物提取出多糖，并研究其抗氧化性。本文是以淮山作为实验材料，对于淮山多糖的提取工艺以及其抗氧化性做了研究，以其对淮山多糖进行功能活性和应用等更深入的研究。1.9国内外研究状况 淮山，学名薯蓣。是药同源植物，具有较高的药用价值和食用价值，而且资源丰富，价格低廉。其身作为食物具有多种功效。能祛风湿、止痛、舒筋活血、止咳平喘祛痰等功效。民间
37、多用于治疗闪腰岔气、腰腿疼痛、筋骨麻木、大骨节病等症。作为药物能调节免疫能力、降血糖、降血脂、调节肠胃功能、预防肿瘤等。近几年研究报道, 以薯菠皂元为原料合成其它新化合物而同样具有相似的药理活性,此举为薯孩皂昔元的应用前景开拓了新的领域。叶仲林、王学超等通过实验对薯蓣皂元的衍生物进行研究, 以薯蓣昔丁二酸单醋及薯蓣皂元为原料, 分别经过氨基缩合, 相应合成了5种及6 种新化合物, 结果表明这n 种化合物对大鼠均具有抗心肌梗死活性。田伟生则成功的将薯蓣皂昔元合成偏诺皂苷元, 这一成分是淮山的生物活性成分, 体现了有限资源合理利用的新策略。1.10展望淮山又叫薯蓣，其中穿龙薯蓣和盾叶薯蓣有悠久的应
38、用历史, 但古书中所收载的方剂均以穿龙薯蓣为主, 然而, 近些年来主产东北地区的穿龙薯蓣种植、化学、药理等各方面的研究和开发相对缓慢。东北地区土地资源丰富, 产量较高, 在野生资源有限的情况下, 应加强穿龙薯蓣生物学特性、栽培以及开发利用等方面的研究, 在生产上通过增产和降低生产成本等措施的改善, 促进种植产业的开发。盾叶薯蓣根状茎富含淀粉、纤维素, 薯蓣淀粉含量较高, 可成为葡萄糖液、生产酒精、酵母粉、畜禽饲料及其他多种化工原料。作为同属植物的穿龙薯蓣, 有关该产品的开发也将具有广阔的前景。中科院成都生物研究所、成都地奥集团利用薯蓣加工废料淀粉生产酒精、生产菌体蛋白饲料、酶酸水解生产皂素的新
39、工艺、薯蓣发酵生产氢气等进行了开发利用为穿龙薯蓣的深入开发开辟了先河。穿龙薯蓣也应加强此方面的开发, 产品综合利用将促进种植发展, 更好地保护野生资源。根据上述研究资料, 薯蓣皂苷在抗肿瘤、改善心血管功能、调节免疫、镇咳平喘、抗炎镇痛等方面都有着明显的优势, 但在实际的研究过程中仍存在一些问题: 其药理作用机制有很多方面至今尚不清楚, 仍需进一步研究。 研究多数还处于动物实验阶段, 有关临床应用的报道较少。个案研究报道较多, 缺乏大规模的样本研究, 实验的可重复性较差。对其药理作用的研究比较局限, 除抗肿瘤作用之外, 其他药理作用的研究仍不够深入等。近年来, 免疫相关性疾病的发病率渐高, 尤其
40、是血液系统疾病, 薯蓣皂苷既有调节免疫作用, 又有激素类作用, 对治疗血液系统疾病有着广阔的前景, 其作用机理值得我们进一步探讨。1.11本课题研究的内容1.11.1研究淮山多糖的提取工艺将粉碎后的干淮山水浴加热，离心。再利用分别用乙醇、无水甲醇、丙酮、乙醚洗涤，去除上清液去沉淀。再干燥。1.11.2研究淮山多糖的抗氧化活性将提取后的淮山多糖，分别对其进行羟基自由基、超氧自由基和DPPH自由基进行测定，在光分度计在500nm下检测其吸收状况。2实验部分2.1实验目的本实验旨在淮山多糖的提取工艺研究及淮山多糖在清除羟基自由基、超氧自由基和DPPH自由基能力和还原能力方面的研究，进一步拓展其生物学
41、功能性质研究。2.2材料与方法2.2.1主要材料鲜淮山2.2.2主要试剂乙醇、无水甲醇、乙醚、丙酮、浓硫酸、乙酸乙酯、蒽酮、三氯乙酸、三氯化铁、磷酸、赤血盐、Na2S203、KI、H2O2。以上试剂均为分析纯。2.3主要仪器设备粉碎机、真空抽滤器、鼓风干燥箱、真空干燥箱、旋转蒸发器，恒温水浴锅、组织捣碎机，循环水式真空泵，真空冷冻干燥机，旋转蒸发器，恒温水浴锅，电子秤，紫外分光光度计等。2.4实验方法2.4.1提取工艺将买来的鲜淮山清洗干净，然后削掉外皮并切成0.1mm厚的薄片，放在60的干燥箱干燥24h，使其自由水分蒸发干。再将干燥后的淮山放进粉碎机粉碎，得固体粉末，以料液比为1:30比例混
42、合，再水浴加热4h，得糊状液体，利用离心机，6000r/min离心10min，去上清液，去沉淀。在上清液加入95%的乙醇，并使其含量在80%以上，再离心，去上清液，取沉淀。再将沉淀用无水甲醇、丙酮、乙醚分别洗涤，离心，去上清液，取沉淀，干燥后得白色粉末。 2.4.2淮山多糖的抗氧化性测定采用硫氰酸铁法0.5ml.不同浓度多糖溶液添加2ml蒸馏水,5ml95% 乙醇,5ml 0.5mmol/L 磷酸缓冲液(pH7.0)和30l 亚油酸于50 恒温水浴摇床上振荡2h 转速。再从中取样0.1ml 添加75% 乙醇4.7ml，硫氰酸铵溶液(30%)0.1ml和0.2mmol/L氯化亚铁溶液0.1ml
43、37 水浴5min 在波长500nm 处测定其吸光度多糖的抗氧化活性以抑制亚油酸过氧化的百分率(%)表示以未加多糖溶液的处理为对照。多糖清除OH 的测定，利用H2O2 与Fe2+ 混合产生OH，但由于OH具有很高的反应活性存活时间短，若在体系中加入水杨酸就能有效地捕捉OH并产生有色产物，该产物在波长510nm 处有强吸收，若在反应体系中加入具有清除OH功能的被测物便会与水杨酸竞争OH，而使有色产物生成量减少采用固定反应时间法在相同体积的反应体系(8.8mmol/L H2O2，9mmol/L Fe2+ 0.5ml 9mmol/L 水杨酸- 乙醇溶液0.5ml)中加入一系列不同浓度的多糖溶液并以蒸
44、馏水为参比与试剂空白液比较在510nm 处测量各浓度下的吸光度Ax 便能测定被测物对OH的清除作用。多糖清除O2 的测定，在还原剂甲硫氨酸(Met)的存在下核黄素分子(RFV)吸收一个光子被还原成半醌形式后者在有O2 条件下自氧化产生O 2- ，O 2- 可将四氮唑蓝( N B T )还原成为蓝色产物其最大光吸收在5 6 0 n m 处O2 的清除剂可使OD560 的值降低反应体系包括2.410-6mol/L RFV 、0.01mol/L Met、1.67 10-4mol/L NBT 0.1mol/L 磷酸缓冲液(pH8.0)和不同浓度的多糖在560nm 处测量各浓度下的吸光度Ax便能测定被测
45、物对O 2-的清除作用。利用DPPH溶液的特征紫红色团的吸收峰，以分光光度法测定加抗氧化剂或植物提取液后,吸收的下降表示其对有机自由基消除能力，反应体积2ml，DPPH溶于少量甲醇后，以50%乙醇配制为120mol/L。植物提取液稀释10倍，反应时加0.1ml稀释的提取液及1.9mlDPPH。室温下静置20min后测吸光度变化，样品对DPPH的清除百分比，这里A0为未加样的DPPH（1.9mlDPPH+0.1ml50%乙醇）的吸光度，Ax为样品与DPPH( 反应后的吸光度，B为样品的空白（样品0.1ml+1.9ml50%乙醇）的吸光度,然后用公式求出清除率。2.4.3清除率与抑制率计算清除率(
46、%)= 100%其中A0 为空白对照液体的吸光度Ax 为加入多糖后的吸光度2.5实验步骤 将粉碎后的干淮山，称取了11.6g，加入330ml水混合后，水浴加热4h，得到带灰色的糊状液体。将糊状液体加入50ml离心管，在6000r/min离心10min，到出上清液，约50ml，并加入300ml95%乙醇，搅拌，出现白色沉淀。再将其混合液在6000r/min离心8min。倒掉上清液，加小量水食用漩涡分离器使沉淀溶解，再分别用无水甲醇、丙酮、乙醚洗涤，重复乙醇洗涤步骤。最后自然干燥，得到1.5g白色固体。取0.5g白色固体，溶解于水中。并分别定容到0.2g/ml、2g/ml、4g/ml、8g/ml、
47、20g/ml，得5组不同浓度样液配备好8.8mmol/L H2O2，9mmol/L Fe2+ 0.5ml 9mmol/L 水杨酸- 乙醇溶液0.5ml的模型溶液。将不同浓度的2ml的样液和模型溶液混合，以加同体积的蒸馏水作为对照组。将两组混合溶液分别用分光光度计测定在510nm处的吸收状况。配备2.410-6mol/L RFV 、0.01mol/L Met、1.67 10-4mol/L NBT 0.1mol/L 磷酸缓冲液(pH8.0)的模型溶液。将不同浓度的2ml的样液和模型溶液混合，以加同体积的蒸馏水作为对照组。将两组混合溶液分别用分光光度计测定在560nm出的吸收状况。取2ml不同浓度样液于具塞试管，加热2mlDPPH溶液（准确称取20mgDPPH样品，60%EtOH定容于250ml棕色容量瓶中，）混匀，静止30min于517nm处测定吸光度Ax；同时协定2mlDPPH溶液于2ml60EtOH的吸光度Ae。采用VitC作为阳性
