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1、全血胆碱酯酶活性的测定,三氯化铁比色法,实验目的,掌握全血ChE活性测定的意义掌握全血ChE活性测定原理、方法,方 法,Asch-DTNB比色法（GBZ52）三氯化铁比色法溴麝香草酚蓝（BTB）比色法纸片法Biocheck法（便携式分析仪）,三氯化铁比色法,原理,三氯化铁比色法,原理,血液中胆碱酯酶可使乙酰胆碱水解生成胆碱和乙酸，终止反应后，剩余的乙酰胆碱与碱性羟胺作用生成乙酰羟胺，然后在酸性环境中与三氯化铁反应生成棕红色羟肟酸铁络合物。其颜色深浅与乙酰胆碱的量成正比，在520nm进行比色定量，从而推算出胆碱脂酶活性。,实验器材,一次性注射器(1ml)12个，采血用；微量移液器（20l）；分光
2、光度计；玻璃比色杯(每组至少3个)；擦镜纸；恒温水浴箱（370.5）移液管(0.2ml，1ml，5ml)；试管；漏斗；容量瓶,试剂,试剂均为分析纯，水为蒸镏水或去离子水。1磷酸盐缓冲溶液，pH=7.2 准确称取磷酸氢二钠(Na2HP0412H2O)16.72g和磷酸二氢钾(KH2PO4)2.72g，用水溶解并稀释到1000ml，置4冰箱中保存。2碱性羟胺溶液 临用时将139 g/L的盐酸羟胺溶液与140 g/L的氢氧化钠溶液等体积混合。3盐酸溶液1+2 浓盐酸l份加水2份混合。,试剂,4三氯化铁溶液(100 g/L)称取10g三氯化铁(FeCl36 H2O)，加浓盐酸0.84ml，溶解后再加水
3、至100ml，贮存于棕色瓶中。5氯化乙酰胆碱标准溶液(1)标准贮备液：精确称取氯化乙酰胆碱1.2716g，用pH=7.2的磷酸盐缓冲液溶解并稀释至100ml。此溶液1ml含70 mol乙酰胆碱。置4冰箱内保存。(2)标准应用液：取标准贮备液用磷酸盐缓冲液稀释10倍。此液1ml含7 mol乙酰胆碱，于临用前配制。,分析步骤1.乙酰胆碱标准曲线的绘制 2.样品测定,1.乙酰胆碱标准曲线的绘制（1）取六只具塞试管，配制不同浓度的乙酰胆碱溶液,（2）各管加碱性羟胺4ml，立即振摇2 min（3）各管加12盐酸溶液2ml，振摇2 min（4）各管加10%三氯化铁溶液2ml，摇匀，过滤（5）测吸光度:=5
4、20nm，参比管-第1管（6）绘制标准曲线,2.样品测定,计 算,1.被水解 的乙酰胆碱吸光度=对照管吸光度（B管）样品管吸光度（A管）2.对照标准曲线，得出被水解的乙酰胆碱(mol)-即0.02ml血经37，30min反应条件下的 胆碱酯酶活性绝对值C,3.胆碱酯酶活性相对值（%）,浙江地区健康人胆碱酯酶活性绝对值男：3.22 0.336 mol 女：3.19 0.398 mol,注意事项,采血前先准备好试管，加入磷缓采血时严格消毒，用过的棉球、刺针集中放置准确控制水浴温度和放置时间加三氯化铁显色后，在20min内比色参比管的溶液留用到最后,实验报告要求,实验目的实验原理实验步骤实验结果分析与讨论,
