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1、检验技术资格考试考点精要微生物学检验（中级）1. 生物学按界门纲目科属种分类，种是最小单位。超净工作台应采用层流技术净化空气、选择垂直气流通风方式。2. 结核菌可利用甘油为碳源，梭状芽胞菌可以氨基酸为碳源，流感嗜血杆菌要，因子才能生长。3. 药物敏感试验：纸碟法、小杯法、凹孔法、试管法。常用：单片纸碟法、试管稀释法（以抗菌药物的最高稀释度仍能抑制细菌生长或杀菌管为终点，该管含药浓度为最低抑菌浓度MIC或最低杀菌浓度MBC），两值越低则表示越敏感。MIC与抑菌圈呈负相关，即抑菌环直径越大，MIC越小。4.常用的免疫技术：酶免疫技术（EIA）、协同凝集试验、免疫荧光技术（IF）、对流免疫电泳（CI
2、E）、免疫印迹技术。病原菌核酸的检测：核酸杂交、PCR技术、基因芯片技术。PCR技术是选择DNA或RNA体外扩增技术，用标本提取DNA为扩增模板，选用一对特异寡核苷酸为引物，PCR一般要经历三十多次循环，经不同温度变性93-94（作用1min氢键断裂形成单链DNA）、退火40-60（迅速冷却30-60s引物与DNA模板结合，形成局部双链）、延伸70-75（在TaqDNA聚合酶作用下，以A、T、G、C四种脱氧核苷酸为原料，从引物5端3端延伸，合成与模板互补的DNA链。），扩增产物用溴乙啶染色的凝胶电泳。其具有特异、快速、灵敏、特异性强、操作简便、能够定量。基因芯片技术（DNA芯片、DNA微阵列）
3、主要过程：DNA微阵列的制备、样品的制备、靶分子和探针之间的杂交、杂交信号的检测与分析。具有快速、敏感、高通量检测平台。核酸杂交（基因探针杂交技术）-是指单链RNA和DNA或DNA和DNA或RNA和RNA，根据碱基配对原则，借氢键相连而形成杂交分子的过程。杂交百分率70%（69%）为高度同源性，同源性在60%以上是一个种，同源性在60%-70%是同一种内不同亚种，同源性在20%-60%同一属内不同菌种，同源性20%不同属的菌种。AFLP的含义是-扩增片段长度多态性。有很大功能的DNA指纹技术。一种是罕见切割酶，一种是常用切割酶。具有RFLP技术的可靠性和PCR技术的高效性。5.细菌诊断流程有：
4、双岐索引法，表解法，数字编码鉴定法。致病性岛：由基因编码决定的一团与致病性相关的基因组。6. 病原细菌确定原则：（郭霍Koch原则）1、从一种疾病病人中能有规律地发现一种细菌2、能够分离这种细菌获得纯培养3、把这种细菌的培养物引入易感动物体内，可以引起与病人类似的疾病4、在实验感染引起的疾病中仍然能够分离同一种细菌。7. 杆菌肽用于A（敏感）与非A群链球菌的鉴定。O/129抑菌试验对弧菌有用而对气单胞菌无用。8. 奥普托欣试验：肺炎链球菌敏感。半数致死量（LD50）-导致半数动物死亡的细菌感染量。最小全数致死量（MLD）-引起全部动物死亡的最小感染剂量。半数感染量（ID50）-导致半数组织培养
5、细胞发生感染的细菌数量或毒素剂量。9. 杂交分：斑点，菌落原位，Southern（DNA）印迹，Northern（RNA，DNA）印迹。10. L型细菌：细胞壁缺陷（形态多样，染色不定，可过滤，渗透压敏感，生化减弱等）培养应高渗透压（3-5%氯化钠、20%蔗糖），染色多为G染阴性，形态不一（巨球形是特征），固定要用10g/L鞣酸不能用火焰。增殖：以二分裂、出芽、巨形体释放颗粒方式。一般菌落有：油煎蛋样（L），颗粒型（G），丝状菌落（F），鉴定要点：染色易变多形性，生长在增菌液中微浑，颗粒样沉淀或沿试管壁生长，返祖现象。致病特点：慢性和反复发作性感染。L型细菌在体内体外都可形成。原生质体与原生质
6、球都是细胞壁缺陷的细菌。11. 细菌的突变：基因突变（又称点突变；有碱基对的置换、插入、或缺失、错码）、染色体畸变 （易位、倒位、重复、缺失）。突变：自发突变、诱发突变。质粒在细菌的自发突变中起重要作用。12.噬菌体-是感染细菌、真菌、放线菌或螺旋体等微生物的病毒，具有病毒的基本特性，专性胞内寄生，有严格的宿主特异性。由核酸和蛋白质组成。大多数DNA噬菌体的DNA为线状双链（有尾噬菌体的核酸）；RNA噬菌体的RNA为线状单链（无尾噬菌体的核酸为环状单链DNA或线状单链RNA）。对紫外线敏感10-15分钟失去活性。噬菌体分毒性噬菌体、温和噬菌体（溶原性噬菌体）；毒性噬菌体以复制方式增殖，过程吸附
7、、穿入、生物合成、成熟与释放，少脱壳。在液体培养基中使混浊菌液变澄清，在固体培养基上形成噬斑。温和噬菌体-是噬菌体基因组整合于宿主菌染色体中，有溶原性周期、溶菌性周期。13. 肽聚糖的结构由聚糖骨架，四肽侧链和五肽交联桥（G无交联桥）。磷壁酸为G特有，分壁和膜两种。外膜层由脂多糖，脂质双层，脂蛋白组成。细胞质内有核蛋白体（蛋白合成地），核质（主要遗传物质）质粒，胞质颗粒，是细菌蛋白质和酶类合成的重要场所。鞭毛是由细胞质伸出的蛋白性丝状物。性菌毛仅有110根，毒力和耐药质粒都能通过它转移，有致病性。14. 免疫器官：骨髓、胸腺、脾、淋巴结、扁桃体、小肠集合淋巴结、阑尾和黏膜免疫系统。免疫细胞：淋
8、巴细胞、单核吞噬细胞、中性粒细胞、嗜酸嗜碱性粒细胞、肥大细胞、血小板。免疫分子：补体、免疫球蛋白、细胞因子中枢免疫器官：骨髓、胸腺、鸟类法氏囊。外周免疫器官：淋巴结、脾和粘膜相关淋巴组织特异性免疫：体液免疫、细胞免疫。体液免疫（B淋巴细胞介导，CD4+Th辅助，Th2细胞能分泌细胞因子IL-4、IL-5、IL-6、IL-10）；效应是抗体（Ab）；1、病毒中和抗体（不能直接灭活病毒，IgG、IgM、IgA）2、血凝抑制抗体（HLAb）3、补体结合抗体。IgG在体液中含量最多，分子量小是唯一能通过胎盘的抗体。IgM分子量大，是最早产生的抗体，中作早期诊断。IgA存在黏膜分泌液中，在局部可阻止病毒
9、侵入。细胞免疫（T淋巴细胞介导，效应细胞：细胞毒性T细胞（CTL）、CD4+Th1细胞、CD8+毒性T细胞CTL）。Th1细胞诱导产生迟发型超敏反应（DTH）15. G菌等电点pI=23，G菌等电点pI=45。RNA主要存在于细胞质中占细菌干重的10%，DNA存在于染色体和质粒中。16. 细菌营养转运的方式有：离子，透性酶，磷酸酶。营养物质进入机体的方式：易化扩散、主动运转（由透性酶完成）、基团移位（糖类由磷酸酶磷酸化进入胞内，不能再透出菌体）。17. 细菌生长繁殖的条件:充足的营养、适宜的温度、合适的酸碱度、必须的气体环境。细菌生长的温度极限-7-90： 嗜冷菌最适温为1020，嗜温菌为20
10、40，嗜热菌为5060。适宜的酸碱度PH7.27.6。细菌生长繁殖分为四期：迟缓期、对数期、稳定期、衰亡期18.（肠道杆菌）细菌的四种生化反应：吲哚（I）、甲基红（M）、VP（V）、枸橼酸盐利用（C），合称为IMViC。杆菌呈+-，产气杆菌呈-+。细菌代谢所需能量主要以生物氧化作用而来。细菌代谢新陈代谢的产物：热原质、毒素与酶、色素、抗生素、细菌素。热原质除去的最好方法-蒸馏。内毒素（G-脂质A）、外毒素（G+产生的毒性蛋白质产物，具有抗原性强、毒性强、作用特异性强、不耐热、人工化学可脱毒性，0.4%甲醛脱毒后形成类毒素进行人工免疫）。据亲和性及作用靶点分为:神经毒素、细胞毒素、肠毒素。细菌的
11、内毒素一般由：脂质A（主要成份），非特异性核心多糖，菌体特异性多糖。一般710天后机体产生特异性免疫。IgG和IgM能在血中直接中和病毒。19. 细胞壁的作用：承受胞内高渗压、支持细胞膜、维持细菌形态；是鞭毛运动的支点。细胞壁的主要成份：肽聚糖（又称黏肽、胞壁质），是原核生物特有的成份，能破坏肽聚分子结构或抑制其合成的物质，都有抑菌和杀菌作用。G-菌细胞壁的主要成份：肽聚糖、脂蛋白、外膜、脂多糖（LPS）（类脂A、核心多糖、特异性多糖），菌体脂多糖（LPS）能引起发热故称热原质，又称为细菌的内毒素。细胞膜的主要功能：物质纳泄、生物合成、呼吸作用、形成中介体细胞质中的异染颗粒主要成份：RNA、多
12、偏磷酸盐20. 饮用水中1ml菌落总数不超过100个，1000ml水中大肠杆菌群不超过3个。土中的厌氧芽胞杆菌是创伤感染病原菌的主要来源。21. 有芽胞破伤风菌需沸水煮3h才杀死。水中加入2%碳酸钠能将沸点提到105又能防止金属生锈。22. 紫外线波长265266nm时杀菌力最强。无芽胞菌一般的致死为18006500微瓦/cm，杀死芽胞要十倍。23. 滤菌器用于除菌的孔径是0.22m，另外以石棉板为滤板的金属滤器称Seitz滤器（蔡氏滤器）按滤孔大小分K：最大，澄清用，EK-S最小，可阻止大病毒通过EK：居中，除去一般细菌。玻璃滤菌器分G1G6，G5，G6两型能阻止细菌通过。24. 高压灭菌指
13、示物：嗜热脂肪芽胞杆菌（ATCC 7053），紫外线杀菌指示物：枯草芽胞杆菌黑色变种（ATCC 9372）。25. 细菌遗传物质主要在于染色体、质粒和转位因子中。质粒：不依赖染色体而复制，不相容性，转移性，指令性。主要有耐药质粒，Col质粒（编码肠毒素）Vi质粒（编码细菌与致病性有关的蛋白）。转位因子为存在于细菌染色体或质粒上的一特异的核苷酸序列可在DNA中移动，主要有三类：插入顺序（最小的转位因子），转座子，转座噬菌体。26.病毒的特性：1、只含一种核酸2、基因组复制3、缺乏完整的酶系统4、RNA病毒的RNA经反转录合成互补DNA（CDNA）。甘油（10）或10%二甲基亚砜的血清作悬浮细胞的
14、液体在液氮中保存细胞，在干冰温度（-70）和液态氮温度（-196）下长期保存其感染性；将冻存在小管或安瓿里的细胞以较慢的冷冻速率（1分钟）冷冻，直至150，再将这些小管贮存在150196的液氮中，解冻做法是：将封口的小管迅速放入37的水中，直至所有的冰融化，然后打开管口，将内容物移入培养基。PH5-9稳定；射线和紫外线、X线、r线能灭活病毒。病毒学上常用的细胞类型：原代细胞、二倍体细胞、传代细胞。29. 病毒分类：目、科、亚科、属、种。属名-VRirus结尾的单词,亚科名-VRirinae结尾的单词,科名-VRiridae结尾的单词。目名Vrirales。2004年ICTV公布病毒分为：73个
15、科、11个亚种、289个属。30. 病毒吸附蛋白（VAP）；血凝素（HAs）。病毒的复制周期：吸附、穿入、脱壳、生物合成及组装、成熟和释放31. 病毒突变株分：条件致死性突变株，空斑和宿主依赖性。遗传型变异机制有突变，基因转移，重组。突变：突变率由复制的准确度，DNA发生损伤的机会，及对损伤DNA修复程度来决定。32. 非特异性免疫：干扰素（IFN）、NK细胞 。干扰素（IFN）-具有广谱抗病毒作用，只能抑制病毒，即通过诱导细胞合成抗病毒蛋白（AVP）发挥效应。 33. 小淋巴细胞分为：T细胞、B细胞、K细胞。T细胞来自骨髓，在胸腺成熟。在人体血液中T细胞占淋巴细胞总数的6070%，；在胸导管
16、则占95%以上。B细胞第一个合成产物是u链。34. 碱基的置换：嘌呤换嘌呤，嘧啶换嘧啶为转换，嘌呤换嘧啶为颠换。影响基因表达的因素有：调控部位，调节蛋白，效应分子。35. 转化：受体菌直接摄取供体菌提供的游离DNA片段，整合重组（与染色体重组）使受体菌的性状发生变异。一般有链，嗜血，芽胞菌有此功能。36. G+菌的感受态是由感受态因子（CF）的胞外信号诱导的。37. 转导：以噬菌体为媒介，将供体菌的基因转移到爱体菌内而致受体菌基因改变，分普遍和局限。38. 接合：受体菌和供体菌直接接触，供体菌通过性菌毛所带的F质粒或类似遗传物质转移到受体菌。39. 溶源性转换：是噬菌体的DNA与细菌染色体重组
17、，使宿主遗传结构发生变异。40. 原生质融合：两种经过处理失去细胞壁的原生体混合和可发生融合后的双倍体可发生染色体间的重组。41. 基因重组可使基因再激活表现为：交叉复活和多重复活。42. 粘附素是细菌表面的蛋白质有菌毛和非菌毛。进入宿主：黏附，定植，侵入，转归。毒力有侵袭力和毒素。43. 侵袭力：菌体表面结构，菌毛，侵袭性酶（凝固酶，透明质酸酶，链激酶，胶原酶等）。44. 医院感染大多以散发形式流行。抗感染治疗原则：安全，有效，经济，关键是有效。45. 细菌种的科学命名采用拉丁文种属双命名法，前一字为属名，名词，后一为种名，形容词。目前国际上普遍采用伯杰分类系统，也有用CDC（USA）。目前
18、以细菌细胞壁的结构特点作最高一级分类依据将原核界分为薄，坚，软，疵壁四门。科，属，种分类主要依靠生化特性和抗原结构。46. 显微镜的分辩率为波长一半。荧光显微镜的光源为高压汞灯。日光灯波长约0.5m。47. 抗酸染色：5%石碳酸3%盐酸酒精美蓝。48. 糖类发酵是鉴定细菌最常用的生化反应。49. 怀疑细菌性心内膜炎时血培养不少于三次。50. 不能立刻接种的血应用SPS抗凝。51. 直接镜检2h报告，最后鉴定和药敏一般不过3天，除血外，必须在24h内预报。52. 肠杆菌科的强选择（SS琼脂）弱选择（EMB，麦康凯）。53. 溶血是草绿色，溶血是透明环，溶血红细胞不溶解，双环。54. 细菌数量达1
19、06107CFU/ml时培养肉汤才见混浊。55. 血培养中有105菌落形成单位（CFU）/ML时才能通过革兰氏染色检出细菌。56. 近交系动物：采用兄妹交配（或亲子交配）繁殖20代以上的纯品系动物。57. 突变种纯系动物：实验动物正常染色体中某个基因发生了变异的具有各种遗传缺陷的突变品系动物。8. 纯*动物：无计划随意交配的动物。59. 无菌动物：体表肠道内无菌体内无抗体。60. 悉生动物：给出无菌动物引入已知的517种正常肠道菌的动物。61. 小白鼠对肺链，破伤外毒素敏感，豚鼠对结核白喉易感，猫对金葡萄菌肠毒敏感。62. 测定病原体的感染性最好选用无菌动物或悉生动物。63. 冷冻干燥保存法是
20、最有效的方法，利用各种斜面和半固体加石蜡油是最常用和最简便的方法，一般不含糖，不用液体。64. 真菌，霍乱，铜绿及粪碱需在室温保存，而脑膜炎，淋球，初次分离的流感嗜血菌保存于37。每转种三代要鉴定一次。65. AMS系统是目前微生物鉴定中最常用的自动化仪器。66. 葡萄球菌：产生脂溶性色素，多数分解甘露醇产酸液化明胶和产生血浆凝固酶。蛋白抗原（A蛋白）种属特异无型特异，多糖抗原（A，B，C）是半抗原，有型特异。是抵抗力最强的无芽胞菌。67. 粪便呕吐物应接种高盐卵黄或高盐甘露醇琼脂，触酶阳性，凝固酶阳性玻片法筛选，试管法确证。必须做苯唑西林的敏感试验。68. 链球菌：沉淀生长（肺链为混浊），在
21、含腹水的培养物上生长良好，溶血株呈絮状或颗粒状生长，不溶血株呈均匀混浊生长。A链对杆菌肽敏感青霉素G为首选，B链CAMP试验阳性氨基糖苷类合用，溶链致病性最强，溶链为条件致病菌。几乎所有的肺链对Optochin敏感。69. 肺链：最适pH7.68.0，在含3%5%的兔血清中生长良，培养时间过长会自溶管底澄清，分解菊糖，胆汁溶解阳性。主要抗原有：蛋白质抗原、多糖抗原、核蛋白抗原70. 肠球菌属：能在高盐（6.5% NaCl）高碱（pH 9.6）40%胆汁培养基上和1045生长，是G+菌中仅次于葡萄球菌的重要院内感染病菌。临床上分离最高的是粪肠球菌，可分庆霉素高耐药和低耐药，一般用-内酰胺类和氨基
22、糖苷类联合。71. 脑膜炎奈瑟菌：脑液中位于中性细胞内，大多能分解葡萄糖、麦芽糖，产酸不产气，具有氧化酶和触酶。能产生自溶菌不宜冰箱应立即保温送检，冬末春初为流行高峰，青霉素G为首选。72. 淋球奈瑟菌：人类是唯一天然宿主和传染源。最适pH7.5，对糖类生化最低只能发酵葡萄糖，主要有菌毛蛋白，脂多糖，外膜蛋白抗原。细菌培养是目前世卫推荐的唯一方法，培养基中应含两种以上抗生素（多为万古和多粘）。73. 肠杆菌科分型多采用苯丙氨酸脱氨酶和葡萄糖酸盐试验。可疑菌分别接种克氏双糖铁（KIA）尿素靛基质动力（MIU）来定属。74. 大肠杆菌：（吲哚，甲基红，V-P，枸椽酸）IMViC试验：，还需做糖发酵
23、试验，KIA产酸产气，MIU，有菌体（O）荚膜（K）鞭毛（H）三抗原，已知有171个O，99个K，56个H。肠杆菌属：最适温30，氧化酶阴性，有动力，与大肠杆菌区别：IMViC试验：肠杆菌：，大肠杆菌：。环境菌群75. 肠产毒型（ETEC）：作用小肠，霍乱样肠毒腹泻，是5岁以下婴幼儿和旅游者腹泻的重要病原菌；肠毒素有耐热和不耐热，LT-是引起人类主要的致病物质，对热不稳定，6530分钟被破坏，A亚单位是毒素的活动部位。耐热肠毒素（ST）是通过激活肠黏膜细胞上的鸟甘环化酶，使胞内CGMP量增多而导致腹泻。肠致病型（EPEC）：作用小肠，水样腹泻，是婴儿腹泻主要病原菌。肠侵袭性型（EIEC）：作用
24、大肠，志贺样腹泻，很像菌痢，发热腹痛脓血便及里急后重。肠出血型（EHEC）：其中O157：H7可引起出血性腹泻和溶血性尿毒症，是4岁以下儿童急性肾功能衰的主要病原，6、7、8三月最高，北美最多见。志贺毒素肠集聚型（EAggEC）：婴儿和旅游者腹泻持续性水样腹泻。76. 志贺氏菌分：痢疾（A群），福氏（B群），鲍氏（C群）（半透明、光滑型菌落），宋内（D群）（扁平粗糙型菌落）四群，我国以福氏和宋内常见，无荚无芽无鞭，KIA：K/A，产气/，H2S，MIU/，最后可用诊断血清作群型鉴定群血清型葡萄糖乳糖甘露醇鸟氨酸脱羧酶痢疾志贺菌A1-10+-福氏B1-6+-+-鲍氏C1-18+-+-宋内D1+-
25、+加热6010分钟杀死，有强烈的内毒素，作用于肠黏膜，使其通透性增高。粪口传播，只局限于肠道，一般不进侵入血，发热、腹痛、水样腹泻，后转为脓血黏液便，伴有里急后重、下腹部疼痛。 测志贺菌的侵袭力用Sereny试验，接种于豚鼠眼结膜囊内。快速诊断：1、免疫染色法2、免疫荧光菌法3、协同凝集试验4、胶乳凝集试验5、分子生物学方法77. 沙门菌：无芽无荚有鞭毛（除鸡沙门）多数有菌毛，H2S可阳性，伤寒菌产酸不产气，菌体抗原有58种，鞭毛抗原有两相即特异性和共同，表面抗原有Vi，M，5三种，变异有：S-R，H-O，v-w，相位。凡符合：克氏双糖铁（KIA）：不发酵乳糖、蔗糖，发酵葡萄糖、麦芽糖甘露醇，
26、K/A，产气/，H2S/，MIU，硝酸盐还原阳性，多价血清阳性的为沙门属。尿素酶试验与变形杆菌区别。胞内寄生菌伤寒沙门菌、甲型副伤寒沙门菌、肖氏沙门菌、希氏沙门菌。所致疾病4类型：1、肠热症：第一次菌血症，发热、不适、全身痛，与菌的感染剂量有关，通常潜伏期为2周，第二次菌血症，高热7-10天，缓脉、肝脾肿大，皮肤出现玫瑰疹，外周白细胞明显下降，严重者有出血或肠穿孔等并发症。2、胃肠炎（食物中毒）：由摄入大量108被鼠伤寒沙门菌、猪霍乱沙门菌、肠炎沙门菌污染的食物引起。致病机制：细菌释放的内毒素。发热、恶寒、呕吐、腹痛、水样腹泻。3、败血症：4、无症状带菌者：标本：第1周取外周血；第2周取粪便；
27、第3周起还可取尿液；第1-3周均可取骨髓液。血液和骨髓须增菌后接种于SS双糖或三糖铁（TSI）培养基。血清学诊断有肥达试验，一般伤寒沙门菌O凝集效价1：80、H1：160，副伤寒H1：80具有诊断意义。新一代疫苗：伤寒Vi荚膜多糖疫苗。78. 变形杆菌属有：普通，奇异，产黏。普罗威登斯属有：产碱，斯氏，雷极，摩根菌只有摩氏摩根菌。有明显多形性，呈球状或丝状，生长于1043，在固体培养基上普通和奇异呈迁徙生长现象，三属氧化酶阴性，苯丙氨酸脱氨酶阳性G-杆菌，加入1%石炭酸或苯乙醇使终浓度为1g/L和0.25%可抑制变形菌迁徒样生长。能迅速分解尿素以区别沙门菌，外斐试验辅助诊断立克次体79. 耶尔
28、森氏菌（大纲无）：有7种，鼠疫，假结核，小肠与致病有关。鼠疫：有荚无芽无鞭，两极浓染，2830，pH6.97.1，液体中培养好，底部可有钟乳石样，常用1%溶血的胰酶消化肉琼脂（赫氏琼脂）加入亚硫酸钠或脱纤维血有刺激生长，龙胆紫亚硫酸钠为其选择性培养基，3%氯化钠上生长呈多形性。小肠：无动无芽无荚G，25有周鞭毛，最适温2028，VP试验25阳性，37阴性，KIA只利用葡萄糖，MIU22动力阳性37阴性。假结核：25有周鞭毛有动力37无动力，最适温30，pH68。血清检测的抗体是F180. 枸橼酸杆菌：有弗劳地，异型，无丙二酸盐。只有弗劳地靛基质，H2S，仅异型的丙二酸盐，-半乳糖苷酶，赖氨酸脱
29、羧酶，枸橼酸利用三试验：枸橼酸菌，沙门/，爱德华。81. 克雷伯菌属（又称肺炎杆菌）：以肺炎克雷伯菌多见，菌体呈卵圆形或球杆状成双排列，有时菌落出现黏液型用接种环可成丝，动力和鸟氨酸脱羧酶阴性是本菌最大特点，三亚种区别：IMViC试验：肺炎亚种，臭鼻亚种d，鼻硬结亚种。83. 沙雷菌：最适温1036，4%氯化钠下可长，产生灵红霉素（非水溶）和吡羧酸（水溶），关键生化是DNA和葡萄糖酸盐。84. 弧菌科：极端鞭毛，苷露醇，脂酶，生长需要NaCl，对O129敏感五项，弧菌属，气单胞菌属，邻单胞菌属，发光杆菌/。前三种可引起人类感染。85. 霍乱菌：呈弧状或逗点状，米泔样粪便作悬滴观察，细菌呈穿梭样
30、或流星状运动；粪便涂片镜检见排列如“鱼群”状G菌，耐碱不耐酸，可繁殖pH6.0-9.2，常用pH7.2-7.4的碱性蛋白胨水增菌培养，在硫代硫酸盐柠檬酸盐胆盐蔗糖平板（TCBS）上形成较大黄菌落，在含亚碲酸钾或庆大霉素平板上呈灰褐色，在8%NaACI中不生长，有耐热的特异性O抗原（O1群分无芽胞，无荚膜， AB的小川型，AC的稻叶型， ABC的彦岛型）和不耐热的非特异性H抗原，1992年发现的新流行的O139群，O1群无芽胞，比较薄的荚膜，常用的保存或运送有碱性蛋白胨水，文-腊二氏，卡-布运送液。噬菌体（VP1-VP5）将埃尔托型霍乱弧菌分成32个噬菌体型。根据溶原性、溶原噬菌体的敏感性、山梨
31、醇发酵试验、溶血试验分成a-l共12个生物型。常见的流行株为噬菌体1-3型，生物型a-d型，常带有霍乱肠毒素。为肠道非侵袭性细菌，主要刺激局部黏膜产生分泌IgA抗体86. 副溶血弧菌：嗜盐性弧菌（与霍乱显著区别），是我国沿海地区最常见的食物中毒病原菌，两极浓染，NaCl最适35g/L，无盐不长，pH7.09.5，最适pH 7.7，不耐热，不耐酸，在TCBS上不发酵蔗糖菌落绿色，80g/L盐内不长，神奈川现象（溶血），KP+是致病株能使人或兔红细胞发生溶血对马红细胞不溶血为阳性。87. 气单胞菌最适生长温度30，但在045皆可生长。88. 弯曲菌属是一类微需氧菌，不分解糖，氧化酶+，菌体弯曲逞豆
32、点状，S状或螺旋状有动力G菌，5种5亚种，对人致病的主要是空肠（人类腹泻最常见之一，43生长，25不生长）和胎儿亚种（免疫功能低下时的败血症，脑膜炎等，25生长，43不生长），简明弯曲菌在25，43均不生长，但都能在37生长。要加入血液血清才能生长，常用Skirrow，Butzler，Campy-BAP等培养基，滴片可见投镖式或螺旋状。89. 幽门螺杆菌：氧化酶、过氧化氢酶，微需氧，37生长，25和42均不生长的G菌，迅速分解尿素，初次分离要34天，与十二脂肠溃疡和胃癌有关。传染源主要是人，粪-口途径90.伯杰系统细菌学分类的标准：G染特性，形态，鞭毛，芽胞，荚膜，代谢产物。91. 有芽胞的厌
33、氧菌只有梭菌属包括83个种。厌氧菌每克粪中高达1012个，标本绝不能被正常菌污染，应尽量避免接触空气。最理想的标本是组织，送到实验室后2030min内处理完不超过2h。应接种固体和液体两种培养基：尽量用新鲜培养基，24h内用完，应使用预还原培养基，液体培养基应煮沸10min以驱氧并立即冷却。每份标本至少接种三个血平板，置于有氧，无氧，5%10%CO2环境中培养。厌氧手套箱培养法是迄今最佳厌氧培养仪器之一。92. 厌氧状态的指示剂有：美蓝和刃天青，无氧时白色，有氧时美蓝蓝色，刃天青粉红色。紫外线下出现荧光也是厌氧菌参考之一，卡那霉素用于梭杆菌与类杆菌的区分，甲硝唑用于厌氧菌和非厌氧菌的区别。气液
34、相色谱已成为鉴定厌氧菌及其分类比较可靠的方法。93. 破伤风杆菌：鼓槌状，早期培养G，48h后特别是芽胞形成后G，的O和H抗原，主要症状为骨骼肌痉挛，不发酵糖类，能液化明胶产H2S。产生两种外毒素：破伤风溶血素、破伤风痉挛毒素94. 产气荚膜梭菌：G，2050均能生长，最适为45，双层溶血，可分解糖类产酸产气，出现汹涌发酵现象，分5型，主要是A型，外毒素以A毒素为主，本质是卵磷脂酶（毒素），在蛋黄琼脂平板上菌落周围出现乳白色浑浊圈。所致疾病为气性坏疽，有捻发感，青霉素为首选，万古为次选。95. 肉毒梭菌：G+，芽胞胶囊于次极端呈汤匙状或网球拍状，严格厌氧，8型，以A，B多见，毒素不耐热，1mi
35、n煮沸即死。96. 艰难梭菌：分离困难，主要以临床和毒素来定，产生A，B两种，A是肠毒素，B为细胞毒素，主要是因为使用大量抗生素，以克林霉素常见。97. 无芽胞厌氧菌是一大类正常菌群，引起感染是内源性感染。98. 黑色消化链球菌：G，组织和器官感染。韦荣球菌属（分小，产碱），G，小见于上呼吸道感染，产碱见于肠道感染。99. 白喉棒状杆菌：G+，无荚无芽无鞭无毛，奈瑟（Neisser）染色成黄褐色颗粒成紫黑色，阿培特（Albert）染色菌体呈蓝绿色，异染颗粒成蓝黑色。分离培养主要用：血平板，吕氏血清斜面（生长迅速，灰白色，S型，形态典型），亚碲酸钾血琼脂（菌落黑色）。白喉毒素是一种毒性强、抗原性
36、强的蛋白质。细菌一般不侵入血，但外毒素可入血引起毒血症，不能立即送检时应浸于无菌生理盐水或15%甘油盐水中。出现各种心肌炎，软腭麻痹是白喉晚期死亡的主要原因。（白喉类毒素、百日咳菌苗、破伤风类毒素的混合疫苗DPT）100. 需氧芽胞菌除炭疽外均有鞭毛。101、布鲁菌：G-呈散沙状，需氧、无芽无鞭，光滑型有荚膜，抵抗力强，pH6.66.8，分为6个种19个生物型，对人致病的有羊、牛、猪种布鲁菌。常用静脉血做血清试管凝集试验（SAT）诊断，虎红平板凝集试验（RBPT），补体结合试验（CFT）、免疫荧光试验（IFT）等。102.TBE-Tris硼酸缓冲液，长时间电泳选用。MIC-最小抑菌浓度103三
37、糖铁与双糖铁区别：蔗糖104引物是PCR特异性的决定因素 105决定细菌的形态因素：培养基的成份、PH、培养时间、温度直接观察细菌的超微结构：超薄切片技术、电子显微镜。106.芽胞：在80水中迅速死亡，在100水中能耐受2小时以上，在70%乙醇中能存活20年。高压蒸气灭菌杀死细菌牙芽胞最有效。荚膜的重要功能：抗吞噬。是构成细菌毒力的因素之一。107.TBE-指硼酸缓冲液，长时间电泳使用。卫生毒理学一、致死剂量LD1、绝对致死剂量LD1002、最小致死剂量LD013、最大耐受剂量LD04、半数致死剂量LD50-是评价化学毒物急性毒性大小最重要的参数。（大小鼠、雌雄各半，初成年，受试后14天内总死
38、亡数）二、效应、反应、剂量效应、剂量反应、关系曲线外源化学物在体内的生物转运吸收、分布、代谢、排泄四阶段。化学毒物在体内的代谢分为两相：反应-氧化、还原、水解；反应-与体内源性物质结合亚慢性毒性试验目的：最大无作用剂量、最大耐受剂量估测阈剂量。（选用两种种属及啮齿类、非啮齿类，初断乳动物）慢性毒性试验目的：最小有作用剂量、阈剂量、最大未观察到有害作用剂量（选用两种种属及啮齿类、非啮齿类，初断乳动物）危害性评价组成：认定、描述、接触评定、特征分析毒理学试验项目：第一阶段：急性毒性试验。第二阶段：遗传毒性试验。第三阶段：亚慢性毒性试验。第四阶段：慢性毒性试验和致癌试验GB 194892004实验室
39、生物安全通用要求分级：危害等级、。生物安全防护水平（BSL-1、2、3、4）生物安全柜一级：可保护工作人员和环境。 生物安全柜二级：分A1、A2、B1、B2可保护工作人员、环境、样品。生物安全柜三级：1、普通显微：最高分辨率0.2um,不能观察细菌的亚结构2、暗视眼显微镜：分辨率0.04um,载玻片厚度1.0mm3、荧光显微镜：滴定管精度为0.20.1ml,微量滴定管精度为0.005ml。微量吸管51000ul。培养皿分：5、7.5、9、10cm蛋白质、核酸提取及相关设备一、蛋白质分离纯化-实验室常用盐析法（硫酸铵）。核酸纯化-酚、氯仿抽提制备细胞外膜蛋白-超声波细胞粉碎机。大多数限制内切酶使
40、用温度37，保存温度是-20。二、层析凝胶过滤法（分子筛层析法）-主要用于蛋白或核酸分离。介质：葡聚糖。过滤中先洗脱的是大分子物质，后小分子物质。原理：微生物学检验复习题名词解释：凝固酶：金黄色葡萄球菌可产生游离凝固酶和结合凝固酶两种，前者分泌至菌体外，被血浆中的协同因子激活为凝血酶，使纤维蛋白原变为纤维蛋白，导致血浆凝固。后者结合于菌体表面不释放，能与纤维蛋白原结合，使纤维蛋白原变为纤维蛋白而引起细菌凝聚，故又称为凝聚因子。Vi抗原：伤寒、希氏沙门菌的表面抗原，是覆盖在LPS外的荚膜多糖抗原。抗吞噬、抗体、补体，与毒力有关。能阻止O抗原与相应抗体凝集，可进行噬菌体分型。肥达试验：用已知伤寒、
41、副伤寒沙门菌的O、H抗原，检测受检血清中有无相应的抗体的半定量凝集试验，称为肥大反应。卫星现象：当流感嗜血杆菌与金黄色葡萄球菌一起培养时，可见到靠近葡萄球菌菌落的流感嗜血杆菌菌落较大，而远离葡萄球菌的流感嗜血杆菌菌落较小，这种现象称为卫星现象。抗O试验：抗链球菌溶素O抗体检测，是一种体外毒素抗毒素中和试验。抗溶血素O抗体ASO可中和溶血素O的活性，常用于风湿热的辅助诊断，活动性风湿热患者抗体效价一般超过400个单位。MRSA:1ug苯唑西林纸片的抑菌圈直径4ug/ml的金黄色片葡萄球菌称为MRSA. 对1ug的苯唑西林抑菌圈0.5ug/ml的凝固酶阴性葡萄球菌称MRCNS. 统称为耐甲氧西林葡
42、萄球菌MRS.HLARE:氨基糖苷类高水平耐药，D试验：克林霉素诱导耐药试验，外-裴反应:变形杆菌属中的某些特殊菌株如X19、X2、XK、的菌体抗原与某些立克次体有共同抗原，能出现交叉凝集，临床上用这些变形杆菌代替立克次体与患者血清做凝集反应，可作为立克次体病的辅助诊断试验，称为外-裴反应（Weil-Felix reaction）。迁徙生长现象：奇异变形杆菌和普通变形杆菌的大多数菌株在普通琼脂平板上可蔓延成菌接种部位为中心的厚薄交替的波纹状薄膜布满整个培养基表面的现象，称为迁徙生长现象神奈川试验：副溶血性弧菌在普通血平板（含羊、兔或马等血液）上不溶血或只产生-溶血；但在在特定条件下,副溶血性弧
43、菌中某些菌株在含高盐(70g/LNacl)的人O型血或兔血及以D-甘露醇为炭源的我妻(Wagatsuma)血琼脂平板上可产生溶血,该现象作为鉴定致病性与非致病性菌株的一项重要指标.结核菌素试验：结核菌素是结核杆菌的菌体成分，有两种，旧结核菌素（OT）和纯蛋白衍生物（PPD），取5U（0.1ug）PPD或OT 0.1mL注射于前臂掌侧皮下，注射后4872小时后观察，以是否出现红肿、硬结，以及其大小判断结果。卡介苗：有毒力的牛型结核分支杆菌在含甘油、马铃薯和胆汁的培养基中经13年230次传代而获得的减毒变异株。抗酸杆菌：分支杆菌属中大多数细菌，菌体内含有分支菌酸，具有抗酸性，一般不易着色，能抵抗3
44、%盐酸酒精的脱色作用，这类细菌又称为抗酸杆菌有菌免疫：是指细菌进入机体后对细菌再次入侵有免疫力，而当细菌或其成分从体内彻底消失后机体的免疫力也随之消失。细菌外膜：革兰阴性菌的特有成分，有脂质双层、脂蛋白、脂多糖三部分组成，作为保护屏障可阻止或减缓胆汁盐、抗体及其他可能杀死或损害细菌的有毒物质的进入，也可阻止周质酶等一些细胞成分的损失。脂多糖：由脂质双层向细胞外表伸出的是脂多糖，包括磷脂A、核心多糖和O-侧链三个组成部分。R质粒：又称耐药质粒，具有编码能够破坏或修饰抗生素的酶基因。毒性噬菌体：能在宿主菌细胞内复制增殖,产生许多子代噬菌体，并最终裂解细菌，称为毒性噬菌体。温和噬菌体：又称溶原性噬菌
45、体，噬菌体基因与宿主菌染色体整合，不产生子代噬菌体，但噬菌体DNA能随细菌DNA复制，并随细菌的分裂而传代。接合：细菌通过性菌毛相互连接沟通，将遗传物质（质粒）从供体菌转移给受体菌。溶原性转换：是侵入细菌的噬菌体在溶原期以前噬菌体形式在细菌内与细菌的染色体发生重组，导致细菌的基因型发生改变，溶原性细菌可以获得新的性状。转导：以温和噬菌体为载体，将供体菌的遗传物质转移到受体菌中，使后者获得新的性状。Hfr：高频重组株，F质粒基因经接合传递后,与染色体重组,整合后的细菌能以高效率转移染色体上的基因，这种染色体被整合进F质粒基因的受体菌称Hfr。毒血症：致病菌进入机体后，只能在机体局部生长繁殖不进入
46、血循环，但其产生的外毒素入血。内素毒：是革兰阴性菌细胞壁的脂多糖，当菌体死亡崩解后游离出来。耐热，有毒性作用（发热、白细胞反应、内毒素血症、DIC），抗原性弱，不可脱毒为类毒素。外毒素：是多数革兰阳性菌和少数革兰阴性菌在生长繁殖过程中，释放到菌体外的蛋白质。不耐热，毒性强，对组织有选择性作用，抗原性强，可脱毒为类毒素。中度敏感：常规用药时，达到平均血药浓度，一般相当于或略高于某种细菌的MIC。对细菌引起的感染仅在应用高剂量该药物时有效，或细菌处于体内抗菌药物浓集的部位或体液(尿、胆汁、肠腔）中时才被抑制。对毒性较小药物，可适加大剂量仍可获得临床疗效。中介：不是敏感习性的度量，作为“缓冲碱”，以
47、防止因微小技术因素失控导致的结果偏差，临床意义不确定。MIC：最低抑菌浓度（g/ml)，指在体外实验中抗菌药物抑制培养基中某种细菌的生长的最低药物浓度，是药物抗菌活性的指标，提示药物的抑菌能力。汹涌发酵现象：在牛乳培养基中能分解乳糖产酸，使酪蛋白胨凝固，同时产生大量气体，将凝固的酪蛋白胨冲成蜂窝状，并将液面上的凡士林层向上推挤，甚至冲开管口棉塞，气势凶猛，称为“汹涌发酵“ ，是产气荚膜梭菌的特征。无芽胞厌氧菌：是指一大群咋爱有氧条件下不能生长，必须在无氧条件下才能生长的无芽孢的革兰阳性及革兰阴性的球菌与杆菌。二相性真菌：有些真菌可因环境条件（如营养、温度。氧气等）改变，可由一种形态转变为另一种形态，此真菌称为二相性真菌。假菌丝：又称无隔菌丝，是指酵母菌进行出芽生殖时，子母细胞不立即分离而以狭小的面积相连，则称这种藕节状的细胞串为假菌丝。
