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1、细胞生物学（技术）课程教学大纲课程中文名称：细胞生物学（技术）课程英文名称：technique of cell culture 学分：2总学时：36实验学时：30课程性质：学位公选课适应研究生专业：生命科学、生物技术、医学基础研究一、本课程的性质和任务细胞培养技术作为研究工作的基本技术已经广泛应用于生命科学各研究领域。细胞培养技术教学大纲是根据生命科学、生物技术专业人才的培养目标所需要的基本理论和基本技能的要求，根据本课程的教学性质、条件和教学实践而制定的。细胞培养技术是生物学所有专业的一门专业基础课程，是一门独立的实验课程，同时也是为了配合基础研究中需要操作细胞实验的研究生开设的一门实验课程
2、。本课程目的旨在初步掌握细胞学研究中所必需的基本实验技术。本课程的任务是让学生牢固掌握细胞生物学研究方法与技术，具备细胞培养中观察和研究的基本方法，学会发现问题和解决问题的基本技能，通过实验，培养学生观察、比较、分析、综合等科学思维能力，以及独立工作的能力和实事求是的科学作风，同时要求学生初步具备进行细胞学实验创新性研究的基本能力与素质。二、本课程的教学内容和基本要求基本了解细胞培养的基础知识及应用范围，基本掌握细胞培养的操作技术。本课程以实验操作为主。因此，教学中应讲清基本知识，实验示教要规范，并要组织好学生的实习操作。学生学习时应在了解基本知识的基础上，认真地按要求实际操作，以初步掌握各项
3、实验技术的原则和要领。1要求学生认真预习实验指导书，理解实验原理及实验方案，掌握正确操作规程；上课亲自动手操作，作好实验记录，实验结束后详细整理、统计、分析实验结果；写出实验报告。2掌握细胞培养一般操作和实验规则；熟悉各种常用试剂配制；具备从事细胞生物学研究工作所必需的基本技能。通过本课程的学习，使学生了解细胞培养的基本知识，初步掌握基本培养技术及观察、检测方法，为进一步学习及科研实验奠定基础。一、细胞培养概论（集中授课，理论课，3学时）二、组织细胞的原代培养（1）实验课 3 学时必修验证采用组织块培养法对胎鼠组织进行原代培养，观察细胞培养和生长状况。解剖器械，细胞培养用具，倒置相差显微镜，离
4、心机，平衡盐溶液，培养基三、组织细胞的原代培养（2）实验课 3 学时必修验证采用消化培养法对胎鼠组织进行原代培养，观察细胞培养和生长状况解剖器械，细胞培养用具，倒置相差显微镜，离心机，平衡盐溶液，培养基，胰酶，筛网四、细胞株传代培养采用酶消化法对培养的细胞株进行传代，掌握胰蛋白酶消化方法细胞培养用具，平衡盐溶液，倒置相差显微镜，离心机，培养基，胰酶五、细胞计数采用血球计数板对培养的细胞进行计数，掌握细胞计数方法细胞培养用具，倒置相差显微镜，离心机，平衡盐溶液，培养基，胰酶，血球计数板六、细胞冻存与复苏采用低温保护剂对细胞进行冻存，掌握细胞慢冻快融原理和细胞的冻存及复苏技术细胞培养用具，倒置相差
5、显微镜，离心机，平衡盐溶液，培养基，胰酶，冻存管，细胞培养级DMSO，恒温水浴箱七、细胞活力测定（1）采用苔盼兰染色测定细胞的活力，掌握活细胞拒染法测定细胞活力的原理和方法细胞培养用具，倒置相差显微镜，离心机，平衡盐溶液，培养基，胰酶，苔盼兰染色液八、细胞活力测定（2）采用MTT比色法测定细胞活力，掌握MTT测定细胞活力的原理、方法及应用细胞培养用具，倒置相差显微镜，离心机，平衡盐溶液，培养基，胰酶，MTT溶液，SDS细胞裂解液九、细胞分裂指数测定观察并计数分裂期细胞在全部细胞中比例，掌握细胞分裂指数测定方法，了解细胞增殖旺盛程度细胞培养用具，正置显微镜，培养皿及玻片，平衡盐溶液，细胞固定液，
6、Gimesa染色液十、细胞周期测定采用流式细胞仪测定细胞周期，掌握FCM法测定细胞周期的原理和方法细胞培养用具，倒置相差显微镜，离心机，平衡盐溶液，培养基，胰酶，细胞固定液，细胞筛网，PI染色液十一、真核细胞转染采用荧光表达载体，脂质体转染，观察基因的转染效率和表达状况，掌握脂质体转染真核细胞的原理和方法细胞培养用具，多孔培养板荧光倒置显微镜，平衡盐溶液，培养基，胰酶，pEGFP质粒，lipofectamine脂质体转染试剂十二、细胞培养技术总结课（集中授课，理论课，3学时）说明：1、实验类型：指 演示、验证、综合、设计、研究、创新；四、课程学时分配序号内 容学 时1细胞培养技术概论32原代培
7、养（1）33原代培养（2）34传代培养35细胞计数36细胞冻存与复苏37细胞活力测定（1）38细胞活力测定（2）39细胞分裂指数测定310细胞周期测定311真核细胞转染312细胞培养总结3合计36五、其它1. 先修课程：细胞生物学，生物化学，动物解剖与组织胚胎学2. 教学方法建议：3. 考核方式： (1) 实验报告：每次实验必须写出实验报告。其内容除实验原理外，着重思考实验中所出现的问题，实验技术的应用等；对于综合实验要写出总结。(2) 考核方式：实验报告50%；课程结束考试50；间或采用抽查实验的方式。4. 作业要求：无 5. 教材及主要参考书：(1) 教材：细胞培养 司徒镇强，吴军正 主编；世界图书出版社 2004年4月出版(2) 主要参考书：细胞生物学，翟中和，王喜忠，丁明孝主编，高等教育出版社，2000细胞生物学实验指导，李素文主编，高等教育出版社，施普林格出版社，2001 细胞实验指南，斯佩克特等主编（黄培堂等译），科学出版社，2001制订者：刘梅审核者： 神经科学 学院 细胞学 教研室（所、部）
