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1、,第七章细菌和病毒的遗传学分析,细菌和病毒在遗传研究中的优越性细菌的遗传分析*噬菌体的遗传分析,一 细菌和病毒在遗传研究中的优越性,繁殖世代所需时间短；易于管理和进行化学分析；遗传物质较简单，便于用作研究基因结构、功能及调控机制的材料。便于研究基因的突变；便于研究基因的作用；可作为研究高等生物的简单模型；,二 细菌的接合与染色体作图,1.接合现象的发现,细菌的接合首先是莱德伯格（Lederberg）和塔特姆（Tatum）在1946大肠杆菌杂交试验中发现的。,a+b,ab+,a+b+,问题：得到的重组子ab的频率很低（10-7）和回复突变频率相近（10-6），两者难以区别。,莱德伯格解决方法：采
2、用了大肠杆菌(Escherichia coli)K12菌株的两个营养缺陷型品系：,品系A met bio thi leu thr 品系B met bio thi leu thr,接合现象,质疑：细菌的杂交实验获得重组子可能原因：,1950年戴维斯（Davis）设计了一种U型管实验，证实了A和B菌株之间确实是发生了杂交。,细菌的杂交实验获得的重组子可能是转化的结果。培养基中含有某些代谢产物，混合后这些产物互相补充了对方的不足而得以在基本培养基上生长。,结论:,原养型不是转化或互养产生的;两菌株细胞的直接接触是产生原养型菌株的前提。,2.海斯（W.Hayes）的实验（1952）,海斯在重复莱德伯格
3、和泰特姆的细菌杂交实验之前，分别用高剂量的链霉素来处理A菌株和B菌株。,大肠杆菌的两种类型,Hayes(1952)研究表明：,大肠杆菌两种不同菌株(品系)接合过程中遗传物质的转移是单向的；从而认为大肠杆菌存在两种类型：雌性与雄性，分别作为接合过程中遗传物质的受体与供体。,3.致育因子（fertility factor，F）,细菌染色体外的一个决定细菌雄性性别的共价环状DNA分子，称为致育因子(fertility factor)，又称为F因子或F质粒。,携带F因子的菌株称为供体菌或雄性，用F表示。未携带F因子的菌株为受体菌或雌性，用F表示。,致育基因(fertility gene):(接合转移区
4、),配对区(pairing region):(重组区),F因子结构,原点(origin):(复制区),细菌含有F因子，并且F因子通过交换整合到主染色体上，这样的细菌叫Hfr细菌。Hfr的主染色体进入F-中的频率高，比F+F-高1000倍。,Hfr细菌（高频重组菌株）,F+、F-和Hfr菌株,4.供体将F因子传递给受体的过程,接合管形成,直接将F因子通过接合管传递给受体菌,F因子整合到细菌染色体后通过接合管传递给受体菌,5.低频重组与高频重组,低频重组(low frequency recombination）：F+与F-的杂交中，F因子的转移频率很高，但供受体细菌染色体的重组频率却很低，约为10
5、-6，因此F+品系称为低频重组品系(菌株)。,F因子整合到了细菌染色体上，与F-细胞接合后将供体染色体的一部分或全部传递给F-受体，当供体和受体的等位基因带有不同的遗传标记时，可观察到它们之间发生重组，频率可达到10-2以上，称为高频重组品系（菌株）,高频重组(High frequence recombination,Hfr),Hfr和F+的异同,相同都能和F-进行杂交产生重组后代；杂交时都要通过接合管和受体菌相连接；用高剂量链霉素处理后都不影响杂交，说明它们都是作为一种供体。,不同产生的重组子频率不同；10-4，10-7 F+F-后代常为F+，而HfrF-后代绝大多数为F-；F+经吖啶橙处理
6、后会变成F-，Hfr经吖啶橙处理后仍为Hfr。,6.部分二倍体：,当Hfr菌的部分染色体进入F细胞后，F细胞中就成为部分二倍体（partial diploid）或部分合子（merozygote）。,7.细菌重组的特点,只有偶数次的交换才能保持细菌染色体的完整性，产生有活性的重组子。偶数次交换得到的重组子只有一种类型，相反重组子是一个线状片段，不能复制，随着细胞分裂而丢失,8.中断杂交与重组作图,雅科(Jacob，F)和沃尔曼(Wollman，E.)在五十年代设计了一个著名的中断杂交试验(interrupted mating experiment)。他们采用的菌株基因型为：Hfr:thr+leu
7、+azis tons lac+gal+strsF:thr leu azir tonr lac gal-strr,中断杂交的过程,上述事实说明，Hfr菌株的基因是按一定的线性顺序依次进入F菌株的，染色体从原点以直线方式进入F细胞。基因位点离原点愈近，进入F细胞愈早，反之则晚。根据中断杂交的实验，用Hfr基因在F细胞中出现的时间为标准，可以作出大肠杆菌的遗传连锁图。,用不同的Hfr菌株进行中断杂交实验所作出的大肠杆菌基因连锁图，其基因向F-细胞转移的顺序大不相同。,重组作图,当转移时间间隔在两分钟之内，如已知lac与ade紧密连锁，距离约为1分钟，中断杂交作图就不可靠，须用传统的重组作图(reco
8、mbination mapping),(1)不用亲本类型(2)两对基因间的交换频率，必须在形成部分二倍体的条件下，计算重组率。(3)部分二倍体如果不发生重组，无法鉴别。(4)接合重组不产生相反的重组类型,接合重组作图的特点：（与减数分裂生物的区别）,重组子的产生,重组频率的计算,1分钟相当于20%重组值，即：1min=20cM,三 细菌转化,是指某些细菌(或其他生物)能通过其细胞膜摄取周围供体(donor)的染色体片段，并将此外源DNA片段通过重组整合到自己染色体组的过程。,1.转化(transformation),大部分的转化工作是用肺炎双球菌(Streptococcus pneumonia
9、e)、枯草杆菌(Bacillus subtilis)和流感嗜血杆菌(Hemophilus influenzae)进行的。,受体细胞的生理状态-感受态：感受态指细菌能够从周围环境中吸收DNA分子进行转化的生理状态。一般认为感受态出现在细菌对数生长后期，并且某些处理过程可以诱导或加强感受态。以大肠杆菌为例，如用Ca2+(如Cacl2)处理对数生长后期的大肠杆菌可以增强其感受能力。,2.转化应具备的条件,DNA片段的大小，形态和浓度,大小：肺炎双球菌转化(800bp);枯草杆菌的转化(16KB)。形态：双链浓度：在细胞膜上感受位点未饱和前，浓度和转化率成正比,外源DNA片段与受体DNA的同源程度,3
10、 转化的过程,供体(donor)DNA与受体(receptor)细胞结合(binding)结合发生在受体细胞特定部位；结合过程是一个可逆过程。,DNA的穿入和摄取：当细菌结合点饱和之后，细菌开始摄取外源DNA；往往只有一条DNA单链进入细胞，另一条链在膜上降解。,联会(synapsis)与外源DNA片段整合(integration)：整合就是指单链的转化DNA与受体DNA对应位点的置换，稳定地掺入到受体DNA中的过程。整合是一个遗传重组的过程。,杂合DNA复制后，形成一个亲代类型的DNA和一个重组类型的DNA并导致转化细胞的形成与表达。,转化的进程,4 共转化与遗传图谱绘制,共转化：供体的一条
11、DNA片段上的两个基因同时转换的现象。利用共同转化绘制细菌连锁遗传图谱的基本原理：相邻基因发生共同转化的概率与两者的距离间成正向关系，基因间距离越近，发生共同转化的频率越高，反之越低。因此可能通过测定两基因共同转化的频率来指示基因间的相对距离。,判断两个基因是否连锁,例如：黎德伯格等人用枯草杆菌:以trp2+his2+tyr1+为供体，以trp2-his2-tyr1-为受体进行转化，结果如表,转化子数(重组体数)亲组合数+转化子数,(+-)+(-+)(+)+(+-)+(-+),计算重组率及作图,RF(trp2his2)=34%RF(trp2tyr1)=40%RF(his2tyr1)=13%,四
12、 性导,F因子整合到宿主细菌染色体的过程是可逆的，当发生环出(looping out)时，F因子又重新离开染色体。然而F因子偶然在环出时不够准确，它携带有染色体的一些基因。,这种带有宿主染色体基因的F因子称为F因子。,性导(sexduction)：是指接合时由F因子所携带的外源DNA转移到细菌染色体的过程。,性导的遗传重组,F因子以极高的比率转移它的基因，如同F+细菌以极高的比率转移它的F+因子一样；F因子有极高的自然整合率，而且整合在一定的座位上，因为它有与细菌染色体的同源区段。,F因子使细菌带有某些突出的特点：,不同的F因子带有不同的细菌DNA 片段，利用不同的F的性导可以测定不同基因在一
13、起转移的频率。观察由性导形成的杂合部分二倍体中某一性状的表现，可以确定这一性状的等位基因的显隐关系。性导形成的部分二倍体也可用作互补测验，确定两个突变型是同属于一个基因还是不同基因。,性导在大肠杆菌的遗传学研究中意义：,互补测验：根据基因的功能确定两个基因是否等位的测验方法。互补作用：两个突变型细胞的两条同源染色体同处在一个杂合子时，野生型基因补偿突变基因的缺陷而使表型恢复正常。否则，两种突变型一定具有相同的功能损伤。,顺式构型：两个突变分别位于一同源染色体上的基因组合。反式构型：两个突变分别位于两条同源染色体上的基因组合。,病毒分三类：植物病毒、动物病毒和噬菌体。噬菌体:指侵染细菌、放线菌以
14、及真菌的病毒。包括温和、烈性两种。单一核酸分子（DNA或RNA）称为基因带或染色体。,五 噬菌体的遗传学分析,1.噬菌体的结构和形态,2 噬菌体的繁殖和感染周期,烈性噬菌体:如T噬菌体,烈性噬菌体的感染周期,噢，一只倒霉的大肠杆菌遇了细菌病毒T4噬菌体！,病毒马上抓住猎物不放，但是大肠杆菌体积是病毒的1000倍。病毒怎么办呢？,T4 噬菌体的生命旅程,请看：病毒的蛋白质外壳发挥作用，将病毒的核酸物质注入大肠杆菌体内，请注意病毒的外壳最后会被弃在寄主体外。,左图：病毒核酸链接入到寄主核酸链中右图：病毒核酸链指挥大量复制自己,病毒的核酸链（蓝色部分）经过一系列作用，接入寄主的核酸链（橙色部分）中，
15、进而控制寄主的生命活动。利用寄主本身的营养物质复制出成千上万的病毒核酸，同时新产生的病毒核酸链（黄色部分）又指挥寄主的细胞，利用寄主的营养物质大量地生产病毒外壳蛋白质，最后把外壳与病毒核酸一起装配成完整的新病毒。,最后:大肠杆菌死亡并破裂，释放出里面的病毒，新一代病毒开始新的生命旅程,随着时间的推移，细菌的数量变得越来越少，这是因为它们被细菌病毒杀死了，这种现象也称为“溶菌”现象。,温和噬菌体,如噬菌体:,温和噬菌体侵入相应宿主细胞后，由于前者的基因组整合到后者的基因组上，并随后者的复制而进行同步复制，因此，这种温和噬菌体的侵入并不引起宿主细胞裂解，此即称溶源性或溶源现象。,溶源性（lysog
16、eny）,原噬菌体（prophage）,当温和噬菌体侵入其敏感宿主的细胞后，前者的核酸可整合到后者的核基因组（genome，即核染色体）上，这种处于整合态的噬菌体核酸，称作原噬菌体（prophage）。,凡能引起溶源性的噬菌体即称温和噬菌体，而其宿主就称溶源菌。溶源菌是一类能与温和噬菌体长期共存，一般不会出现有害影响的宿主细胞。,溶源菌（lysogen或lysogenic bacteria）,温和噬菌体的溶源性反应：,3 噬菌体的突变型,条件致死突变型:(1).温度敏感突变(2).抑制因子敏感突变宿主范围突变型:E.coli B E.coli B2 E.coli B+E.coli B2 h+-
17、半透明噬菌斑 h-+透明噬菌斑噬菌斑形态突变型:(1).r+小噬菌斑,边缘模糊(2).r-大噬菌斑,边缘清晰:快速溶菌(rapid lysis),4 烈性噬菌体与基因定位,双重感染：是指用两种噬菌体同时感染某一菌株。例如：噬菌体：hr+即能感染B和B2菌株产生噬菌斑小而边缘模糊，即透明、小噬菌斑。噬菌体：h+r能感染B株，产生约大两倍的边缘清楚的噬菌斑，即为半透明、大的噬菌斑。用hr+和h+r两种噬菌体同时感染B株，进行双重感染。,hr 半透明，大 42hr 半透明，小 12hr 透 明，小 34hr 透 明，大 12,重组率=,(h+r+h-r-)100%,总噬菌斑数,T2 phage重组试
18、验结果,有四种可能的排列顺序,六 转导(transduction),以噬菌体为媒介，把某一细菌的DNA转移到另一细菌，进行基因重组的过程。,转导的遗传重组,普遍性转导(generalized transduction)：供体的任何一个基因都可能被转移，且几率相等。局限性(特异性)转导(specialized transduction)：噬菌体只把细菌基因组中特定部分的基因整合到自己的DNA中，并传递给受体的过程。,采集志愿者的少量静脉血（35毫升），EB病毒转化B淋巴细胞为永生细胞，经过技术处理的数千株细胞被保存在零下196摄氏度的液氮中，在需要的时候将冻存的细胞复苏，可以保存志愿者基因供永久性研究。,CLASS IS OVER!,
