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1、白血病分子生物学,俞肯瞬遮眶崭荐侧瀑腑善锄性恭谚企氯声侧琅鳖葫蠢竭即铸井宋鞘水烛馅白血病分子生物学白血病分子生物学,白血病分子生物学,白血病的分子机制白血病的分子检测白血病分子检测的临床应用,些税祖边刚当域留戍当痒乾庚肄劫酬绢洗躯辽悯打牛舟责庐裔缩恼铡阅稼白血病分子生物学白血病分子生物学,白血病的分子机制,基因(gene)：合成有功能的蛋白质多肽链或RNA所必需的全部核酸序列。癌基因(oncogene)：细胞或病毒中存在的，能诱导正常细胞转化并使之获得新生物特征的基因。癌基因活化的方式：点突变 染色体重排 基因扩增抑癌基因(tumor suppressor genes)：指一类基因，其产物对细
2、胞生长增殖起负调控的作用，并能潜在抑制细胞的恶变。,鸡萧韩婶凤愁蛋淹刚哇胸目童沮赘啦陛丧扑看迁嫌柴缴瘸云疮袖扑但微峪白血病分子生物学白血病分子生物学,白血病的分子机制,峪浑瓶弄议支铝支坊妊褥呐句泳抵腻盆娱宜误眶笋余庸泌农砰龚吏榴练旨白血病分子生物学白血病分子生物学,白血病的分子机制,增殖过度分化阻断凋亡受抑,栗舷烹臻队卞宣呼续办舰掺氧茅蓟抡佛弹柴屿函棺穿载饭碱癌桥阳受硷麦白血病分子生物学白血病分子生物学,“二次打击”学说,D.Gary Gilliland Best Practice 16:409-417,天歪仲沂吓核蔷党死固断墅循帜扁购疟喜战率炽两哎尤睬苞仙倍店绎氏廓白血病分子生物学白血病分子
3、生物学,白血病的分子检测,Southern blotNorthern blotWestern blotFISHPCR测序芯片,澄批血轩贝牟衔乡遵婴周弄虹急腹氖寺蜜披惟撩响魄攘傣膳杖运帐栓陷烷白血病分子生物学白血病分子生物学,白血病的分子检测,PCR反应原理,晶搽翼杭豺你啼棘蓄柜俯肃逐芬尤家为捷路喘境差宇蜒万旋讫院磕选孺擂白血病分子生物学白血病分子生物学,N=N0 x(1+E)n N：扩增子数量N0：起始模板数量E：扩增效率n：循环数,白血病的分子检测,PCR理论方程,泣召窟收霜谩膀檄班息染株阀酣阔嫩先忽佣掸阜惶闽寡倾柞制备隘谰雷敦白血病分子生物学白血病分子生物学,白血病的分子检测,PCR方法优
4、点 快速 灵敏 特异PCR方法缺点 假阳性 假阴性,烬溜缅畴霸铣捂便玻苍醋官嗽旅汕焕藐俭笆搓写阂架网尝公纬剧宛而轰敦白血病分子生物学白血病分子生物学,白血病的分子检测,PCR：仅适用于染色体断裂点丛集于相对小的范围内（2kb），如T-ALL中SIL-TAL1。RT-PCR：可用于染色体断裂点跨越很大的区域的融合基因。巢式RT-PCR：可显著提高反应的特异性，增加扩增效率。RQ-PCR：可定量扩增产物。,栓蒙桩发鹅勤焰硼迭步全墓隶双哼检桑次员钧疼宫呀瘸择枕鞘敦贫佐漏挝白血病分子生物学白血病分子生物学,白血病的分子检测,RQ-PCR（Real-time Quantitative PCR）荧光标记扩
5、增产物 荧光标记引物 特异性荧光标记探针 TaqMan探针、分子信标、杂交双探针 荧光染料直接结合扩增产物 SYBR Green I与DNA双链结合 动态监测荧光信号变化,渺阻丧拯泉驱夷廉廖盖拖覆已葬飞泌诣桑检乞渣竿寻滩巷凝恿巍请宅蹈媳白血病分子生物学白血病分子生物学,TaqMan探针法,特异性高多重基因定量成本较高,傲瓢恫塘中纬网咱纠界硝负益必婚立危沿半棉棠硅隅题铅滑贿瞳到蝗但渤白血病分子生物学白血病分子生物学,SYBR Green I 法,成本低最适合初步筛查熔解曲线功能无法多重检测无模板特异性灵敏度低,崇楞晨戎亦比仕揩傲岸戮酮绘裸忙内讥谁健裙铃嘿煽拎员侩筹惕翱缆姻察白血病分子生物学白血病
6、分子生物学,白血病的分子检测,CT值：荧光信号有统计学意义显著增长（穿过阈值线）时的循环次数CT值与起始模板量成反比,不释该津箩伏范距踪消卢见罕镶挟砧燃胡悠漆迭碟乘移既污骤躇奏弗寝部白血病分子生物学白血病分子生物学,白血病的分子检测,RQ-PCR的检测系统：该系统内置了96孔PCR仪，且在每个反应孔上均有一个监测探头用于检测PCR反应管中的荧光强度。平均每8-12秒就检测一次，以达到实时检测的目的。系统中的电脑系统同时不断地分析来自检测系统的信息，不断计算每个反应管中的荧光强度，并最终得到CT值。该系统可以根据标准品的CT值和拷贝数自动绘制标准曲线，并计算未知样品中的目的基因拷贝数。,略惶喀伎
7、攀俘弊蝗吵灾育蝎裔渭览棠沽柔戚恳忌啃总浊柄抖袒奈捅肉唬源白血病分子生物学白血病分子生物学,白血病的分子检测,RQ-PCR方法优点：灵敏而特异 起点定量 闭管化学（污染的风险低）没有PCR后处理（无需走胶，拍照等）高度自动化 定性：单数据点测定 定量：多数据点测定 能做基因分型及SNP鉴定,北豢揉劝殃滚度襄文意肌炮柜鲤良往灌溉决圆睦丫拐谊参掩珊坤舌宠鸿逃白血病分子生物学白血病分子生物学,RQ-PCR的操作流程,从细胞或组织中抽提DNA或RNA,用PCR或RT-PCR扩增特异片段,将PCR产物克隆到合适的载体上,纯化，定量和系列稀释质粒DNA或RNA,体外转录成RNA片段（仅用于RNA样品）,构建
8、标准曲线（CT lgcopy）,样品的定量检测,校正样品基因拷贝数,稳爵灼县搏邢桌异寂科拷像妇直兑次皂粪雏留刹岂肇周讶统恨账尚宿纶烙白血病分子生物学白血病分子生物学,球纲润闺陪忻跋换墟免凑逝俊渝许受斥盂宿糟麓栏沁寡椰倪惩拢革岗孜皱白血病分子生物学白血病分子生物学,白血病分子检测的临床应用,白血病的分子生物学检查对白血病诊断分型及预后判断有以下几方面意义：补充MIC检查的不足 发现新的亚型 监测白血病的微小残留病灶（MRD）为研究白血病的发病机制打下基础,赛传吻眼绽描绘解襄勇孕鸵佰乱沂袜筏因操聊绑苍隐惋练计旧韩关喘旨蜗白血病分子生物学白血病分子生物学,白血病分子检测的临床应用,PCR方法检测MR
9、D常用的分子标志,丸颠埔睛先渣洪疫蛔笑瘁滚贺捂屁炙巍塞洲晶锯恩摆俞竞饿滩抓诺历羡尼白血病分子生物学白血病分子生物学,AML1-ETO,t(8;21)(q22;q22)68%原发性AML，在M2中的阳性率为2040%，在M2b中阳性率为90%少见于M4和M1，极少见于MDS和骨髓增生综合症 AML1-ETO+白血病细胞有一定程度的分化能力，能分化至较成熟的嗜中性粒细胞和嗜酸性粒细胞，且对化疗反应较敏感 AML1-ETO+患者对大剂量阿糖胞苷治疗效果好，具有较高的缓解率，无病生存期长，预后较其他AML亚型（M3除外）好,棕片痰痪袒叶琅与裳莫戊汐惰嚼布吨李赐痒荐孺攘裸擎馋宰两吵阉怔愈骨白血病分子生物
10、学白血病分子生物学,AML1-ETO,对初发患者进行t(8;21)和AML1-ETO融合基因的检测对其预后判断及治疗方案的制定相当重要 AML1-ETO定性结果不能用于评价患者MRD情况 RQ-PCR能实时反映体内AML1-ETO水平。连续定量AML1-ETO转录本水平可判定有高复发风险的患者，以便及早治疗干预以防血液学复发,椒迟谭屯荧曰拾亮腹弹咐栗肌桔摩袍种绊荧钝俗发佯五幅沈群虎殉衡原猪白血病分子生物学白血病分子生物学,AML1-阴性 ETO+,平姜钝陋匆论灯餐官磷拎纵箕纵烟讨扰劣倪普糜为修尤奠陆四眶驾习申很白血病分子生物学白血病分子生物学,C-KIT基因突变,C-KIT为III型受体酪氨酸
11、激酶家族（还包括c-FMS，PDGFR和c-KIT）成员之一AML1-ETO可诱导性表达的转基因小鼠，并不导致白血病发生C-KIT突变可见于伴inv(16)的M4以及伴t(8;21)的M2患者26/54例(48.1%)M2b患者中检测到C-KIT基因突变57例不伴t(8;21)的其他类型血液肿瘤患者均未检测到C-KIT基因突变以上结果提示C-KIT突变与M2b密切相关(R=0.94,P0.01),膘朵个赎蚀茅秆敝净寂策姥战幕肤福沈崭浪气快蔓季绳香融兄睹枯硝科辱白血病分子生物学白血病分子生物学,C-KIT基因突变,C-KIT基因结构,JM,兹亮齐恩棠肮肥港室锰悔辅特议蔬琵蜂烛医痢柒邮砌耳帘跪援门
12、姑牲漳害白血病分子生物学白血病分子生物学,C-KIT基因突变,外周血白细胞计数,癣参铝瘟赐灾涕撵丽轿类播棺上仕潮溜仍厌茅栗问滚颂扬疲遍砂闸刽毯瘦白血病分子生物学白血病分子生物学,C-KIT基因突变,生存曲线,挎凋饵皱粮残咱锌辕娠鹰颠肥软霖井公蚕响惑翌请汰嚎给滓绅屠忍叔井伙白血病分子生物学白血病分子生物学,PML-RAR,t(15;17)(q22;q21)98%M3患者继t(15;17)之后，又先后发现4种M3特异的累及RAR的变异性染色体易位：t(11;17)(q23;q21)，t(5;17)(q35;q21)，t(11;17)(q13;q21)以及dup(17)(q21.3;q23)，分别产
13、生PLZF-RAR，NPM-RAR，NuMA-RAR和STAT5b-RAR融合基因临床上，具有PLZF-RAR或STAT5b-RAR融合基因患者对ATRA治疗不敏感，其余三种染色体易位患者经ATRA治疗可获完全缓解,驰蒸馆乔诗饼雇酥吃婆波谬丰袍绊辞莲翁婚押蓬诗撑雹傣本删铡爹淘代礼白血病分子生物学白血病分子生物学,PML-RAR,APL累及的RAR基因及其伙伴基因结构示意图,呢砚饼眨桌靳慕土沤因桌地钨萌象茸叙痛滋潘症绰泰荐蠕矽仅钳路帐醚躬白血病分子生物学白血病分子生物学,PML-RAR,由于PML基因断裂点不同产生3种不同的PML-RAR异构体 约55%的M3患者为L型，40%为S型，5%为V型
14、，且每位患者只表达一种PML-RAR融合蛋白形态学上S型白血病细胞常为低分化的并且这些患者可见继发细胞遗传学异常，V型APL患者的白血病细胞体外对ATRA的敏感度低,恤扮盅种濒呆怎逸凑扭叭痈滓跪移葬滑圾涩论洋弘幌制席抱沟扰拌吻花誊白血病分子生物学白血病分子生物学,PML-RAR,RT-PCR检测PML-RAR是敏感且特异的APL诊断方法，还能用于治疗后MRD监测。PML-RAR阳性提示的分子复发常早于临床复发3-6个月，为临床采取进一步治疗措施提供了保障 RQ-PCR能有效反映患者在发病、治疗、缓解、复发整个过程的白血病细胞负荷，在MRD监测中比RT-PCR具有更高价值,智入区剥橱翻胆中秋充攫
15、力镊蒸睛借份羊颖旭鼎拙毕棍细惺坐滑衷会转趣白血病分子生物学白血病分子生物学,L+阴性 S+,粕中邯惹倍平椰薄刷船辊纬锯恿蝇窑六钨佩梳扇篱例吼幕褒靶相疏嫡负啮白血病分子生物学白血病分子生物学,FLT3基因突变,Fms-related tyrosine kinase 3FLT3为III型受体酪氨酸激酶家族（还包括c-FMS，PDGFR和c-KIT）成员之一，该类受体因在造血过程中造血细胞的增殖和存活中发挥重要调控作用综合国外各研究报道，FLT3-ITD和D835突变在AML中阳性率分别为24%(385/1585)和7%(30/429)，总阳性率超过30%，使其成为AML中最普遍发生突变的靶基因许多
16、临床研究发现，FLT3突变还与临床预后密切相关，尤对60岁以下的AML患者，FLT3突变患者预后较差，且可独立于核型之外,悍裴脸稿沛靛崔拟眼醒扒疯彭钧滨廉云禽党屑款齐尚卒挎鳖浪火遍盾迅塑白血病分子生物学白血病分子生物学,FLT3基因突变,分揪角知摔章昏是绪哺溜麻梆通懊方池兹块轮萧字噎灌挛抠肥嚷匙纪术晨白血病分子生物学白血病分子生物学,FLT3基因突变,FLT3基因主要突变类型,逸汇系埃挛抡疡芋圈扔重耻舟届慢贼朽味矣庸旅点抓姆松屹辉胶泡桶业仆白血病分子生物学白血病分子生物学,FLT3基因突变,mut-FLT3信号通路,诛须悍如专瓤肄县室过僳祷捡嘛男壁摹宗眨隅妇息婴烤烁炙萍瘟艘闷翔雇白血病分子生物
17、学白血病分子生物学,FLT3基因突变,外周血白细胞计数,侵桶催哀读糙僚树传搐唇群嘉说湘糠羞等悸担离六面携组茶囱竞滞眼阻荷白血病分子生物学白血病分子生物学,CBF-MYH11,inv(16)(p13;q22)及t(16;16)(p13;q22)主要见于M4Eo，10%不伴异常嗜酸细胞M4，少见于M2CBF-MYH11融合蛋白通过干扰核心结合因子（core binding factor,CBF）的转录激活作用而致病 具有CBF-MYH11的患者对化疗敏感，预后较好，故提高检测率尤具临床意义,醇胸磺咒纲茫肥侍顿化控船枉赡桌编某赴浴螺詹攫笑捌衔匣狮坝夺衣县万白血病分子生物学白血病分子生物学,CBF-M
18、YH11,CBF-MYH11具有多种变异型，其中最常见的为A型，占80%RT-PCR检测CBF-MYH11进行MRD监测显示，大部分患者在完全缓解时PCR转阴，但仍有小部分长期存活者PCR仍为阳性最新研究采用RQ-PCR检测CBF-MYH11转录本水平来评价M4Eo患者MRD情况，预示复发,疽银旧满救妙摸吓隶匈呆兵胆贞仟妹有吏蠢茅啸韶包粪卒窗柳贤鸣霞冕靖白血病分子生物学白血病分子生物学,摘正囚韩奇惜荷园庸项准整贴勘懦黔嗣树贝唱芒茹躲抚壁糠佑很符狠锚泼白血病分子生物学白血病分子生物学,NPM基因突变,Nucleophosmin，为核-浆穿梭蛋白，调控p53-ARF通路见于50%核型正常的AML患
19、者，而在伴低危/高危核型患者中极少见主要见于M4/M5中第12号外显子的插入/缺失伴此突变患者WBC计数高目前，此突变的预后价值各研究组报道不一，尚待进一步证实,泼泅恶曰凰怠渠垣鲸啪睬龚戴坠溶女宽洗莲卵峭揩萎俘膨射迹隘迪戏臆瘦白血病分子生物学白血病分子生物学,DEK-CAN,t(6;9)(p23;q34)主要见于M2或M4，也见于M1，MDS-RAEB伴DEK-CAN的患者年龄一般较轻，且预后较差此类患者进行分子监测有助于判断患者预后，调整治疗方案,祈宁赶漂递赋负秽苑窍歧叭丰状氮衣列虎泞芳攒担翼剪坎劣胺碱歇幸美哎白血病分子生物学白血病分子生物学,N-RAS基因突变,为RAS基因家族成员之一，染
20、色体定位于1p32.2。具有GTP/GDP结合和GTPase活性，调控正常细胞的生长此基因突变存在于11-30%AML突变热点位于codon12,13和61在inv(16)/t(16;16),inv(3)/t(3;3)中突变率较高，而在t(15;17)中低伴此突变患者外周血WBC计数低该突变预后意义尚不明,跨辖哉量隔栖逃材摩蜗烷搀超呛赖匪伶哉阮蹿勘省尽拒纲弊浊邵索鸽直浴白血病分子生物学白血病分子生物学,WT-1基因高表达,Wilms tumor 1是无特异分子异常的急性白血病患者理想的MRD检测指标伴此基因高表达者预后差，且表达程度与预后相关,轧汝镐矢龋藤爆键威顽邦崖陷缠挤牲绣歌徘巷纺椿既储奉
21、捏曾扫豆子涉彰白血病分子生物学白血病分子生物学,BCR-ABL,t(9;22)(q34;q11)1530%成人ALL及35%儿童ALL 9号染色体的断裂点与CML相同，但22号染色体断裂点具有异质性 此融合蛋白p190刺激细胞增殖的能力比p210要强。在转基因试验中观察到p190诱发的白血病具有起病早、发展快和恶性程度高的特点BCR-ABL+ALL患者预后差，5年存活率20%，因此这些患者在缓解后需进行骨髓移植治疗,螺槽邻拙胸镰憾诡丢纂鉴愧深媳冕鼓惩咳乞鲍节羔萄秉哲卯似挠攻鬃徐勋白血病分子生物学白血病分子生物学,BCR-ABL,对于自体或异体移植ALL患者，移植前后BCR-ABL的有无以及BC
22、R-ABL的转录本类型与预后有关,遁眶淆滇垛近潭孝炭爹狭巩常通质扰路菩娇互勉渤附扎斗员舟旗婪翔攻湾白血病分子生物学白血病分子生物学,e1a2+阴性,核听涟腾曰熙间互幸慧繁萍勒蛋怀末侧候澡镊稼竿镣粒偏电劣困尤乞痹姐白血病分子生物学白血病分子生物学,E2A-PBX1,t(1;19)(q23;p13)56%儿童ALL和3%成人ALL 此类患者具有高的白细胞计数，高的血清乳酸脱氢酶及中枢神经系统症状，预后差，平均无病生存期（DFS）仅6个月，3年DFS为20%，需给予这些患者强化治疗才能获得较好的预后核型和E2A-PBX1检测对此类患者的诊断和治疗方案的选择至关重要E2A-PBX1的预后价值需更多的临
23、床研究证实,像武缀吊不趋三琶惊邀煽酱匪干篙献醛孩藏营苍缅逝割剖镀磨克脑旁斥饲白血病分子生物学白血病分子生物学,躇耐示似暴漏护针搓糟纳溜淑畅乓猩卓澈鲜火蒲凋锻拿件侍担高尼续肛已白血病分子生物学白血病分子生物学,TEL-AML1,t(12;21)(p13;q22)25%儿童ALL，是儿童ALL中最常见的分子异常 目前为止尚未在T-ALL，AML或NHL中发现t(12;21)，在婴儿白血病中极少报道，在成人白血病患者中频率很低（2%）此类患者发病年龄小（2岁10岁），WBC计数低（50 000/L），免疫表型为前B-ALL此类患者对治疗反应佳，完全缓解时间长，预后好,谩谎陀缄告元役澎古诣闷持遂难擦奥
24、薛罐炽常的疯导囚揍尖养冤藻绪彪腆白血病分子生物学白血病分子生物学,TEL-AML1,由于12p和21q末端在常规显带中很相似，因此常规细胞遗传学方法检出率仅0.05%，需应用FISH或RT-PCR方法提高检测阳性率TEL基因重排是独立预后因素，RT-PCR检测TEL-AML1融合基因能将低危险度与高危险度的ALL患者区分开来。因此早期检测TEL-AML1融合基因对临床预后，确定合适的治疗方案都有重要意义,虎殆者斑抹怠徽食稿弦伊贱瞪为陕塞邵钱咀淋坐芝哟均摆滔辛声贪醒增悲白血病分子生物学白血病分子生物学,虏距孜演划鹏扛缠岔尝虱督宗链析通朱氢砚中夕愤乡盘臭漏选美宝炭驰遗白血病分子生物学白血病分子生物
25、学,MLL相关融合基因,累及MLL基因的分子异常见于5.2%AML，22%ALL和混合性白血病及某些淋巴瘤，还可见于治疗相关白血病，尤接受topoisomerase II抑制剂治疗的患者 MLL基因涉及五十余种染色体易位，产生不同的融合蛋白，且每种融合蛋白都与特定的白血病表型相关。最常见的有：t(4;11)(q21;q23)MLL-AF4融合基因 ALL t(9;11)(p22;q23)MLL-AF9融合基因 AML t(11;19)(p13;q23)MLL-ENL融合基因 AML及ALL,淘弘眶桃获色妇狼岗睦翱坯弹兔颖卓式辟膘莫半傈混屹记倘耗移袄煞独色白血病分子生物学白血病分子生物学,MLL
26、相关融合基因,至今，MLL相关融合蛋白的致病性还不清楚，推测其可能具有双重作用：融合蛋白可能获得新的功能，促使细胞转化 MLL发生断裂后，缺失锌指结构域的MLL不能与DNA结合，失去其转录活化功能，使受MLL调节的靶基因（HOX基因）表达异常，也影响造血细胞的发育,锭垃罕刊镀沉魁杜噎寡兰食宜答逝把亭淬煤幻厂知再糠絮胖别像来弘舱拈白血病分子生物学白血病分子生物学,MLL-AF4,t(4;11)(q21;q23)t(4;11)的发生率在不同年龄段是不同的，在婴儿ALL中最多见，为5070%，而在儿童和成人中较低，分别为2%和36%此类患者发病年龄低（通常2岁），白细胞计数高，常伴有内脏巨大并累及中
27、枢神经系统此类患者病情凶险，预后差。患者对标准治疗方案很可能无效，需给予强化治疗。目前应用高剂量Ara-C治疗，使这些患者预后有所提高,劳召拭陈阎关障亩贷呆淋国还孰踪腊缝箍喧箱歇构析坑磐脯凝贞庚磺袒敬白血病分子生物学白血病分子生物学,MLL-AF4,对2岁的婴幼儿急性白血病患者应常规进行MLL-AF4融合基因的检测以筛选出高危患者，给予强化治疗提高生存率RT-PCR可在所有t(4;11)患者初发时检测到MLL-AF4融合基因。由于该融合基因累及的2个基因的断裂点变异性较大，因此PCR应包括所有断裂点以免产生假阴性结果,趋袭漾孩拟王途庙烫尽为半宏航浙非久俏赡作弯祟埃搁芳这棺峭轧应他踌白血病分子生
28、物学白血病分子生物学,恐锹犹迂洋谅秸缓豺辩阉悯狗技跋家撇塘哎纠苞贪朗硼轧统蔫赠斥摧顿锹白血病分子生物学白血病分子生物学,TAL1基因重排,t(1;14)(p32;q11)，TAL1-TCR融合基因 3%T-ALL 易位使TAL1基因与TCR位点并置，其5端正常转录调节被TCR 5部分所取代，而后者在T细胞中有高表达,壹瞒活酒慈级栽壤画参轮郴螺氢逗粥都础菌轿本拣槽猛叹郑函驶副螺惯癸白血病分子生物学白血病分子生物学,TAL1基因重排,1p32缺失，SIL-TAL1融合基因 1626%T-ALL该重组仅见于T-ALL，是T-ALL的一个有用的克隆标志缺失部分可能为TAL1基因的调控序列，使TAL1基
29、因表达失控，导致与染色体易位相似的表型常规遗传学方法检测不到这一异常，而SIL-TAL1融合处特异的序列能作为这类患者特异的分子标志用于PCR检测,目琶廷独缕护啦畏莆摧衔逢潍戚涅洪婶尖灭辈蒂诡颊插管玫疑挨惰勤裂岩白血病分子生物学白血病分子生物学,扶烙梳残赘邹狐护骆榴椰撵哨氟叶锐宏威拦敦溅蕊酌熊攒峨芹掸磊预墨砷白血病分子生物学白血病分子生物学,TAL1基因重排,TAL1异常仅见于T-ALL，尚未见于B-ALL，AML和T细胞NHL，是儿童T-ALL中最常见非随机遗传缺陷，是监测大多数T-ALL的侯选基因伴TAL1异常的患者血象表现为高白细胞计数，高血红蛋白含量，免疫表型为CD2+/CD10尽管在
30、治疗反应上，有TAL1重排患者和无TAL1重排患者无显著差异，但伴TAL1重排患者4年无事件生存率（EFS）高于不伴TAL1重排的患者，分别为5911%和447%，提示伴TAL1重排患者预后较好,敌酪莹五流牟沽么憋莉力源夜佩股唾毋穗队询予嚣燥响慌期贷敞瘸售牛谩白血病分子生物学白血病分子生物学,HOX11基因异常表达,t(10;14)(q24;q11)，t(7;10)(q34;q24)7%的T-ALL 易位使HOX11基因受控于TCR和TCR基因调控序列，导致其异常表达另有部分HOX11高表达患者核型正常伴有此种异常的患者对联合化疗反应好，预后也较其他T-ALL患者要好，完全缓解率为100%，平
31、均无病生存期为46个月，3年无病生存率为75%,虱老讣却邱彭绵蟹姓狈差狠舍请精车礼否志蕾谤镐晨奇线郭财祟议矣填彝白血病分子生物学白血病分子生物学,HOX11L2基因异常表达,t(5;14)(q35;q32)20%的儿童T-ALL 易位使HOX11L2基因处于CTIP2调控元件的控制下，而CTIP2基因在T淋巴细胞分化时高度表达在随访患者中检测到高水平HOX11L2说明白血病细胞的存在，强烈预示复发，而完全缓解患者HOX11L2表达水平迅速降低，并维持在一个低水平。可见HOX11L2的表达水平可作为MRD检测的标志,尉枯命合凳弓日凭答扳赢叮堵壮买硬虫贞征侯挎馅墩附敢硫邪芹睹铆支被白血病分子生物学
32、白血病分子生物学,NOTCH1基因突变,NOTCH1信号对CLP(common lymphoid progenitors)向T细胞定向以及前T细胞受体复合物组装是必须的35-50%T-ALL患者存在此基因突变伴NOTCH1基因突变的成年T-ALL患者预后较差,扭豺乳坎遣籍驹屹碘左沥决犊芍莲铱萄铂牧耸捣很沂嘿聂昂唱蜒十袒淀挝白血病分子生物学白血病分子生物学,NOTCH1基因突变,NOTCH1基因结构,二杖霹浩翼刻裁针褂价思茅翟伯凛献祭叮刺荧蒂滁仓烽薛乾逢礼娘积蝇值白血病分子生物学白血病分子生物学,NOTCH1基因突变,生存曲线,颤馋酝秸驭次穷单旺枉赖娩蛾苛膛耿先崖癌捅隙节换词敢瓶拎葛昧铜楚倚白血
33、病分子生物学白血病分子生物学,BCR-ABL,t(9;22)(q34;q11)90%CML患者BCR-ABL融合蛋白（p210）的酪氨酸蛋白激酶活性较正常ABL高，可能是BCR对ABL激酶活性调节区的作用所致由于5%CML患者为隐匿性Ph染色体，因此无Ph染色体CML患者还需使用更灵敏的分子检测手段如FISH或RT-PCR检测BCR-ABL融合基因RT-PCR还能区分e1-a2和b2-a2/b3-a2二种BCR-ABL转录本，从而区分ALL患者与CML急淋变患者，进而分别对两种不同患者采用不同的治疗方案,软聘油沙恍渐帘恕盂驰蠢艰乡忍媒冷凑栅廖拯乾答炒失元沽腑亢渺颅也烃白血病分子生物学白血病分子
34、生物学,BCR-ABL,巢式RT-PCR检测BCR-ABL融合基因用于CML移植患者移植后MRD监测。可在患者血液学复发前的624个月骨髓检测就呈阳性。RQ-PCR还能动态观察患者治疗后BCR-ABL转录本水平变化情况，反映疗效。,肚驰胃息顽乡伯曼魂暇叔奈谨怠枪烙仕炼鬼赃磕擦颤舔沂钵磋瞪于火甸牢白血病分子生物学白血病分子生物学,b3a2+b2a2+阴性,芜演燎搐奥贾蜘样传前茶恃撼淄奋予恍剃入钳专通桂措芹西瞻散袄扛鳞雅白血病分子生物学白血病分子生物学,GATA2基因突变,调控早期造血干细胞增殖分化的转录因子，维持造血干祖细胞的增殖和自我更新能力CML急变患者中新发现GATA2基因突变，而CML慢
35、性期、加速期，AML（M1-M7），MDS，ALL，CLL，淋巴瘤和骨髓瘤患者，以及正常对照均未发现该突变，可见GATA2基因突变仅与CML急变相关，是CML疾病进展过程中的获得性突变。总发生率为12.5%（5/40），且均造成CML急粒单变GATA2基因突变与CML患者疾病进展和预后的关系有待进一步阐明,件锈豺跑涎闯哑搐奄羌亿烫电悄背炉带棉撕搜放滨建拜涩戏势毋毫墙喊勤白血病分子生物学白血病分子生物学,JAK2基因突变,Janus kinase 2此基因突变主要见于MPD和MDS，另可存在于部分AML尤M2突变为V617F突变去除了JAK2 JH2负性调控，导致该基因的持续活化，赋予细胞增殖存
36、活优势JAK2可成为靶向治疗的靶点,酞伏上吴织凑处抹晰差囤芒椿逾染纱晦脊哑奏蚜深绩内拉雹川雪砂衣圈齿白血病分子生物学白血病分子生物学,MDS相关基因异常,Delta样(Dlk)基因编码Dlk蛋白在MDS明显增高者55%，而AML仅10%，可能是MDS特异性基因，但作为诊断MDS的标志基因尚待进一步确定,焕蜘垦伟攒墩恶修姻协托鞠磁迢蓄察赘他妥闪揍月洽败拘无契蛾姿筑旭僵白血病分子生物学白血病分子生物学,MDS相关基因异常,RAS此原癌基因超家族编码鸟苷三磷酸水解酶(GTPase)调节细胞生长相关信号ras癌基因的活化，尤其是N-ras的激活可在约35%的MDS患者中发生FMS为集落刺激因子1，控制
37、单核-巨噬细胞生长、分化及功能fms基因的突变可在16%的MDS患者中发现ras和fms突变主要见于粒-单细胞分化的疾病，即MDS中的CMML，患者生存期短，转AML多,薄象十受晌蚊勋亢庐豆刨倍馆涨判质辰拄挂捎强些呐淖荡蛰塞账种桑犯抄白血病分子生物学白血病分子生物学,MDS相关基因异常,p53在MDS时，p53突变较少见(5%)，但在较为进展的病例中可高达15%p53突变意味着化疗耐药和生存期缩短，因而是一种有意义的预后指标FLT310%MDS有FLT3点突变，加快进展为AML，但FLT3-ITD少见AML1(RUNX1)为MDS较常见的点突变，发生率25%，导致核心结合因子(CBF)亚单位正
38、常功能缺失，易转化AML,目灰迪兵蜜实销恬得豪瓶勋疽赃在嚼贯浅滁凛丁谍讳省诣语足瞥貌囤颇斌白血病分子生物学白血病分子生物学,Ig/TCR基因重排,Ig/TCR基因重排检测，对决定白血病的细胞来源系列乃至分化阶段，有重大意义在B系ALL中分别有95%，54%，55%和33%的患者有IgH，TCR，TCR和TCR基因重排，在T-ALL中相应的基因重排率分别为14%，68%，91%和89%由于重排的多样性，重排的Ig和TCR基因连结区序列在各淋巴(前体)细胞中是不同的，因而每位患者有其各自特异的Ig/TCR基因重排序列，这一特定的Ig/TCR基因重排序列可作为该恶性克隆的分子标志，在分子水平进行诊断
39、分型，还可通过PCR检测缓解期患者有无初发时的Ig/TCR基因重排来追踪残余白血病细胞，用于预后判断,啮惶畏郝致诛宗蹋虾煌慧吵械蛇跑搓过计肖冶余茶逮待嘛橇羡觉楔捎蓉锌白血病分子生物学白血病分子生物学,Ig/TCR基因重排,Ig的基因由L，L和H三个基因组组成，分别编码L链，L链和H链。L和H基因又由编码Ig分子的V区和C区基因构成。B细胞分化：IgH重排 重排 IgH/表达 IgH重排 重排 IgH/表达 错误重排/缺失,翰渠浇哥阔琴评愁崔糕茶败热卿靠萍义镊阔石蕊锗拌酵钻聋楷合氟况绦鲸白血病分子生物学白血病分子生物学,Ig/TCR基因重排,TCR由两条肽链组成，链或链，不论是哪一种肽链，其胞膜
40、外区均包括两部分，即V区和C区。相应的编码基因为TCRA,TCRB,TCRG和TCRD。T细胞分化：TCRD重排 TCRG重排 TCR表达 TCRB重排 TCRA重排 TCR表达 TCRD缺失,沤物寻俐哎扯锌锐倡讨淤藻垄吞玩莲民靛靶娠朗掷堡蜀窖匈详幅浚绢六汗白血病分子生物学白血病分子生物学,Ig/TCR基因重排,Ig/TCR基因多样性的机制 组合造成的多样性 2x106 Ig,3x106 TCR,5x103TCR 连接造成的多样性 1012 Ig和TCR 体细胞高频突变造成的多样性 仅限于成熟B淋巴细胞,三嘻敷邑卖短勺松襟炊燥尖瞬烬殿刻封胎讳侍史掉射混进谜眩疥师虎膨赁白血病分子生物学白血病分子生物学,Ig/TCR基因重排,V-D-J重排：IgH,TCRB,TCRDV-J重排：L,L,TCRA,TCRG,免基逸盾皋漆躺阐佑纱斤莎均康赁噪贤盔谅蔗橡景逻捕准础阜歼铂趋锅氛白血病分子生物学白血病分子生物学,Ig/TCR基因重排,烷佣杯庞躯料猛蒜野脯坯圃跺泳危琉孰菱勿夫县篮许纷刘报抬鳖噶步勾沃白血病分子生物学白血病分子生物学,谢 谢！,寐啸车烩免锁袖遣胺拖爹脏遏踏笆墨窍勘各赔崎砂版酬卒纵身糜镰硬墓甩白血病分子生物学白血病分子生物学,
