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1、教学目标：1简述动物细胞培养的过程、条件及应用。2简述通过动物体细胞核移植技术克隆动物的过程和应用前景。3举例说出动物细胞融合与单克隆抗体的原理和应用。教学重点和难点：1动物细胞培养的过程及条件。2用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程。3单克隆抗体的制备和应用。,引入新课,1970年，有两位科学家做了一个人鼠细胞融合实验，以证明细胞膜上的蛋白质分子是运动的。那么，如何实现人鼠细胞的融合，以及动物细胞融合后还有什么用途呢？这就是今天我们这节课学习的内容。,温故知新,1植物体细胞杂交的过程是怎样的？2动物细胞和植物细胞有何不同？无细胞壁、无明显的液泡、无质体全能性受限制，不能发育成杂种动物,植物体
2、细胞杂交的过程,去细胞壁,纤维素酶、果胶酶,筛选,一、动物细胞融合（细胞杂交）,1、概念：,指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。,2、结果：,形成单核的杂交细胞,学习新课,2、动植物细胞在结构上有何区别？这与它们杂交或融合过程有什么影响？,3、植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？,离心、振动、电激等物理方法；PEG等化学方法,动物细胞无细胞壁，动物细胞融合过程中不须去除细胞壁和再生出细胞壁。,、植物体细胞杂交最终得到的是完整的植物个体，动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗？,讨论,不能，只能得到杂交细胞,4、动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还有其他方法吗？,能，还可以利用灭
3、活的病毒（生物方法）进行诱导,、动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理是否相同？,讨论,相同，都是细胞膜的流动性,6、为什么要用灭活的病毒？,病毒一般对生物体是有伤害的。,7、动物细胞融合有什么意义？,突破了有性杂交方法的局限，使远源杂交成为可能。,仙台病毒,物理或化学方法,丧失感染活性,保留融合活性,3、原理：,细胞膜的流动性,4、诱导方式,物理法：离心、振动、电激,化学法：聚乙二醇（PEG),生物法：灭活的病毒,灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面,细胞膜被病毒颗粒穿通,细胞膜连接,细胞融合，形成杂种细胞（细胞膜具有一定的流动性）,生物法：,灭活的病毒,（丧失感染性、保留抗原结构）,5、过程：,
4、6、动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较：,7、意义及用途打破生殖隔离，使远缘杂交成为可能；广泛应用多个学科领域；重要用途：制备单克隆抗体。,1 抗体是由何种细胞产生的？2 抗体是如何产生的？,二、单克隆抗体,3 传统的抗体的生产方法及缺陷是什么？,产量低、纯度低；而且制备抗体特异性差。,4 B淋巴细胞与抗体的关系,B淋巴细胞受抗原刺激后，可以产生特异性抗体。动物在免疫反应过程中，体内产生特异性抗体种类可 达百万种以上，每种抗体对特定的抗原具有特异性免疫作用。但每一个淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。.在体外，一个淋巴细胞是不可能无限增殖的。,（一）、单克隆抗体的概念,由单个B淋巴细胞经过无性繁殖（
5、克隆），形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。,（二）、单克隆抗体的制备,1、设计方案：,创始人：米尔斯坦,一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体骨髓瘤细胞（癌细胞）能无限增殖,杂种细胞,动物细胞培养技术,动物细胞融合,单克隆抗体,既能产生特异性抗体，又能大量繁殖,1、设计方案：,动物细胞融合技术,B、BB、B瘤、瘤瘤、瘤,只有杂种细胞才能活,动物细胞培养,2.单克隆抗体制备过程,获得产生相应抗体的B淋巴细胞,思考：对小鼠做何处理？细胞融合后，培养液中共有几种细胞？有几种融合细胞？杂交瘤细胞的特点：既能大量，又能产生。产生抗体的杂交瘤细胞如何筛选出来
6、的？,注射特定的抗原蛋白,五种（B淋巴细胞、骨髓瘤细胞、B-B、骨骨、杂交瘤细胞）其中三种融合细胞。,繁殖,专一的抗体,抑制骨髓瘤细胞的DNA复制。,与常规抗体相比，单克隆抗体特异性强，灵敏度高，产量高，优越性十分明显。,应用：,特点：,可用于作为诊断试剂：有准确，高效，快速的优点可用于疾病治疗可用于运载药物（作为运载对应疾病的药物的“生物导弹”）“生物导弹”单克隆抗体药物,（三）单克隆抗体的应用,两个过程,动物细胞培养过程,单克隆抗体制备过程,三个“一”,一个诱导细胞融合的新方法 灭活病毒,一个新细胞杂交瘤细胞,一个优势单克隆抗体特异性强、灵敏度高的优势,小结,右图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌抗体的实验方案。据图回答：（1）该方案能达到预期效果吗？。原因是。（2）图中为过程，常用_ 作为诱导剂。该细胞继承了，因此不仅能分泌，还有_ 本领。（3）该方案的目的是。,不能,没有将抗原注入小鼠体内，无法获得产生单一抗体的B淋巴细胞.,细胞融合,灭活病毒,双亲细胞的遗传物质,特异性抗体,在体外培养条件下大量增殖,制备单克隆抗体,练习,作业,1.植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术有什么不同？2.制备单克隆抗体时，为什么要选用B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞？,谢谢！,
