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1、Liver Metastasis of Lung Cancer,主要内容,一、概述二、侵袭、转移的定义三、癌转移的条件及特点四、肿瘤转移过程五、肿瘤转移的分子机制,什么是转移？,肿瘤侵袭（Invasion)是指恶性肿瘤细胞离开原发灶而侵犯邻近组织并继续增殖的过程。,肿瘤细胞的增殖肿瘤从原发灶脱离E-钙粘连素下降肿瘤细胞的运动性和趋化性血管生成与肿瘤侵袭,侵袭包括四个过程,肿瘤细胞的增殖,Ki67是一种增殖相关核抗原，检测其表达能特异性识别增殖的肿瘤或正常细胞。反映细胞增殖活性的Ki 67指数(Ki67 LI)可作为判断肿瘤生长速度的指标。研究发现，传统的反映肿瘤侵袭能力的形态学标志(如核多形性
2、、细胞不典型性和有丝分裂活跃等)，与垂体腺瘤增殖和侵袭性相关性较低。而肿瘤生长速度则被认为是反映垂体腺瘤侵袭性的客观指标这与其具有高增殖性及高侵袭性有关。本实验应用腺病毒作为载体介导抑癌基因PTEN体外转染人脑胶质瘤细胞U87，检测其细胞增殖力与体外侵袭力的改变，进而探讨PTEN作为胶质瘤基因治疗靶点的可能性。,是恶性肿瘤细胞脱离原发部位，通过各种渠道转运到不连续的靶组织中继续增殖，形成同样性质肿瘤的过程。,远隔部位继发瘤形成继发瘤继续生长继发瘤再侵袭转移,肿瘤转移(Metastasis),人类对肿瘤侵袭转移的认识肿瘤是高度异质性的细胞群体转移是一个多步骤、序贯的复杂过程 转移的发生是多因素相
3、互作用的结果（Fidler,IJ Surgical Oncology Clinics of North America.2001，10（2）：257-269）,转移有什么特点？,肿瘤转移特点,1.不同肿瘤其转移能力有差异 低转移 基底细胞癌、脊髓瘤、唾液腺腺样囊性癌、软骨肉瘤、,高转移 甲状腺滤泡型腺癌、黑色素瘤,2.不同类型肿瘤其转移途径不同淋巴道转移 癌 如肺癌、NPC,血道转移 肉瘤、绒癌、肾癌 前列腺癌等,3.转移的器官特异性,原发瘤,转移器官,乳腺癌 骨、脑、肾上腺前列腺癌 骨肺小细胞癌 骨、脑、肝甲状腺癌 骨肾癌 骨、肝、甲状腺膀胱癌 脑睾丸癌 肝,“Seed and Soil”t
4、heory By Paget S.The distribution of secondary growth in cancer of the breastLancet,1889Seed:tumor cell with metastatic potential Soil:microenviroment,转移器官特异性的机制,(1)肿瘤细胞表型的差异-异质性表现细胞表面糖蛋白复合物、抗原、酶活性、运动能力等如 EGFR(-)/EGFR(+),HEx20,EBERx20,TFCx20,HEx20,EBERx20,TFCx20,NPC65,HEx60,EBERx60,TFCx60,NPC65,（2）组
5、织器官微环境差异实验证明,不同肿瘤移植于相同器官同种肿瘤移植于不同器官,侵袭转移能力有差异,如：部位相同 小鼠胃癌、人食管癌 不同部位 皮下、肌肉和腹腔,继发器官微环境对肿瘤细胞的特殊亲和性,继发器官脉管内皮细胞 及细胞外基质结构 化学趋化因子作用 器官相关的免疫状态 各种生长因子作用,鼻咽癌转移裸鼠模型,肿瘤发生转移 需要哪些条件？,三、肿瘤细胞发生转移的条件及转移特点,（一）转移发生的条件 1.细胞变异转移异质性,瘤细胞遗传不稳定,异质性演进,转移亚克隆优势生长,依据,转移异质性实验依据1977 Fidler,Tissue culture,Spontanousmetastasis,Nine
6、 times,CNE-2Z-H5,本实验室进行裸鼠体内筛选高转移癌株：,2.微环境和机体免疫状态,（1）毗邻细胞 旁分泌各种生长因子，促进肿瘤生长（2）血液流变学改变 表现 血浆粘稠度及 红细胞密度高,（3）机体的免疫反应（4）细胞粘附性改变瘤细胞瘤细胞间粘附力下降瘤细胞细胞外基质(ECM)粘附力增高,肿瘤转移的条件,四、肿瘤转移过程及其影响因素,Fidler,（一）原发瘤的形成与生长 即正常细胞的转化和生长,受血管生成因子和抑制因子 共同调控,（二）肿瘤血管生成 始于肿瘤直径达1-2mm 与宿主血管网互相联系,（三）肿瘤细胞脱落并侵入基质 1.瘤细胞 粘附能力改变,同质型粘附力低 异质性粘附
7、力高,易侵袭转移,细胞粘附力与转移关系,细胞系,同质粘附%,转移率%,LA1 91.29 0LAD 88.5 16LA5 72.5 32 CNE2L4 63 13CNE2L2 92 100,异质粘附%,瘤细胞间桥粒减少瘤细胞表面负电荷增加钙粘蛋白表达水平下降瘤细胞表面受体改变瘤细胞表面纤维连接蛋白减少,有关影响因素,2.瘤细胞表面负电荷增加,实验表明：,细胞系,电泳率,转移率%,MFC-C-64 0.73m/sec/v/cm 7.5MFC-C-38 0.83 m/sec/v/cm 31.4CNE2L4 0.76 m/sec/v/cm 13CNE2L2 1.36 m/sec/v/cm 100,3
8、.瘤细胞运动能力增强,细胞系,36h(m/h),转移率%,LA1 198 0LAD 285 16LA5 316 32 CNE2L4 16.94 13CNE2L2 28.94 100,刺激瘤细胞运动而抑制其生长，如TGF,干扰素等,参与调控肿瘤细胞运动的因子,促进瘤细胞运动与生长，如 EGF,肝细胞生长因子等,刺激肿瘤细胞运动和侵袭的因子，如：自分泌运动因子(AMF),4.瘤细胞产生蛋白水解酶增加,主要包括 血浆纤维蛋白溶解酶原激活物（Plasminogen activators,PA)组织蛋白酶(cathepsins)基质金属蛋白酶(Matrix metalloproteinase,MMPs）
9、,（四）瘤细胞进入脉管系统,新生脉管管壁不完整瘤细胞通过运动、粘附、侵袭血管基底膜而进入脉管,（五）瘤细胞与脉管粘附及瘤栓形成,循环中的瘤细胞互相粘连或与血小板粘附形成瘤栓。瘤细胞通过粘附分子介导与内皮细胞粘附（选择素、整合素及其受体等）但瘤细胞与内皮细胞粘附有异质性,（六）瘤细胞穿出血管,内皮细胞层损伤,内皮下基底膜暴露,瘤细胞粘附,降 解基底膜,瘤细胞运动进入间质,（七）转移灶生长及再侵袭转移,瘤细胞与靶器官的实质细胞粘附瘤细胞和靶器官分泌各种生长因子刺激瘤细胞增殖新生血管形成,微小转移的概念1971年 Huvos 直径2 Fisher直径1.31980年 Black直径小于受累淋巴结的2
10、0%作为标准1993年国际抗癌联盟(UICC)12目前,直径2,肿瘤可转移至淋巴结(包括新鲜淋巴结和石蜡切片)、骨髓、外周血及其他体液等,较多见的取材为淋巴结、骨髓、外周血。,微小转移检测方法细胞学方法 癌细胞数量很少,鉴别良、恶性细胞仍有困难,其特异性和敏感性差,阳性率1%连续切片法 工作量繁重,费时费力 7%33%免疫学方法 抗上皮细胞膜/骨架成份的单克隆抗体检测肺癌、乳腺癌、结肠癌等播散至外周组织中的癌细胞。,微小转移检测方法聚合酶链反应和逆转录聚合酶链反应PCR、RT-PCR 高效率、高灵敏度、高特异性、操作简便,现已能测定组织、体液中的单个癌细胞 诊断特异性尚存在争议定量法 具有更高
11、的特异性和敏感性,微小转移检测方法癌基因直接检测法 肺和6例癌组织均有1基因表达,正常淋巴结无端粒酶活性检测 外周血端粒酶活性,反映血液微转移的情况,是一种潜在的预后指标。,五、肿瘤侵袭转移的分子机制,(一)肿瘤转移的基因表达调控1.癌基因(Oncogenes)研究表明：多种癌基因与转移相关，如 Myc,Mos,Raf,Fos,Ras等,以Ras为例：Ras 家属：N-Ras,K-Ras,H-Ras,体外侵袭,体内转移,提示：H-Ras促进BW5147 侵袭转移,以NIH/3T3细胞为对象的研究还发现：H-Ras 可以改变某些基因表达水平,2.抑癌基因目前已发现的抑癌基因近20种如Rb,P53
12、,P15,P16,APC等。,实验证实：,高转移肺癌细胞系PG,P53wtmRNA低于正常,PCR-SSCP检测p53,CD44v突变情况,P53突变,CD44v6突变,3.转移抑制基因 nm23,发现 Steeg(1988)从小鼠黑色素瘤细胞系中克隆出,蛋白 17KD,与核苷酸二磷酸激酶(NDPK)高度同源,基因 定位17q22,533bp 有两个亚型H1,H2,功能,A.通过与NDPK相似途径参与细 胞分化、信号转导的调控B.影响微管的聚合以调节细胞运动C.影响G蛋白的信号转导过程,A.在多数肿瘤中，nm23-H1表达水平与转移潜能呈负相关 B.在癌转移过程中，出现等位基因 缺失，造成其蛋
13、白功能异常 C.nm23-H2基因常出现点突变，蛋白结构被破坏,与转移的关系,（二）粘附分子与肿瘤转移,1.粘附的类型,细胞间粘附(同质或异质）,细胞与ECM粘附,2.粘附分子的种类与作用（1）整合素(integrins),整合素为跨膜糖蛋白由和两个亚基构成异二聚体 参与不同细胞间及细胞 与细胞外基质粘附 受多种活化因子活化,（2）钙粘蛋白(Cadherin),为跨膜糖蛋白家族 E-CD:上皮组织 P-CD:上皮、胎盘 N-CD:神经组织 基因定位于16q22-q23.1,E-CD 和 Catenin 构成复合体 介导同源细胞粘附 E-CD 的低表达促进多数肿瘤 侵袭转移,主要介导细胞与细胞间
14、粘附 包括ICAM-1、VCAM-1、NCAM等 ICAM-1，VCAM-1过表达，肿瘤侵袭能力强,NCAM 低表达，促进转移,(3)免疫球蛋白类粘附分子,包括 L-选择素 存在于白细胞表面 E-选择素 内皮细胞 P-选择素 参与瘤细胞与血小板粘附,选择素 参与瘤细胞聚集和瘤细胞与特定内皮细胞锚定,(4)选择素（selectins),分标准型(CD44s)和变异型(CD44v)为跨膜蛋白，细胞内部分与细胞骨架相连，膜外部分与透明质酸(HA)等配体作用,（5）CD44分子,介导细胞与细胞、细胞与ECM 之间粘附，为淋巴细胞的归巢受体 具有信号转导作用 通过影响细胞粘附、运动和胞外基质降解而参与肿
15、瘤转移,(三)肿瘤血管生成与转移,1.血管生成的过程 血管内皮基底膜降解 内皮细胞向肿瘤组织迁移 内皮细胞增殖 管腔及血管网形成 形成新基底膜,Fig 4-14,Cancer cells disseminate to remote organs via blood stream,x,Function of tumor vessels,Supply tumors with oxygen,nutrients and growth factorsTransport of CO2 and toxic components away from the tissueMediate tumor metast
16、asis,2.肿瘤血管生成的调节,促进因子,纤维母细胞生长因子(bFGF)干扰素(INF-,)血管内皮细胞生长因子(VEGF)转化生长因子(TGF)转化生长因子(TGF-)血小板因子4TNF PAI PA TIMPsPDEGF MMPs IL-8,抑制因子,低氧诱导VEGF mRNA表达(RT-PCR),Isoforms Folds s VEGF189 2.670.30(P0.05)VEGF165 2.050.03(P0.01)VEGF145 2.730.15(P0.05)VEGF121 1.650.01(P0.05),低氧诱导VEGF 蛋白表达(Western-Blot),VEGF in h
17、ypoxic cells was(2.200.07)-fold of that in normoxic cells.*Independent Samples T-Test:t=8.944,P0.05,（四）蛋白水解酶与肿瘤转移,1.纤维蛋白溶解酶原激活剂及其抑制剂(PA and PAI)(1)PA的分类与功能 分组织型(t-PA)和尿激酶型(u-PA),不同的基因产物，结构相似，即单链丝氨酸蛋白酶 参与肿瘤侵袭转移过程，包括细胞分化、血管生成、细胞迁移、基质降解等,图1 uPA在鼻咽癌细胞中的表达,图2 各鼻咽癌细胞RT-PCR结果uPA mRNA与GAPDH mRNA灰度比值,图3 uPAR
18、 mRNA在鼻咽癌细胞中的表达,图4 各鼻咽癌细胞RT-PCR uPAR mRNA结果与GAPDH mRNA灰度比值,CNE-2Z H5 H5-9,60KD55KD,Western Blot检测 uPAR在CNE-2Z,H5,H5-9中的表达,图5 PAI-1 mRNA在鼻咽癌细胞中的表达,包括PAI-1,2,3 PAI-1为糖蛋白，52KD,PAI-2分子量46.6KD,为u-PA抑制剂 在多数肿瘤中高表达，提示 预后好,(2)PAI的分类与功能,图6 各鼻咽癌细胞RT-PCR结果PAI-1mRNA与GAPDHmRNA灰度比值,(1)分类与结构 为Zn依赖的内肽酶，包括 胶原酶(collag
19、enase)明胶酶(gelatinase)基质溶素(tromitysinase)膜型MMP(MT-MMPs),2.基质金属蛋白酶及其抑制剂(MMPs/TIMPs),能降解ECM中所有成分 诱导和促进新生血管形成 调节瘤细胞的粘附细胞外基质（ECM）胶原蛋白、弹性蛋白、糖蛋白、蛋白多糖,免疫组化检测鼻咽癌组织中MMP-2,MMP-9,LMP-1的表达情况,LMP1MMP-2MMP-9,（五）机体免疫与转移,（1）NK细胞 为第一道防线，无需抗原刺激可杀伤瘤细胞 依据,1.参与控制转移的免疫细胞,小鼠,环磷酰胺,清除NK细胞,移植肿瘤于小鼠,转移早,裸小鼠,T细胞缺陷，NK细胞存在,移植肿瘤于小鼠
20、,转移率相对低,（2）巨噬细胞 其活性与转移抑制能力呈正相关实验表明,巨噬细胞抑制剂,促进转移,巨噬细胞激活剂,减少转移,（3）T细胞,Ts细胞 促进肿瘤生长与转移Th细胞 增强杀伤T细胞的作用杀伤T细胞 抑制和杀伤瘤细胞,问题与展望：,转移各步骤和不同微环境中癌细胞基因表达谱变化尚难确定各信号转导通路之间形成的交叉对话(Cross-talking)机制有待阐明肿瘤临床诊断、疗效评价及预后判断的敏感标记物有待确定。高通量技术平台的建立将为肿瘤转移研究带来新的希望,一、肿瘤侵袭转移的分子机制（续）,（二）粘附分子与肿瘤转移,1.粘附的类型,细胞间粘附(同质或异质）,细胞与ECM粘附,2.粘附分子
21、的种类与作用（1）整合素(integrins),整合素为跨膜糖蛋白 参与不同细胞间及细胞 与细胞外基质粘附 受多种活化因子活化,（2）钙粘蛋白(Cadherin),为跨膜糖蛋白家族 E-CD:上皮组织 P-CD:上皮、胎盘 N-CD:神经组织 基因定位于16q22-q23.1,E-CD 和 Catenin 构成复合体 介导同源细胞粘附 E-CD 的低表达促进多数肿瘤 侵袭转移,主要介导细胞与细胞间粘附 包括ICAM-1、VCAM-1、NCAM等。ICAM-1，VCAM-1过表达，肿瘤侵袭能力强。,NCAM 低表达，促进转移。,(3)免疫球蛋白类粘附分子,包括 L-选择素 存在于白细胞表面。E-
22、选择素 内皮细胞 P-选择素 参与瘤细胞与血小板粘附,选择素 参与瘤细胞聚集和瘤细胞与特定内皮细胞锚定。,(4)选择素（selectins),(三)肿瘤血管生成与转移,1.血管生成的过程 血管内皮基底膜降解 内皮细胞向肿瘤组织迁移 内皮细胞增殖 管腔及血管网形成 形成新基底膜,Fig 4-14,Cancer cells disseminate to remote organs via blood stream,x,Function of tumor vessels,Supply tumors with oxygen,nutrients and growth factorsTransport o
23、f CO2 and toxic components away from the tissueMediate tumor metastasis,2.肿瘤血管生成的调节,促进因子,纤维母细胞生长因子(bFGF)干扰素(INF-,)血管内皮细胞生长因子(VEGF)转化生长因子(TGF)转化生长因子(TGF-)血小板因子4TNF PAI PA TIMPsPDEGF MMPs IL-8,抑制因子,低氧诱导VEGF mRNA表达(RT-PCR),Isoforms Folds s VEGF189 2.670.30(P0.05)VEGF165 2.050.03(P0.01)VEGF145 2.730.15(
24、P0.05)VEGF121 1.650.01(P0.05),低氧诱导VEGF 蛋白表达(Western-Blot),VEGF in hypoxic cells was(2.200.07)-fold of that in normoxic cells.*Independent Samples T-Test:t=8.944,P0.05,（四）蛋白水解酶与肿瘤转移,1.纤维蛋白溶解酶原激活剂及其抑制剂(PA and PAI)(1)PA的分类与功能 分组织型(t-PA)和尿激酶型(u-PA),为不同的基因产物，结构相似，单链丝氨酸蛋白酶。参与肿瘤侵袭转移过程，包括细胞分化、血管生成、细胞迁移、基质降解
25、等。,图1 uPA在鼻咽癌细胞中的表达,图2 各鼻咽癌细胞RT-PCR结果uPA mRNA与GAPDH mRNA灰度比值,包括PAI-1,2,3 PAI-1为糖蛋白，52KD,PAI-2分子量46.6KD,为u-PA抑制剂 在多数肿瘤中高表达，提示 预后好。,(2)PAI的分类与功能,图5 PAI-1 mRNA在鼻咽癌细胞中的表达,图6 各鼻咽癌细胞RT-PCR结果PAI-1 mRNA与GAPDHmRNA灰度比值,(1)分类与结构 为Zn依赖的内肽酶，包括 胶原酶(collagenase)明胶酶(gelatinase)基质溶素(tromitysinase)膜型MMP(MT-MMPs),2.基质
26、金属蛋白酶及其抑制剂(MMPs/TIMPs),能降解ECM中所有成份。诱导和促进新生血管形成。调节瘤细胞的粘附。,免疫组化检测鼻咽癌组织中MMP-2,MMP-9,LMP-1的表达情况,慢性鼻咽炎鼻咽癌淋巴结转移癌,MMP-2,MMP-9,（五）机体免疫与转移,（1）NK细胞 为第一道防线，无需抗原刺激 可杀伤瘤细胞。实验依据：,1、参与控制转移的免疫细胞,先天无NK Bejge 小鼠转移早,（2）巨噬细胞 其活性与转移抑制能力呈正相关实验表明：,巨噬细胞抑制剂,促进转移,巨噬细胞激活剂,减少转移,（3）T细胞,Ts细胞 促进肿瘤生长与转移Th细胞 增强杀伤T细胞的作用杀伤T细胞 抑制和杀伤瘤细
27、胞,问题与展望：,转移各步骤和不同微环境中癌细胞基因表达谱变化尚难确定。肿瘤临床诊断、疗效评价及预后判断的敏感标记物有待确定。高通量技术平台的建立将为肿瘤转移研究带来新的希望。,策略针对肿瘤细胞（严打：应用各种细胞毒药物）针对瘤细胞生存微环境（整治环境）,二、抗转移治疗的新策略,抗转移治疗的新方法,1.抑制肿瘤血管生成 即针对肿瘤血管形成的某些因子及其关键步骤进行干预,抑制血管内皮细胞活化类药物，如RhuMAb VEGF，FLK-1(DC101),(2)抑制血管内皮细胞的分裂与 迁移,如Angiostatin(血管抑素），endostatin（内皮抑素），TNP-470(3)抑制基底膜或细胞外
28、基质降解类药物(4)封闭整合素功能类药物,2.细胞粘附分子抑制剂与抗转移（1）阻止粘附信号的传递 蛋白酪氨酸激酶(PTK)抑制剂（Genistein),（3）增强E-cadherin介导的同质粘附,（2）抑制Integrins 依赖性的粘附 如 环孢霉素等,3.蛋白酶抑制剂的应用,（1）MMPs抑制剂 a.Batimastat 为人工合成的小分子MMP 抑制剂，能与MMP活性基 团结合，能抑制MMP-2,9等,b.Marimastas 为第二代人工合成MMP抑制剂，副作用小，病人耐受好等，能抑制多种MMP活性,（2）uPA 抑制剂如抗uPA抗体及多肽,4.基因治疗,1.定义 基因治疗 将正常的
29、外源基因导入生物体或人体靶细胞内以弥补所缺失的基因、或关闭、降低异常表达的基因，以达到治疗疾病的目的。,增强宿主抗癌免疫 恢复或增强抑癌基因的功能 阻断癌基因 增强化疗和放疗敏感性 细胞基因杀伤效应,2.肿瘤转移基因治疗的策略,3.基因治疗的途径,1.ex vivo 途径:将人体细胞从体内取出,基因改造,再移植到人体中.自体,同种异体,异种细胞,同种异体或异种组织和器官等.2.in vivo 途径:直接将基因转移到人体中,如DNA注射,口服,喷雾等.有如普通治疗药物,商业化发展方向所在.,基因治疗的ex vivo 途径,基因治疗就与打针和吃药一样.,基因治疗的in vivo 途径,举例,nm2
30、3 gene,TIMP gene,转染,高转移癌细胞,转移能力降低,三、肿瘤侵袭转移研究的基本策略与技术,（一）研究策略整体水平：人癌动物模型自发性癌症动物模型诱发性癌症动物模型可移植性癌症动物模型（裸鼠，SCID小鼠）转基因癌症动物模型细胞水平（细胞培养、杂交瘤技术等）,裸小鼠特征：外观无毛，裸体，皮肤薄，发育迟缓。无胸腺T细胞功能欠缺无细胞毒效应，无移植排斥成年鼠NK细胞活性增加抵抗力低11号染色体突变,SCID小鼠特征(Severe Combined Immune Deficency)外观正常16号染色体突变，T、B缺陷免疫学特征为T、B细胞明显减少,细胞水平（细胞培养技术等）组织水平研
31、究分子水平研究染色体水平DNA水平RNA水平蛋白水平,（二）高通量技术在肿瘤研究中的应用,1.常用分子生物学技术的应用 重组DNA技术PCR,RT-PCR,PCR-SSCPSouthern blot,Northern blotWestern blot,2.高通量技术的应用,染色体、DNA水平(Genomics):比较基因组杂交(CGH)RNA水平(Transcriptomics):差异显示(DD-PCR),抑制消减杂交(SSH)，基因表达系列分析(SAGE),基因芯片(cDNA array).蛋白质水平(Proteomics):2-D gels,比较基因组杂交(Comparative Geno
32、mic Hybridization,CGH),CGH 原理：将两种不同荧光标记的基因组DNA等比例与正常分裂中期染色体竞争杂交，分析每条染色体上荧光强度比率，推测待检DNA拷贝数变化。,基本方法：正常中期染色体制备基因组DNA分离DNA标记杂交和染色荧光镜检和图象分析,Tissue Microdissectionequipments,Tissue MicrodissectionAnalysis of single cell by immunohistochemical stain(p53),V.Sequence analysis to detect mutations,IV.Stimulate
33、d PCR from single cells,III.Microdissection of stained single cells,II.p53 Immunohistochemical staining,I.Ethanol fixation/paraffin embedding,Breast,Colon,Laser Capture Microdissection(LCM),应用：确定肿瘤染色体区DNA扩增与丢失对肿瘤进行分期与分级诊断与鉴别诊断预后与治疗反应,RNA水平(Transcriptomics)研究,差异显示(Differential display PCR,DD-PCR)原理：基
34、因差异表达用oligo-dT引导逆转录，再用随机引物和逆转录（锚定引物）扩增cDNA片段，PAGE胶分离，比较胶上差异条带识别差异表达基因。,操作步骤,样品RNA分离反转录成cDANPCR扩增电泳结果分析,DD-PCR,SSH,抑制削减杂交(SSH),样品1,样品2,基因芯片,原理与操作步骤在固相支持物上合成/印迹探针阵列样品（DNA/mRNA）标记样品与芯片杂交激光扫描、计算机分析表达谱,蛋白质组技术（Proteomics)表达蛋白质组学和功能蛋白质组学,蛋白质双向电泳（2-D gel)图像采集与计算机分析质谱技术蛋白质芯片技术,2-D gels,Protein arrays,Summary
35、:,Tumor samples,Nature is beautiful,Research is fascinating,主要参考文献,1.曾益新主编，肿瘤学，人民卫生出 版社：1999，第一版2.汤钊猷主编，现代肿瘤学，上海医 科大学出版社,2001，第二版3.陈意生等主编,肿瘤分子细胞生物学,人民军医出版社：2002，第一版,3、高进主编，癌的侵袭与转移基础研究与临床，北京医科大学中国协和医科大学出版社，1996，第一版4、鄂 征主编，癌变机理研究，北京出版社，1999，第一版,5、近期有关肿瘤研究新文献 Cancer,Cancer Research Nature,Science 国外医学.肿瘤学分册.分子生物学分册.生理病理科学与临床分册癌症,中华肿瘤杂志等等。,
