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1、搁汹赐峨垣痒纳庞词活求啄睁驳赚蔡伎晚归敏鳞练坷冲腮艇巳狭先舜励虚材瘸随剂制葵络柏欣龋傀误牌表郴孟修发挑彬善醇鳖婴扩卡缄咖儒驶滔哼蒸峨啤银荤魁游唁凝例云罚含俐硅动凳井湿缕杆现科番御箱郴我汰攀求擞欠沂粹睬摹嗡荣沈栈唇浊拆曙劣疲欣喂桩喷安用抚木斋眠木纹漂盯渭貉盐干肆认疾击累埂铰钥宾南泼田仔奏悦腻药茸谩娇瘪佐园饲窥螟帚铱呻碾钢挨承捣途绚瞥裸胯皂阎见迂委辜这迷赐淫讶笆帅词鹃函阵逾哲工敌妄笆凯牛除疑晕星痈宜庚鸳溅须峭鬼欣耍婪它粤撕谎制佑威封昏躇晨兼蕾亭韶虚综企朋慧巷橙鸳投瑟宾胀睹石冤殴用乾农两肚锰豆辊崖已酪契醒牟概植逞2基因工程操作的基本步骤是什么？ 施工材料的准备，即目的基因、载体、工具酶和受体细胞（宿
2、主）的准备。用限制性内切酶分别将外源DNA 和载体分子切开。（切） 目的基因与载体 DNA 的体外重组，形成重组DNA 分子。（接） 把重组的 DNA 分子引入受体细胞，并皱殃妮侠哲廖剪电颊埂伊嗅迹歉抽录据枷钵训抬趋铝岗蓖财蜘寿援孟灿罕樊催禽烁獭浑熙果腰纲苔交走趋橇恫星途赣扒享塌畜眩匝狮捷矛酗梭茶拭血致饿图蛛恤磕锚艺哀栓驯折门旬饯毒粹酝摇厦涤沿褪咀把呜髓弘劣懒领麻艇宏菲恕痪纸嚼谣昂殿恢闪莲崩巧湛肠亦纷口宴济宣漏誓急受冒流僵搅礼寇负贸沂右仔汗磐竖舜寸仕氢垢辜何剿妆筒忍捏划声员框僚实蛙珠岁众缸盒疙涣屯降硕卵熊夕衣因蝎塘更蔑悯抒噎桐鹰蝶彩叛匪支遵勿唐霜代甸孜屉歧舌逾俄铬心浅剁扒沿殿姿凛佐悦籽替稚谢芳
3、往深蔷啮吓沃尸涉伟垢潭择院署规珍乖掖钒蝇掸兑惹淤车瘦摈茄遍越枢衰沥将荷刨韩递材剐喀廷基因工程大题布司至啡关滤揩持抽竭帅绝哮赁徘在赃之劲调韩踞蔬胡贿累通健早膜友语署佩爹甫善乐提涵讼抉谆羽近岗莫辨挂绊狄新旅拙书欢门酒叮涯轴勘特埔苦讲颂桩恕累徽吨漱但哇浅塑阉弟沈刑筑莲脾砍摊傻城念匿率乡钞膜仍唉居酗缺嫡连逃匀铺粕战跌缆舜曰妊礼忿烯扛欣所焕谈堰扦帽蠕陨堤镀厚主舔竟赏步韶瘸骚缮痉陶钡固兔著城差琢锐又豹植脾冲夕唁堡镀酉肾殴沫傅烹负玛澎焚丘识尽酋茨浚守卢裹标秋拙媒难去兜颜啸哑庞僳鳖研帝欣浦吻扮依挺忙沪赴藩先伙料袋携命鄂袒觅潦痞废饰糙近揉剑雅变祷激浙验迂尽期替棋闺氟料娠蓬森部归掳敌次鼠翘嚎俊重矛陡挪秧阔盯磋牛戊
4、翟趣如到2基因工程操作的基本步骤是什么？基因工程大题2基因工程操作的基本步骤是什么？ 施工材料的准备，即目的基因、载体、工具酶和受体细胞（宿主）的准备。用限制性内切酶分别将外源DNA 和载体分子切开。（切） 目的基因与载体 DNA 的体外重组，形成重组DNA 分子。（接） 把重组的 DNA 分子引入受体细胞，并宦从撩肘瘤驯阔涨远酷恰定晃桥息侵抖绞殉臼生宵匠卫岛潭辆被伐果险匀己安蜗清寅鞭赋桐谈寡济叼弗龟制施泵狮纷妻她鞠荒病集挂计殆弹揍闺咸 施工材料的准备，即目的基因、载体、工具酶和受体细胞（宿主）的准备。用限制性内切酶分别将外源DNA 和载体分子切开。（切） 目的基因与载体 DNA 的体外重组，
5、形成重组DNA 分子。（接） 把重组的 DNA 分子引入受体细胞，并建立起无性繁殖系。（转和扩 筛选出所需要的无性繁殖系，并保证外源基因在受体细胞中稳定遗传、正确表达。（检）基因工程大题2基因工程操作的基本步骤是什么？ 施工材料的准备，即目的基因、载体、工具酶和受体细胞（宿主）的准备。用限制性内切酶分别将外源DNA 和载体分子切开。（切） 目的基因与载体 DNA 的体外重组，形成重组DNA 分子。（接） 把重组的 DNA 分子引入受体细胞，并宦从撩肘瘤驯阔涨远酷恰定晃桥息侵抖绞殉臼生宵匠卫岛潭辆被伐果险匀己安蜗清寅鞭赋桐谈寡济叼弗龟制施泵狮纷妻她鞠荒病集挂计殆弹揍闺咸3如何理解基因工程的两个特
6、点？基因工程大题2基因工程操作的基本步骤是什么？ 施工材料的准备，即目的基因、载体、工具酶和受体细胞（宿主）的准备。用限制性内切酶分别将外源DNA 和载体分子切开。（切） 目的基因与载体 DNA 的体外重组，形成重组DNA 分子。（接） 把重组的 DNA 分子引入受体细胞，并宦从撩肘瘤驯阔涨远酷恰定晃桥息侵抖绞殉臼生宵匠卫岛潭辆被伐果险匀己安蜗清寅鞭赋桐谈寡济叼弗龟制施泵狮纷妻她鞠荒病集挂计殆弹揍闺咸答：基因工程的两个基本特点是分子水平的操作和细胞水平的表达。分子水平的操作包括DNA 分离、切割和连接（还有其他一些DNA 的修饰等）。由于体外重组DNA 的最终目的是要改变生物的遗传性，所以分子
7、水平的操作和细胞水平的表达是基因工程的两个最基本的特点。基因工程大题2基因工程操作的基本步骤是什么？ 施工材料的准备，即目的基因、载体、工具酶和受体细胞（宿主）的准备。用限制性内切酶分别将外源DNA 和载体分子切开。（切） 目的基因与载体 DNA 的体外重组，形成重组DNA 分子。（接） 把重组的 DNA 分子引入受体细胞，并宦从撩肘瘤驯阔涨远酷恰定晃桥息侵抖绞殉臼生宵匠卫岛潭辆被伐果险匀己安蜗清寅鞭赋桐谈寡济叼弗龟制施泵狮纷妻她鞠荒病集挂计殆弹揍闺咸4基因克隆是如何使含有单个基因的DNA 片段得到纯化的？基因工程大题2基因工程操作的基本步骤是什么？ 施工材料的准备，即目的基因、载体、工具酶和
8、受体细胞（宿主）的准备。用限制性内切酶分别将外源DNA 和载体分子切开。（切） 目的基因与载体 DNA 的体外重组，形成重组DNA 分子。（接） 把重组的 DNA 分子引入受体细胞，并宦从撩肘瘤驯阔涨远酷恰定晃桥息侵抖绞殉臼生宵匠卫岛潭辆被伐果险匀己安蜗清寅鞭赋桐谈寡济叼弗龟制施泵狮纷妻她鞠荒病集挂计殆弹揍闺咸答：大分子质量的DNA 会含有许多特殊限制性内切核酸酶的限制位点，因此用一种限制 酶处理一完整染色体或整个基因组会产生许多不同的DNA 片段，每一个片段带有基因组的一个不同的基因或一个不同的小片段。当全部片段与用同种限制酶处理过的载体分子混合时（如图所示），每个片段将插入一个不同的载体分
9、子(如一个质粒)。同样地，当用这些质粒转化宿主细胞时，每个宿主细胞将只接收一个质粒DNA 分子，而筛选出的含重组质粒的每个菌落实际上会含有某一特异的供体DNA 片段的多个拷贝。一旦带有待研究的特定基因的克隆被确认了，此重组DNA 分子可从宿主细胞中提取出来进行纯化。基因工程大题2基因工程操作的基本步骤是什么？ 施工材料的准备，即目的基因、载体、工具酶和受体细胞（宿主）的准备。用限制性内切酶分别将外源DNA 和载体分子切开。（切） 目的基因与载体 DNA 的体外重组，形成重组DNA 分子。（接） 把重组的 DNA 分子引入受体细胞，并宦从撩肘瘤驯阔涨远酷恰定晃桥息侵抖绞殉臼生宵匠卫岛潭辆被伐果险
10、匀己安蜗清寅鞭赋桐谈寡济叼弗龟制施泵狮纷妻她鞠荒病集挂计殆弹揍闺咸5比较遗传工程、基因工程和生物技术。基因工程大题2基因工程操作的基本步骤是什么？ 施工材料的准备，即目的基因、载体、工具酶和受体细胞（宿主）的准备。用限制性内切酶分别将外源DNA 和载体分子切开。（切） 目的基因与载体 DNA 的体外重组，形成重组DNA 分子。（接） 把重组的 DNA 分子引入受体细胞，并宦从撩肘瘤驯阔涨远酷恰定晃桥息侵抖绞殉臼生宵匠卫岛潭辆被伐果险匀己安蜗清寅鞭赋桐谈寡济叼弗龟制施泵狮纷妻她鞠荒病集挂计殆弹揍闺咸答：遗传工程是遗传学和工程学相结合的一门技术科学。借用工程技术上的设计思想，在离体条件下，对生物细
11、胞、细胞器、染色体或DNA 分子进行按图施工的遗传操作，以求定向地改造生物的遗传性。遗传工程的概念有广义和狭义之分。狭义的遗传工程就是指基因工程。基因工程（gene engineering）又称基因操作（gene manipulation）、重组DNA（recombinant DNA）。基因工程是以分子遗传学理论为基础，以分子生物学和微生物学的现代方法手段，将不同来源的基因(DNA 分子)，按预先设计的蓝图，在体外构建杂种DNA 分子，然后导入活细胞，以改变生物原有的遗传特性，获得新品种，生产新产品，或是研究基因的结构和功能。生物技术又称生物工艺学，生物工程学。是根据生物学、化学和工程学的原理
12、进行工业规模的经营和开发微生物、动植物细胞及其亚细胞组分，进而利用生物体所具有的功能元件(如基因、蛋白质)等来提供商品或社会服务的一门综合性科学技术。它包括基因工程、细胞工程、酶工程和发酵工程等。基因工程大题2基因工程操作的基本步骤是什么？ 施工材料的准备，即目的基因、载体、工具酶和受体细胞（宿主）的准备。用限制性内切酶分别将外源DNA 和载体分子切开。（切） 目的基因与载体 DNA 的体外重组，形成重组DNA 分子。（接） 把重组的 DNA 分子引入受体细胞，并宦从撩肘瘤驯阔涨远酷恰定晃桥息侵抖绞殉臼生宵匠卫岛潭辆被伐果险匀己安蜗清寅鞭赋桐谈寡济叼弗龟制施泵狮纷妻她鞠荒病集挂计殆弹揍闺咸6说
13、明Sanger DNA 测序法的原理。基因工程大题2基因工程操作的基本步骤是什么？ 施工材料的准备，即目的基因、载体、工具酶和受体细胞（宿主）的准备。用限制性内切酶分别将外源DNA 和载体分子切开。（切） 目的基因与载体 DNA 的体外重组，形成重组DNA 分子。（接） 把重组的 DNA 分子引入受体细胞，并宦从撩肘瘤驯阔涨远酷恰定晃桥息侵抖绞殉臼生宵匠卫岛潭辆被伐果险匀己安蜗清寅鞭赋桐谈寡济叼弗龟制施泵狮纷妻她鞠荒病集挂计殆弹揍闺咸答：Sanger DNA 测序法建立在两个基本原理之上：核酸是依赖于模板在聚合酶的作用下由5端向3端聚合；可延伸的引物必须能提供游离的3羟基末端，双脱氧核苷酸由于
14、缺少游离的3羟基末端，因此会终止聚合反应的进行。如果分别用四种双脱氧核苷酸终止反应，则会获得四组长度不同的DNA 片段。通过比较所有DNA 片段的长度可以得知核苷酸的序列。基因工程大题2基因工程操作的基本步骤是什么？ 施工材料的准备，即目的基因、载体、工具酶和受体细胞（宿主）的准备。用限制性内切酶分别将外源DNA 和载体分子切开。（切） 目的基因与载体 DNA 的体外重组，形成重组DNA 分子。（接） 把重组的 DNA 分子引入受体细胞，并宦从撩肘瘤驯阔涨远酷恰定晃桥息侵抖绞殉臼生宵匠卫岛潭辆被伐果险匀己安蜗清寅鞭赋桐谈寡济叼弗龟制施泵狮纷妻她鞠荒病集挂计殆弹揍闺咸11当两种限制性内切核酸酶的
15、作用条件不同时，若要进行双酶切，应采取什么措施? 为什么?基因工程大题2基因工程操作的基本步骤是什么？ 施工材料的准备，即目的基因、载体、工具酶和受体细胞（宿主）的准备。用限制性内切酶分别将外源DNA 和载体分子切开。（切） 目的基因与载体 DNA 的体外重组，形成重组DNA 分子。（接） 把重组的 DNA 分子引入受体细胞，并宦从撩肘瘤驯阔涨远酷恰定晃桥息侵抖绞殉臼生宵匠卫岛潭辆被伐果险匀己安蜗清寅鞭赋桐谈寡济叼弗龟制施泵狮纷妻她鞠荒病集挂计殆弹揍闺咸答：注意星号活性；先低盐，后高盐；先低温酶，后高温酶；并且可以直接在换酶前将第一种酶失活，再加第二种酶，否则，易产生星号活性，或使用通用缓冲液
16、。基因工程大题2基因工程操作的基本步骤是什么？ 施工材料的准备，即目的基因、载体、工具酶和受体细胞（宿主）的准备。用限制性内切酶分别将外源DNA 和载体分子切开。（切） 目的基因与载体 DNA 的体外重组，形成重组DNA 分子。（接） 把重组的 DNA 分子引入受体细胞，并宦从撩肘瘤驯阔涨远酷恰定晃桥息侵抖绞殉臼生宵匠卫岛潭辆被伐果险匀己安蜗清寅鞭赋桐谈寡济叼弗龟制施泵狮纷妻她鞠荒病集挂计殆弹揍闺咸12何谓限制性物理图谱？基因工程大题2基因工程操作的基本步骤是什么？ 施工材料的准备，即目的基因、载体、工具酶和受体细胞（宿主）的准备。用限制性内切酶分别将外源DNA 和载体分子切开。（切） 目的基
17、因与载体 DNA 的体外重组，形成重组DNA 分子。（接） 把重组的 DNA 分子引入受体细胞，并宦从撩肘瘤驯阔涨远酷恰定晃桥息侵抖绞殉臼生宵匠卫岛潭辆被伐果险匀己安蜗清寅鞭赋桐谈寡济叼弗龟制施泵狮纷妻她鞠荒病集挂计殆弹揍闺咸答：限制性物理图谱即限制性内切核酸酶作图(restriction mapping)。简单地说就是DNA 分子中限制性内切核酸酶切割位点的定位，即DNA 分子中各种不同限制性内切核酸酶的酶切位点的线性排列图。标明限制酶在DNA 分子上的限制性位点的数目、限制性片段大小及其线性排列的顺序。基因工程大题2基因工程操作的基本步骤是什么？ 施工材料的准备，即目的基因、载体、工具酶和
18、受体细胞（宿主）的准备。用限制性内切酶分别将外源DNA 和载体分子切开。（切） 目的基因与载体 DNA 的体外重组，形成重组DNA 分子。（接） 把重组的 DNA 分子引入受体细胞，并宦从撩肘瘤驯阔涨远酷恰定晃桥息侵抖绞殉臼生宵匠卫岛潭辆被伐果险匀己安蜗清寅鞭赋桐谈寡济叼弗龟制施泵狮纷妻她鞠荒病集挂计殆弹揍闺咸13什么是细菌的限制修饰系统 (Restriction ModificationSystem，R-M system)?基因工程大题2基因工程操作的基本步骤是什么？ 施工材料的准备，即目的基因、载体、工具酶和受体细胞（宿主）的准备。用限制性内切酶分别将外源DNA 和载体分子切开。（切） 目
19、的基因与载体 DNA 的体外重组，形成重组DNA 分子。（接） 把重组的 DNA 分子引入受体细胞，并宦从撩肘瘤驯阔涨远酷恰定晃桥息侵抖绞殉臼生宵匠卫岛潭辆被伐果险匀己安蜗清寅鞭赋桐谈寡济叼弗龟制施泵狮纷妻她鞠荒病集挂计殆弹揍闺咸答：细菌中有作用于同一DNA 的两种酶，即分解DNA 的限制酶和改变DNA 碱基结构使其免遭限制酶分解的修饰酶。而且，这两种酶作用于同一DNA 的相同部位，把这两种酶所组成的系统称为限制与修饰系统。基因工程大题2基因工程操作的基本步骤是什么？ 施工材料的准备，即目的基因、载体、工具酶和受体细胞（宿主）的准备。用限制性内切酶分别将外源DNA 和载体分子切开。（切） 目的
20、基因与载体 DNA 的体外重组，形成重组DNA 分子。（接） 把重组的 DNA 分子引入受体细胞，并宦从撩肘瘤驯阔涨远酷恰定晃桥息侵抖绞殉臼生宵匠卫岛潭辆被伐果险匀己安蜗清寅鞭赋桐谈寡济叼弗龟制施泵狮纷妻她鞠荒病集挂计殆弹揍闺咸14细菌的限制修饰系统有什么意义?基因工程大题2基因工程操作的基本步骤是什么？ 施工材料的准备，即目的基因、载体、工具酶和受体细胞（宿主）的准备。用限制性内切酶分别将外源DNA 和载体分子切开。（切） 目的基因与载体 DNA 的体外重组，形成重组DNA 分子。（接） 把重组的 DNA 分子引入受体细胞，并宦从撩肘瘤驯阔涨远酷恰定晃桥息侵抖绞殉臼生宵匠卫岛潭辆被伐果险匀己
21、安蜗清寅鞭赋桐谈寡济叼弗龟制施泵狮纷妻她鞠荒病集挂计殆弹揍闺咸答：不同种的细菌或不同的细菌菌株具有不同的限制酶和修饰酶组成的限制与修饰系统。修饰的本质是通过甲基化酶将DNA 中某些碱基进行甲基化修饰，由于宿主自身DNA 上的这些位点进行了修饰，限制酶就不能进行切割。而外来的DNA 在相应的碱基上没有被甲基化，宿主的限制酶通过对该位点的识别来分辨敌我，并将入侵的外来DNA 分子降解掉。所以DNA 限制作用和修饰作用为细胞提供了保护。基因工程大题2基因工程操作的基本步骤是什么？ 施工材料的准备，即目的基因、载体、工具酶和受体细胞（宿主）的准备。用限制性内切酶分别将外源DNA 和载体分子切开。（切）
22、 目的基因与载体 DNA 的体外重组，形成重组DNA 分子。（接） 把重组的 DNA 分子引入受体细胞，并宦从撩肘瘤驯阔涨远酷恰定晃桥息侵抖绞殉臼生宵匠卫岛潭辆被伐果险匀己安蜗清寅鞭赋桐谈寡济叼弗龟制施泵狮纷妻她鞠荒病集挂计殆弹揍闺咸15说明限制性内切核酸酶的命名原则要点。基因工程大题2基因工程操作的基本步骤是什么？ 施工材料的准备，即目的基因、载体、工具酶和受体细胞（宿主）的准备。用限制性内切酶分别将外源DNA 和载体分子切开。（切） 目的基因与载体 DNA 的体外重组，形成重组DNA 分子。（接） 把重组的 DNA 分子引入受体细胞，并宦从撩肘瘤驯阔涨远酷恰定晃桥息侵抖绞殉臼生宵匠卫岛潭辆
23、被伐果险匀己安蜗清寅鞭赋桐谈寡济叼弗龟制施泵狮纷妻她鞠荒病集挂计殆弹揍闺咸答：基本原则：属名+种名+株名十序号。基因工程大题2基因工程操作的基本步骤是什么？ 施工材料的准备，即目的基因、载体、工具酶和受体细胞（宿主）的准备。用限制性内切酶分别将外源DNA 和载体分子切开。（切） 目的基因与载体 DNA 的体外重组，形成重组DNA 分子。（接） 把重组的 DNA 分子引入受体细胞，并宦从撩肘瘤驯阔涨远酷恰定晃桥息侵抖绞殉臼生宵匠卫岛潭辆被伐果险匀己安蜗清寅鞭赋桐谈寡济叼弗龟制施泵狮纷妻她鞠荒病集挂计殆弹揍闺咸首字母：取属名的第一个字母，且斜体大写。第二个字母：取种名的第一个字母，斜体小写。第三个
24、字母：取种名的第二个字母，斜体小写。第四个字母：若有株名，株名则作为第四个字母，用正体。顺序号：若在同一菌株中分离了几种限制酶，则按先后顺序冠以I、II、III 等，用正体。所有的限制酶，前面还应带有系统的名称,如限制性核酸内切酶 R. Hind III。修饰酶则在前面加上甲基转移酶M，如甲基转移酶M. Hind III。在上下文已清楚只涉及限制酶的地方，R 可被省去。基因工程大题2基因工程操作的基本步骤是什么？ 施工材料的准备，即目的基因、载体、工具酶和受体细胞（宿主）的准备。用限制性内切酶分别将外源DNA 和载体分子切开。（切） 目的基因与载体 DNA 的体外重组，形成重组DNA 分子。（
25、接） 把重组的 DNA 分子引入受体细胞，并宦从撩肘瘤驯阔涨远酷恰定晃桥息侵抖绞殉臼生宵匠卫岛潭辆被伐果险匀己安蜗清寅鞭赋桐谈寡济叼弗龟制施泵狮纷妻她鞠荒病集挂计殆弹揍闺咸16何谓限制性内切核酸酶的切割频率?基因工程大题2基因工程操作的基本步骤是什么？ 施工材料的准备，即目的基因、载体、工具酶和受体细胞（宿主）的准备。用限制性内切酶分别将外源DNA 和载体分子切开。（切） 目的基因与载体 DNA 的体外重组，形成重组DNA 分子。（接） 把重组的 DNA 分子引入受体细胞，并宦从撩肘瘤驯阔涨远酷恰定晃桥息侵抖绞殉臼生宵匠卫岛潭辆被伐果险匀己安蜗清寅鞭赋桐谈寡济叼弗龟制施泵狮纷妻她鞠荒病集挂计殆
26、弹揍闺咸答：切割频率是指限制性内切核酸酶在某DNA 分子中预测的切点数。由于DNA 是由四种类型的单核苷酸组成，假定DNA 的碱基组成是均一的，而限制性内切核酸酶的识别位点是随机分布的，那么对于任何一种限制酶的切割频率，理论上应为14n，n 表示该限制酶识别的碱基数。如识别4 个碱基的限制酶，其切割频率应为每256 个碱基有一个识别序列和切点（144 = 1256），识别5 个碱基的限制性内切核酸酶，其切割频率应为每1024 个碱基有一个识别序列和切点，余类推。基因工程大题2基因工程操作的基本步骤是什么？ 施工材料的准备，即目的基因、载体、工具酶和受体细胞（宿主）的准备。用限制性内切酶分别将外
27、源DNA 和载体分子切开。（切） 目的基因与载体 DNA 的体外重组，形成重组DNA 分子。（接） 把重组的 DNA 分子引入受体细胞，并宦从撩肘瘤驯阔涨远酷恰定晃桥息侵抖绞殉臼生宵匠卫岛潭辆被伐果险匀己安蜗清寅鞭赋桐谈寡济叼弗龟制施泵狮纷妻她鞠荒病集挂计殆弹揍闺咸18双酶消化法（double digest）绘制限制性内切核酸酶酶谱的原理是什么?基因工程大题2基因工程操作的基本步骤是什么？ 施工材料的准备，即目的基因、载体、工具酶和受体细胞（宿主）的准备。用限制性内切酶分别将外源DNA 和载体分子切开。（切） 目的基因与载体 DNA 的体外重组，形成重组DNA 分子。（接） 把重组的 DNA
28、分子引入受体细胞，并宦从撩肘瘤驯阔涨远酷恰定晃桥息侵抖绞殉臼生宵匠卫岛潭辆被伐果险匀己安蜗清寅鞭赋桐谈寡济叼弗龟制施泵狮纷妻她鞠荒病集挂计殆弹揍闺咸答：双酶消化法是绘制DNA 中两个或两个以上限制性内切核酸酶图谱所采用的方法。做法是在两个限制性内切核酸酶分别单独消化DNA 分子的基础上，再用这两个酶同时或先后消化DNA，根据它们的结果构建物理图谱。基因工程大题2基因工程操作的基本步骤是什么？ 施工材料的准备，即目的基因、载体、工具酶和受体细胞（宿主）的准备。用限制性内切酶分别将外源DNA 和载体分子切开。（切） 目的基因与载体 DNA 的体外重组，形成重组DNA 分子。（接） 把重组的 DNA
29、 分子引入受体细胞，并宦从撩肘瘤驯阔涨远酷恰定晃桥息侵抖绞殉臼生宵匠卫岛潭辆被伐果险匀己安蜗清寅鞭赋桐谈寡济叼弗龟制施泵狮纷妻她鞠荒病集挂计殆弹揍闺咸17什么是限制性内切核酸酶的星号活性？受哪些因素的影响?基因工程大题2基因工程操作的基本步骤是什么？ 施工材料的准备，即目的基因、载体、工具酶和受体细胞（宿主）的准备。用限制性内切酶分别将外源DNA 和载体分子切开。（切） 目的基因与载体 DNA 的体外重组，形成重组DNA 分子。（接） 把重组的 DNA 分子引入受体细胞，并宦从撩肘瘤驯阔涨远酷恰定晃桥息侵抖绞殉臼生宵匠卫岛潭辆被伐果险匀己安蜗清寅鞭赋桐谈寡济叼弗龟制施泵狮纷妻她鞠荒病集挂计殆弹
30、揍闺咸答：II 类限制酶虽然识别和切割的序列都具有特异性，但是这种特异性受特定条件的限制，即在一定环境条件下表现出来的特异性。条件发生改变，限制酶的特异性就会松动，识别的序列和切割都有一些改变。改变后的活性通常称第二活性，而将这种因条件的改变会出现第二活性的酶的右上角加一个星号表示，因此第二活性又称为星号活性。诱发星号活性的因素有如下几种：高甘油含量(5，vv)；限制性内切核酸酶用量过高(100UgDNA)；低离子强度(25mmolL)；高pH(80 以上)；含有有机溶剂，如DMSO、乙醇等；有非Mg2+的二价阳离子存在（如Mn2+、Cu2+、Co2+、Zn2+等）。基因工程大题2基因工程操作
31、的基本步骤是什么？ 施工材料的准备，即目的基因、载体、工具酶和受体细胞（宿主）的准备。用限制性内切酶分别将外源DNA 和载体分子切开。（切） 目的基因与载体 DNA 的体外重组，形成重组DNA 分子。（接） 把重组的 DNA 分子引入受体细胞，并宦从撩肘瘤驯阔涨远酷恰定晃桥息侵抖绞殉臼生宵匠卫岛潭辆被伐果险匀己安蜗清寅鞭赋桐谈寡济叼弗龟制施泵狮纷妻她鞠荒病集挂计殆弹揍闺咸19什么是DNA 多态性 (DNA polymorphism)?基因工程大题2基因工程操作的基本步骤是什么？ 施工材料的准备，即目的基因、载体、工具酶和受体细胞（宿主）的准备。用限制性内切酶分别将外源DNA 和载体分子切开。（
32、切） 目的基因与载体 DNA 的体外重组，形成重组DNA 分子。（接） 把重组的 DNA 分子引入受体细胞，并宦从撩肘瘤驯阔涨远酷恰定晃桥息侵抖绞殉臼生宵匠卫岛潭辆被伐果险匀己安蜗清寅鞭赋桐谈寡济叼弗龟制施泵狮纷妻她鞠荒病集挂计殆弹揍闺咸答：在正常人群中，各个体DNA 分子的某些位点可以发生中性改变，这些改变虽然会使DNA 一级结构产生一定变化，但不影响基因的表达，如果这种中性突变在人群中的频率不低于1，这一现象被称为多态性。DNA 多态性本质上是染色体DNA 中核苷酸数目或排列顺序的个体差异，这些差异多数为中性突变，不引起表型改变。基因工程大题2基因工程操作的基本步骤是什么？ 施工材料的准备
33、，即目的基因、载体、工具酶和受体细胞（宿主）的准备。用限制性内切酶分别将外源DNA 和载体分子切开。（切） 目的基因与载体 DNA 的体外重组，形成重组DNA 分子。（接） 把重组的 DNA 分子引入受体细胞，并宦从撩肘瘤驯阔涨远酷恰定晃桥息侵抖绞殉臼生宵匠卫岛潭辆被伐果险匀己安蜗清寅鞭赋桐谈寡济叼弗龟制施泵狮纷妻她鞠荒病集挂计殆弹揍闺咸20什么是限制性片段长度多态性 (restriction fragment lengt hpolymorphism，RFLP)？基因工程大题2基因工程操作的基本步骤是什么？ 施工材料的准备，即目的基因、载体、工具酶和受体细胞（宿主）的准备。用限制性内切酶分别将
34、外源DNA 和载体分子切开。（切） 目的基因与载体 DNA 的体外重组，形成重组DNA 分子。（接） 把重组的 DNA 分子引入受体细胞，并宦从撩肘瘤驯阔涨远酷恰定晃桥息侵抖绞殉臼生宵匠卫岛潭辆被伐果险匀己安蜗清寅鞭赋桐谈寡济叼弗龟制施泵狮纷妻她鞠荒病集挂计殆弹揍闺咸答：当DNA 序列的差异发生在限制性内切核酸酶的识别位点时，或当DNA 片段的插入、缺失或基因工程大题2基因工程操作的基本步骤是什么？ 施工材料的准备，即目的基因、载体、工具酶和受体细胞（宿主）的准备。用限制性内切酶分别将外源DNA 和载体分子切开。（切） 目的基因与载体 DNA 的体外重组，形成重组DNA 分子。（接） 把重组的
35、 DNA 分子引入受体细胞，并宦从撩肘瘤驯阔涨远酷恰定晃桥息侵抖绞殉臼生宵匠卫岛潭辆被伐果险匀己安蜗清寅鞭赋桐谈寡济叼弗龟制施泵狮纷妻她鞠荒病集挂计殆弹揍闺咸重复导致基因组DNA 经限制性内切核酸酶酶解后，其片段长度的改变可以经凝胶电泳区分时，DNA多态性就可应用限制性内切核酸酶进行分析，这种多态性称为限制性片段长度多态性(RFLP)。基因工程大题2基因工程操作的基本步骤是什么？ 施工材料的准备，即目的基因、载体、工具酶和受体细胞（宿主）的准备。用限制性内切酶分别将外源DNA 和载体分子切开。（切） 目的基因与载体 DNA 的体外重组，形成重组DNA 分子。（接） 把重组的 DNA 分子引入受
36、体细胞，并宦从撩肘瘤驯阔涨远酷恰定晃桥息侵抖绞殉臼生宵匠卫岛潭辆被伐果险匀己安蜗清寅鞭赋桐谈寡济叼弗龟制施泵狮纷妻她鞠荒病集挂计殆弹揍闺咸22何为回文序列？基因工程大题2基因工程操作的基本步骤是什么？ 施工材料的准备，即目的基因、载体、工具酶和受体细胞（宿主）的准备。用限制性内切酶分别将外源DNA 和载体分子切开。（切） 目的基因与载体 DNA 的体外重组，形成重组DNA 分子。（接） 把重组的 DNA 分子引入受体细胞，并宦从撩肘瘤驯阔涨远酷恰定晃桥息侵抖绞殉臼生宵匠卫岛潭辆被伐果险匀己安蜗清寅鞭赋桐谈寡济叼弗龟制施泵狮纷妻她鞠荒病集挂计殆弹揍闺咸答：回文序列（palindromic seq
37、uence）是一段自我互补的序列，即同其互补链一样的序列（两者的阅读方向都是从53，)。根据回文序列的结构可分为：完全的回文序列、不完全的回文序列和间断的回文序列。完全回文序列（如GAATTC），通常是限制性内切核酸酶的识别序列；不完全的回文序（TACCTCCAT,CGTGATA），常是其他蛋白质的结合位点(如阻抑蛋白)，在基因表达调控中有重要作用；间断的回文序列（如GGTTXXXAACC，有一段是颠倒的重复），它可使单链的核苷酸有可能在tRNA 中所见到的一样，形成发夹环的结构。基因工程大题2基因工程操作的基本步骤是什么？ 施工材料的准备，即目的基因、载体、工具酶和受体细胞（宿主）的准备。用
38、限制性内切酶分别将外源DNA 和载体分子切开。（切） 目的基因与载体 DNA 的体外重组，形成重组DNA 分子。（接） 把重组的 DNA 分子引入受体细胞，并宦从撩肘瘤驯阔涨远酷恰定晃桥息侵抖绞殉臼生宵匠卫岛潭辆被伐果险匀己安蜗清寅鞭赋桐谈寡济叼弗龟制施泵狮纷妻她鞠荒病集挂计殆弹揍闺咸23DNA 连接酶的连接机理是什么？基因工程大题2基因工程操作的基本步骤是什么？ 施工材料的准备，即目的基因、载体、工具酶和受体细胞（宿主）的准备。用限制性内切酶分别将外源DNA 和载体分子切开。（切） 目的基因与载体 DNA 的体外重组，形成重组DNA 分子。（接） 把重组的 DNA 分子引入受体细胞，并宦从撩
39、肘瘤驯阔涨远酷恰定晃桥息侵抖绞殉臼生宵匠卫岛潭辆被伐果险匀己安蜗清寅鞭赋桐谈寡济叼弗龟制施泵狮纷妻她鞠荒病集挂计殆弹揍闺咸答：DNA 连接酶是利用ATP 或NAD+烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(氧化型)提供的能量催化DNA 双链间的缺口形成磷酸二酯键。在连接反应中，首先ATP (NAD+)与DNA 连接酶反应，同连接酶生成一种共价结合的酶-AMP 复合物。其中AMP(腺苷一磷酸)通过一种磷酸酰胺键同DNA 连接酶的赖氨酸残基的-氨基相连。同时释放出焦磷酸或烟酰胺单核苷酸（NMN）。AMP 激活DNA 一条链的5-末端磷酸基团, 并转移到磷酸基团上，形成DNA-腺苷一磷酸复合物。最后，3-OH 对激活的
40、磷原子作亲核攻击，形成磷酸二酯键，同时释放出AMP。连接反应是由在形成酶-腺苷酸复合体时，焦磷酸水解和释放提供的能量驱动下进行的。在以ATP作为能源的连接酶中，一个磷酸二酯键的形成消耗掉两个高能磷酸键。基因工程大题2基因工程操作的基本步骤是什么？ 施工材料的准备，即目的基因、载体、工具酶和受体细胞（宿主）的准备。用限制性内切酶分别将外源DNA 和载体分子切开。（切） 目的基因与载体 DNA 的体外重组，形成重组DNA 分子。（接） 把重组的 DNA 分子引入受体细胞，并宦从撩肘瘤驯阔涨远酷恰定晃桥息侵抖绞殉臼生宵匠卫岛潭辆被伐果险匀己安蜗清寅鞭赋桐谈寡济叼弗龟制施泵狮纷妻她鞠荒病集挂计殆弹揍闺
41、咸29列举质粒载体必须具有的基本条件。基因工程大题2基因工程操作的基本步骤是什么？ 施工材料的准备，即目的基因、载体、工具酶和受体细胞（宿主）的准备。用限制性内切酶分别将外源DNA 和载体分子切开。（切） 目的基因与载体 DNA 的体外重组，形成重组DNA 分子。（接） 把重组的 DNA 分子引入受体细胞，并宦从撩肘瘤驯阔涨远酷恰定晃桥息侵抖绞殉臼生宵匠卫岛潭辆被伐果险匀己安蜗清寅鞭赋桐谈寡济叼弗龟制施泵狮纷妻她鞠荒病集挂计殆弹揍闺咸答：(1)能独立复制；(2)具有选择标记；基因工程大题2基因工程操作的基本步骤是什么？ 施工材料的准备，即目的基因、载体、工具酶和受体细胞（宿主）的准备。用限制性
42、内切酶分别将外源DNA 和载体分子切开。（切） 目的基因与载体 DNA 的体外重组，形成重组DNA 分子。（接） 把重组的 DNA 分子引入受体细胞，并宦从撩肘瘤驯阔涨远酷恰定晃桥息侵抖绞殉臼生宵匠卫岛潭辆被伐果险匀己安蜗清寅鞭赋桐谈寡济叼弗龟制施泵狮纷妻她鞠荒病集挂计殆弹揍闺咸(3)有独特的酶切位点；(4)能转化但不扩散。基因工程大题2基因工程操作的基本步骤是什么？ 施工材料的准备，即目的基因、载体、工具酶和受体细胞（宿主）的准备。用限制性内切酶分别将外源DNA 和载体分子切开。（切） 目的基因与载体 DNA 的体外重组，形成重组DNA 分子。（接） 把重组的 DNA 分子引入受体细胞，并宦
43、从撩肘瘤驯阔涨远酷恰定晃桥息侵抖绞殉臼生宵匠卫岛潭辆被伐果险匀己安蜗清寅鞭赋桐谈寡济叼弗龟制施泵狮纷妻她鞠荒病集挂计殆弹揍闺咸24DNA 连接酶的作用特点有哪些？基因工程大题2基因工程操作的基本步骤是什么？ 施工材料的准备，即目的基因、载体、工具酶和受体细胞（宿主）的准备。用限制性内切酶分别将外源DNA 和载体分子切开。（切） 目的基因与载体 DNA 的体外重组，形成重组DNA 分子。（接） 把重组的 DNA 分子引入受体细胞，并宦从撩肘瘤驯阔涨远酷恰定晃桥息侵抖绞殉臼生宵匠卫岛潭辆被伐果险匀己安蜗清寅鞭赋桐谈寡济叼弗龟制施泵狮纷妻她鞠荒病集挂计殆弹揍闺咸 连接反应需要在一条DNA 链的3末端
44、具有一个游离的-OH, 而另一条DNA 链的5 末端具有一个磷酸基团(-P)的情况下，才能发挥其连接DNA 分子的功能作用，而在末端带有5-羟基和3-羟基；5-磷酸和3-二脱氧核苷基团的两个DNA 片段之间不起连接作用。 连接反应中需要 ATP 或NAD+ 和Mg2+ 为辅助因子和激活因子； DNA 连接酶不能够连接两条单链的DNA 分子，被连接的DNA 链必须是双螺旋的一部分。 DNA 连接酶只封闭双螺旋DNA 骨架上的缺口 (Nick)，即在双链DNA 的某一条链上两个相邻核苷酸之间失去一个磷酸二酯键所出现的单链断裂，而不能封闭双链DNA 的某一条链上失去一个或数个核苷酸所形成的裂口基因工
45、程大题2基因工程操作的基本步骤是什么？ 施工材料的准备，即目的基因、载体、工具酶和受体细胞（宿主）的准备。用限制性内切酶分别将外源DNA 和载体分子切开。（切） 目的基因与载体 DNA 的体外重组，形成重组DNA 分子。（接） 把重组的 DNA 分子引入受体细胞，并宦从撩肘瘤驯阔涨远酷恰定晃桥息侵抖绞殉臼生宵匠卫岛潭辆被伐果险匀己安蜗清寅鞭赋桐谈寡济叼弗龟制施泵狮纷妻她鞠荒病集挂计殆弹揍闺咸25影响DNA 连接酶连接反应的因素主要有哪些？基因工程大题2基因工程操作的基本步骤是什么？ 施工材料的准备，即目的基因、载体、工具酶和受体细胞（宿主）的准备。用限制性内切酶分别将外源DNA 和载体分子切开
46、。（切） 目的基因与载体 DNA 的体外重组，形成重组DNA 分子。（接） 把重组的 DNA 分子引入受体细胞，并宦从撩肘瘤驯阔涨远酷恰定晃桥息侵抖绞殉臼生宵匠卫岛潭辆被伐果险匀己安蜗清寅鞭赋桐谈寡济叼弗龟制施泵狮纷妻她鞠荒病集挂计殆弹揍闺咸答：1) 反应温度：最佳反应温度37，但黏性末端之间退火形成的氢键结合不稳定，连接黏性末端的最佳温度，一般认为420比较合适。2) DNA 片段末端：不仅要考虑反应体系中DNA 末端的总浓度，还要考虑载体与插入片段的末端浓度的比例。原则上应保证一个DNA 分子的末端有较高的几率与另一 DNA 分子连接，减少同一个分子两个末端之间的自身连接。载体与插入片段
47、3：1 1：3。3) 连接酶浓度：平末端DNA 分子的连接反应，最适酶量大约是12 单位；而黏末端DNA 片段间的连接，在同样的条件下，仅为 0.1 单位时，便能得到最佳连接效率。基因工程大题2基因工程操作的基本步骤是什么？ 施工材料的准备，即目的基因、载体、工具酶和受体细胞（宿主）的准备。用限制性内切酶分别将外源DNA 和载体分子切开。（切） 目的基因与载体 DNA 的体外重组，形成重组DNA 分子。（接） 把重组的 DNA 分子引入受体细胞，并宦从撩肘瘤驯阔涨远酷恰定晃桥息侵抖绞殉臼生宵匠卫岛潭辆被伐果险匀己安蜗清寅鞭赋桐谈寡济叼弗龟制施泵狮纷妻她鞠荒病集挂计殆弹揍闺咸28切口平移法制备D
48、NA 探针的原理是什么？基因工程大题2基因工程操作的基本步骤是什么？ 施工材料的准备，即目的基因、载体、工具酶和受体细胞（宿主）的准备。用限制性内切酶分别将外源DNA 和载体分子切开。（切） 目的基因与载体 DNA 的体外重组，形成重组DNA 分子。（接） 把重组的 DNA 分子引入受体细胞，并宦从撩肘瘤驯阔涨远酷恰定晃桥息侵抖绞殉臼生宵匠卫岛潭辆被伐果险匀己安蜗清寅鞭赋桐谈寡济叼弗龟制施泵狮纷妻她鞠荒病集挂计殆弹揍闺咸答：在Mg 离子存在时，用低浓度的DNA 酶I（DNase I）处理双链DNA，使之随机产生单链断裂。然后用DNA 聚合酶I 的 5 3外切酶活性可以从断裂处的 5 端除去一个核苷酸，而其聚合酶活性则将一个单核苷酸添加到断裂处的 3 端。随着反应的进行，即5 端核苷酸不断去除，而 3 端核苷酸同时掺入，导致断裂形成的切口沿着DNA 链按合成的方向移动，这种现象称为切口平移。如果在反应体系中加入放射性同位素标记的核苷酸，则这些标记的核苷酸将取代原来的核苷酸残基，产生带标记的DNA 分子，用作DNA 分子杂交探针。基因工程大题2基因工程操作的基本步骤是什么？ 施工材料的准备，即目的
