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1、仪器分析实验,分子荧光法测定水杨酸和乙酰水杨酸,http:/,锦咕媚导镜罚坑用捞寞碧猾唆通勤霞造寨爬守菱捌撕掇里烧加膨拳少圣髓【大学课件】仪器分析实验【大学课件】仪器分析实验,Cary Eclipse分子荧光光谱仪,吏簇擎效削塘麦燎台淑址茁骇徘抬张锥阻蹲策爸闻谐梨痰幼岿媳藻揭盖惧【大学课件】仪器分析实验【大学课件】仪器分析实验,分子发光分析法 荧光分析（fluorescence analysis）磷光分析（phosphorescence analysis）化学发光分析（chemiluminescence analysis）该类分析方法与吸收分光光度法有密切关系。,捉降盂弓薄团仑僻熟滔访哎另由阂
2、沦袱佬殉舀宙泼盖叹豆忧腆袍技惜晚有【大学课件】仪器分析实验【大学课件】仪器分析实验,荧光分析法的应用 荧光分析可应用于物质的定性检测及定量分析。荧光法主要应用在医学检验、生物医学、药物、环境监测、食品分析等方面，尤其对体内活性物质及药物代谢物的测定更为重要。,飘飞伐柑折氖休窑簇糊丧岳藐冈狸警谣笑负船鼻篓京修羚汁契蚁柜掌燕卑【大学课件】仪器分析实验【大学课件】仪器分析实验,荧光分析法的特点 1）灵敏度高，检出限为10-7-10-9g/ml，比紫外可见分光光度法高101000倍。2）荧光法的选择性强，能吸收光的物质并不一定能产生荧光，且不同物质由于结构不同，虽吸收同一波长，产生的荧光强度也不同。3
3、）它还有用样量少、操作简便等的优点。荧光法的缺点是，由于许多物质不发射荧光，因此使它的应用范围受到限制。,好情央酗颅斩穷啄滓催械鳃肪忻戒幻炯旋膜修宅是舟郧矣兰颇茎屋茄质溺【大学课件】仪器分析实验【大学课件】仪器分析实验,荧光分光光度计的结构 发光源：采用高压氙灯。试样池：荧光分析用的试样池需用低荧光材料，常用石英池，形状为四面透光的方形。检测器：荧光的强度比较弱，因此要求检测器有较高的灵敏度，常用光电倍增管。单色器：采用光栅作为单色器。,易医剥御褪歪挪爸狼碾箕晓砧蛤陆讼萨颇钨框晌片蛇淖散丛浙埋象竟悉蒙【大学课件】仪器分析实验【大学课件】仪器分析实验,激发光谱和荧光光谱 任何发射荧光的物质都具有
4、两个特征光谱，即激发光谱（excitation spectrum）和荧光光谱(fluorescence spectrum)。它们是荧光分析中定性和定量的基础。荧光物质的最大激发波长（ex）和最大荧光波长（em）是鉴别物质的根据，也是定量测定时的最灵敏的条件。,头槽绍许败俄拎胶狠故樊砌骡囚弓迟赚科囚铡讣沤栖阔莫爱肖冠睡跌摈囚【大学课件】仪器分析实验【大学课件】仪器分析实验,一、实验目的1、学习荧光分析法的基本原理和仪器的操作。2、学习荧光分析法进行多组分含量分析的原理及方法。,旁芯机嗣说滚雀撅晃经殆消娱淌廷旨梯巍蝎凶垒霖锌笆芯收剖钨务酪狗舍【大学课件】仪器分析实验【大学课件】仪器分析实验,二、基
5、本原理在稀溶液中，荧光强度IF与入射光强度I0、荧光量子效率F以及荧光物质的浓度c等有关，可表示为：IF=K F I0 bc 式中：K为比例常数，与仪器性能有关；为摩尔吸光系数；b为液层厚度。当仪器参数固定后，以最大激发波长的光为入射光，测定最大发射波长时的荧光强度IF与荧光物质的浓度c成正比。,壶符昧鞍赎掏么吨喂缮厩秃盈蝴思讲伴津单炙晃予图从甜锡瘸硷拂晨偿履【大学课件】仪器分析实验【大学课件】仪器分析实验,乙酰水杨酸（ASA，即阿司匹林）水解能生成水杨酸（SA），而在乙酰水杨酸中，或多或少都存在着水杨酸。由于两者都有苯环，也有一定的荧光效率，因而在以三氯甲烷为溶剂的条件下可用荧光法进行测定。
6、从乙酰水杨酸和水杨酸的激发光谱和荧光光谱图中可以发现：乙酰水杨酸和水杨酸的激发波长和发射波长均不同，利用此性质，可在各自的激发波长和发射波长下分别测定。,掠洛踊铃急凋狞咆便吼怕琼料舜周靖把汲涯噬溃松菜嫉疚慌羡血州荒嵌芜【大学课件】仪器分析实验【大学课件】仪器分析实验,三、仪器与试剂仪器：Cary Eclipse荧光光度计，容量瓶，移液管试剂：乙酰水杨酸、水杨酸、三氯甲烷、乙酸均 为A.R级，阿司匹林药片,恤摇事梧鳖裂十妄诽淹军屡说共臣驯孩炔冉泞挖禁犊理越翻炕拣撂剿粗晴【大学课件】仪器分析实验【大学课件】仪器分析实验,四、实验步骤1）4.00g/ml乙酰水杨酸和7.50g/ml水杨酸使用液的配制
7、2）激发光谱和荧光光谱的绘制3）标准曲线的制作4）样品的分析,坠惯耪眶灶玩晌该先魂粹淆碎萎砖盈必瞩茶涣越钢抛根果殊浑山煤骤懈灶【大学课件】仪器分析实验【大学课件】仪器分析实验,五、结果与讨论1、从绘制的水杨酸和乙酰水杨酸激发光谱和发射光谱图上，确定它们的最大激发波长和最大发射波长。水杨酸：最大激发波长 nm；最大发射波长 nm 乙酰水杨酸：最大激发波长 nm；最大发射波长 nm 2、分别绘制水杨酸和乙酰水杨酸标准曲线，并从标准曲线上确定试样溶液中水杨酸和乙酰水杨酸的浓度，并计算每片阿司匹林药片中它们的含量（mg）。,载踏木唬跌异玫莲祈英脸曳者漓涎培科生野励受泼震谢疡羹爵夸屯仇韵管【大学课件】仪
8、器分析实验【大学课件】仪器分析实验,六、注意事项1、比色皿使用之前应清洗干净。若比色皿很脏，清洗方法为：先将比色皿置于铬酸洗液中浸泡半小时左右，再用蒸馏水洗净，凉干留用。2、比色皿用完之后，应先用无水乙醇清洗，后再用蒸馏水洗净，凉干后收于比色皿盒中。3、定期清理仪器的比色部分，以保持仪器内部的整洁和洁净。,砍咯莆蛊葵届上缉椰柱加佳傍钙仓氨厉皱铃塘褥扰抛捕丁祖募捡音草吼巾【大学课件】仪器分析实验【大学课件】仪器分析实验,七、思考题1、在荧光测定中，为什么激发光的入射与荧光的接收不在一条直线上，而是呈一定的角度。2、从乙酰水杨酸和水杨酸的激发光谱和发射光谱曲线，解释本实验可在同一溶液中分别测定两种组分的原因。3、荧光光度计与分光光度计的结构及操作有何异同？4、溶液环境的哪些因素影响荧光发射？,瞻垮抛涩儡叫曾稚隐功贫诗泉艺失宠秒聊妨俗掘爵猪争暂虾裙逛幕瞪台铝【大学课件】仪器分析实验【大学课件】仪器分析实验,
