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1、临床科研选题与科研设计（做科研型医生）,中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础医学院,以几个案例作例子来阐述,Idea（新鲜）（创新点）Design 如何(从哪几方面)来验证，它们的逻辑关系 Methods（逻辑，内在联系）,新发SLE患者（创新点）调节性 T细胞的研究(表面标志CD25与转录因子Foxp3 的表达、细胞的抑制作用、其临床意义）国外的SLE患者绝大多数有激素或细胞毒药物治疗的经历,案例一,自身免疫应答靶抗原的的“暴露”或形成（隐蔽抗原）微生物感染激活自身反应性淋巴细胞（分子模拟）协同刺激分子的异位表达 多克隆淋巴细胞的非特异性活化（超抗原）免疫调节紊乱（包括调节性T细胞
2、数量减少或功能减弱）其它,自身免疫病发病的免疫学因素,CD4+CD25+调节性T细胞（其抑制功能需Foxp3转录因子表达）,调节性T细胞,案例一涉及的3项研究,研究新发SLE患者周围血中CD4+T细胞的CD25与FoxP3表达，及Glucocorticosteroid/cyclophosphamide治疗对CD25与FoxP3 在CD4+T细胞表达的影响。研究对象为24例新发活动期SLE患者、20例新发非活动期SLE患者、21例年龄性别相合的正常志愿者。分离周围血的单个核细胞，用流式细胞仪检测CD4 T细胞CD25与FoxP3的表达。发现FoxP3在新发SLE患者CD4+CD25+T 细胞的表
3、达下降，在CD4+CD25-T 细胞 的表达增强。还检测了Glucocorticosteroid与cyclophosphamide治疗对FoxP3在CD4+CD25+和CD4+CD25-T 细胞表达的影响,第1项研究：Reduction of Foxp3 levels in CD4+CD25high T cells in patients with new-onset systemic lupus erythematosus.Clin Exp Immunol.2008;153(2):182-7.,研究新发SLE患者周围血CD4+CD25-Foxp3+T细胞的临床意义检测10例活动期、11例非活
4、动期新发 SLE患者、及11例健康志愿者。用流式细胞仪分析Foxp3与CD25在CD4 T细胞的表达。分离CD4+CD25+与CD4+CD25-T细胞，检测它们对T细胞增殖的影响。G检测CD4+CD25-T细胞与其他临床指标（如抗dsDNA、尿蛋白、血清C3水平、SLEDAI）的相关性这个故事并不复杂，内容较简单，文内仅2张图与1个表格。但创新点明显，文章发表于Ann Rheum Dis.2008;67(7):1037-40.Impact fector 7.188。,第2项研究：Clinical significance of increased CD4+CD25-Foxp3+T cells
5、in patients with new-onset systemic lupus erythematosus,第3项研究:Are CD4+CD25Foxp3+cells in untreated new-onset lupus patients regulatory T cells?Arthritis Res Ther 2009;11(5):R153,研究新发SLE 患者周围血中的CD4+CD25-Foxp3+T细胞与CD4+CD25+Foxp3+T细胞表面表达的分子及分泌的细胞因子有何不同，及 CD4+CD25-Foxp3+T细胞有否抑制。检测22例新发SLE 患者。用流式细胞仪分析比较C
6、D4+CD25-Foxp3+细胞与CD4+CD25+Foxp3+T细胞表面标志子表达及细胞因子表达的差异。检测CD4+CD25+Foxp3+T细胞对T细胞增殖有否调节作用。,新发SLE患者其它免疫细胞有什么特点 新发其它自身免疫病免疫细胞有什么特点 新发其它自身免疫病其它免疫学指标有什么特点,从案例一能得到的启发,案例二新型抗流感药DAS181的研发,A型流感病毒的生活周期,已批准上市的抗流感药物 M2离子通道阻滞剂 盐酸金刚乙胺（1993年美国FDA批准上市）金刚烷胺（1966 FDA年批准为预防药，1976年确认其为治疗药）神经胺酸酶（NA）抑制剂 达菲（1999年美国FDA批准上市）扎那
7、米韦（1999年5月首先在澳大利亚获准上市）,除了毒副作用外，主要的问题是流感病毒产生抗药性，因为病毒基因突变,研发中的抗流感药物,流感病毒的NA与HA相互作用感染靶细胞,Neu5Ac(2,3)-Gal与Neu5Ac(2,6)-Gal分子就是流感病毒的受体。人流感病毒主要识别(2,6)-Gal唾液酸，禽流感病毒与马流感病毒主要识别(2,3)-Gal唾液酸。流感病毒的HA与细胞表面含(2,3)-Gal或/和(2,6)-Gal唾液酸的糖蛋白相结合。人呼吸道上皮细胞的唾液酸主要是(2,6)-Gal型，但也有(2,3)-Gal型，所以禽流感病毒也能感染人，尽管感染效率不高。NA的作用是破坏HA的受体。
8、它酶切呼吸道黏膜上诸如mucin等潜在抑制性分子的唾液酸，从而使之灭活，促进病毒在呼吸道传播;酶切病毒感染细胞表面的唾液酸，促进子代病毒释出，以助于病毒传播。HA的受体结合作用和NA的受体破坏作用相互相成，维持平衡，于病毒复制和传播十分重要。,呼吸道上皮细胞,唾液酸,流感病毒,HA,NA,以往有报道，体外实验中唾液酸酶能有效阻止流感病毒感染细胞。因此学者欲研制一种融合蛋白，由唾液酸酶与能锚定于人呼吸道上皮细胞的蛋白组成。,DAS181的分子模式,报道已从微生物和真核细胞分离出15种底物特异性和酶动力学各异的唾液酸酶。从中选择A.viscosus唾液酸酶的催化功能域。其理由为：底物特异性广；催化
9、活性最大；人免疫系统对其耐受，因为人正常口腔和胃肠道细菌也产生此唾液酸酶。,DAS181抗流感病毒作用的研究（细胞、小鼠与雪貂模型）,DAS181的创新点,靶点在宿主细胞上，能避免产生病毒耐药 广谱抗流感病毒药物（A,B型流感、流感病毒耐药株、副流感病毒）能酶切SA2,3Gal和SA2,6Gal，也能酶切SA2,8Gal。因此，对现有流感毒株、未来毒株、及重组变异毒株均有效 吸入给药，生物利用度高 药物作用持续时间较长：至少2天（MDCK),至少7天（HAE)，用于预防和治疗均可,案例三：与IgA肾病发病机制相关,聚糖（glycan),核酸、蛋白质、聚糖和脂是所有细胞的4种基本大分子 核酸链基
10、本上由4种核苷酸组成 肽链基本上由23种氨基酸组成 糖链十分复杂 脂质按生物学功能可分为三类：储存脂质（包括甘油三脂和蜡）结构脂质（构成生物膜脂双层的磷脂）活性脂质（类固醇和萜）,案例四：几个病案分析及其它,XXX等（301医院）：不明原因发热的病因分布及临床特征 2000年1月至2009年1月在301医院内科住院且符合不明原因发热的患者816例，病因分布，临床特征，老年患者与非老年患者之间的比较。XXX等（北京协和医院）：结石性急性胆管炎的治疗 急诊的急性胆管炎患者426例，随着介入技术（急性行经皮经肝胆道穿刺引流术）和内镜技术（急性行经内镜逆行胰胆管造影）的进展，急性胆管炎患者由急诊手术经
11、保守治疗或介入治疗转为择期手术，可以大大减少手术并发症发生率，降低手术死亡率。XXX等（北京协和医院）：胰腺实性假乳头状瘤的CT诊断及鉴别诊断 对14例病理确诊的胰腺实性假乳头状瘤患者的CT资料作CT诊断及鉴别诊断(无功能性胰岛细胞瘤、胰腺囊腺瘤、胰腺癌、胰腺假性囊肿）分析XXX等（北京协和医院）：细针穿刺技术在乳腺癌手术治疗中的应用价值 北京协和医院初诊考虑乳腺癌可能性大的530例女性患者作细针穿刺细胞学（FNAC）检查。FNAC检查阳性325例，直接行乳腺癌根治术，术后组织病理学检查均为乳腺癌。FNAC检查阴性205例，开放活检术，术后组织病理学检查137例乳腺癌，68例非乳腺癌。表明FN
12、AC有助于对怀疑乳腺癌者选择适当的术式。,以中国医学科学院学报2011年第1期上的几篇论文为例,病案分析加检验科检测指标也能发SCI文章,2009,确定“点”，要有新意 要有正常对照和其它对照（如阳性对照）分析的指标不能单一，分析要有层次 正确的统计处理 最好能结合一点实验室检测,病案分析中需注意的几点,药剂科的人员一般做药代动力学和生物效性等的试验较多,对药剂师科研工作的建议,与临床大夫密切合作 参与新药研制 有效制剂的开发（如协和医院的健脑合剂等）做一点药物作用机理的研究,科研工作中尚需注意的几点,每一步都要走得踏实，要核实试剂和仪器是否OK（以本人做PCR检测及研制PSA试剂盒失败为例说
13、明）,表位可分成两类：线性表位（linear，指肽链上由一段序列相连续的氨基酸残基所形成的抗原表位）和构象表位（conformation，指多肽或多糖链上由空间位置相邻，而序列上不相连续的氨基酸残基或多糖残基所形成的抗原表位）,严格实验操作，做好实验记录（包括病案记录）随时分析实验结果，适时对研究目的和技术路线作调整,爱因斯坦有关如何做科学研究的名言,One percent inspiration and ninety nine percent perspiration,灵感来自哪里?临床实践与文献。要找到和明确什么是你研究的“点”（创新最关键）。Idea Design(切实可行的技术路线,从
14、哪几方面说明这个“点”，它们的逻辑顺序怎样）Methods。需要多一点分子生物学、免疫学、细胞生物学等的知识，需多读文献。,如何写科研论文,明确什么是这篇论文的“点”。确定论文的题目。画制图表（论文的核心）材料与方法 查阅文献 引言（包括问题的提出（背景、假设），回答了什么问题，创新点）讨论（简单小结本研究的发现，与其他学者研究的比较，本创新发现的意义，其它，等等）摘要,Clinical significance of increased CD4+CD25-Foxp3+T cells in patients with new-onset systemic lupus erythematosus
15、,题 目,以前述案例一（2）为例,实验结果（图表的制作）,Fig 1.CD4+CD25+Foxp3+and CD4+CD25-Foxp3+T cells in SLE patients and normal controls,Fig 2.The expression of CD127 by CD4+T cell subpopulation,材料与方法（可以参考他人的文章）,前言,CD4+CD25+调节性T细胞在SLE发病中作用的的报道不甚一致，且尚无在新发SLE患者研究的报道 Foxp3表达不只限于CD4+CD25+T细胞（Treg），作者以往研究观察到新发SLE患者CD4+CD25-Foxp
16、3 T细胞频率增高 CD4+CD25-Foxp3+T细胞有什么临床意义,（包括问题的提出（背景、假设），回答了什么问题，创新点）,讨 论,有关CD4+CD25+Treg细胞在SLE患者周围血中状况的报道不尽相同。这可能与各种免疫抑制剂使用相关。本文报道了在新发SLE所做的研究。对CD4+CD25-Foxp3+T细胞作了讨论。与CD127表达的关系。新发SLE患者的 CD4+CD25-Foxp3+T细胞有一定临床意义。新发SLE患者的 CD4+CD25-Foxp3+T细胞有否抑制作用？,（简单小结本研究的发现，与其他学者研究的比较，本创新发现的意义，其它，等等）,如果自己用英语写论文暂时有困难，可请专门的论文写作公司帮忙。关键是要有创新的研究结果和确切可靠的数据。,中文论文也一样,基金申请,申请书的撰写（立论依据、技术路线、拟使用的方法、创新点、工作基础、队伍）评审的流程,谢 谢!,
