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1、B -葡糖苷酶（纤二糖酶）测定方法（总1页）-CAL-FENGHAI.-（YICAI）-Company Onel-CAL-本页仅作为文档封面，使用请直接删除试验二。-葡萄糖昔酶（BG- Ec）活性测定 新鲜土样；比色法的原理：以对硝基苯-6-D-毗喃葡糖昔为基质，水解产生对硝基酚，比色测定 （硝基酚比色法）。1.配置溶液：（1） 改进的通用缓冲溶液（MUB）贮备液：三羟甲基氨基甲烷（C4H11NO3即 Tris）、马来酸（C H O）、14g柠檬酸（C H O）和硼酸（H BO）溶于500ml、444oo733NaOH溶液中，用去离子水稀释至1L,于4C下贮存。（2） pH值的MUB缓冲溶液：
2、在继续搅拌下，在200ml MUB贮备液中分别滴加HcL 或NaOH至溶液pH值为，去离子水稀释定容至1L（3）4-Nitrophenyl-beta-D-glucopyranoside 对硝基酚-B-D-毗喃葡糖昔（PNPG）溶液 C12H15NO8=： PNPG溶于40ml MUB溶液（pH为）中，用相同pH值的缓冲液 稀释至50ml，于4C下贮存。（4） Cacl2溶液（）：取无水Cacl2加入1L的容量瓶中配置（5） Tris缓冲液c （C4H11NO3）=，pH值:g三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶于800ml 去离子水，用NaOH调节pH至，去离子水稀释至1L（6）标准对硝基苯酚溶液：
3、溶解?对硝基酚于400ml?双去离子水中，定容 到500mL，保存于4度，用时再稀释10倍。稀释后为。（一般需 1000ppm）2.试验过程取1g新鲜土样（2mm）于100ml三角瓶中，加甲苯，通风橱10min后，4ml pH为的MUB 溶液和1mm PNPG溶液，盖上瓶盖，充分混匀，在37C培养1h。（2）加1ml Cacl2溶液和4ml pH值的Tris缓冲液，摇匀，迅速用快速滤纸过滤，滤液在 400nm处比色测定。做空白对照时，可在培养结束后，加Cacl2溶液和tris缓冲液之前加入 1mL缓冲液（代替1mL底物）溶液。每个样品必须做一个空白和三次重复。标准曲线：吸取0，1，2，3，4，5,6ml于100ml容量瓶中，加去离子水稀释至5ml， 然后加1ml氯化钙溶液和4ml tris溶液，充分混匀后定容50ml，过滤，400nm处比色测定结果计算6-葡萄糖昔酶活性（曲对-硝基酚.）=CV/dwt式中：C表示样品对-硝基酚的含量（曲/ml）；V表示土壤溶液体Dwt表示烘干土壤质量个人做法实验终止后加入5mL离子水稀释后过滤（若果用微孔板，则可以不用 加离子水）
