肿瘤及其标志物课件.ppt

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1、1,肿 瘤 及 其 标 志 物 曾玲莉,2,恶性肿瘤发生与分类,定义,肿瘤（tumor）又称新生物（neoplasma），是机体在各种致瘤因素的作用下，组织和细胞在基因水平上失去了对其生长的正常调控，导致的异常生长和分化。即指失去了正常生物调控的异常生长、分化的细胞和组织。,3,良性肿瘤：局部膨胀性生长，速度比较缓慢；常有较完整的包膜；压迫邻近组织器官，但不侵蚀破坏 不向远处转移，危害性较小。,特点：细胞增殖、分化异常出现恶性生长；失去细胞 与细胞间及细胞与组织间的正常联系，侵袭周围正常组织并发生转移,根据肿瘤的生物学行为和临床表现可分为：,恶性肿瘤：表现为细胞的无休止和无序的分裂，有侵袭性（

2、向周围组织侵润）和转移 性，危害性大,4,恶性肿瘤的分类,癌症（Carcinoma）起源于上皮细胞，约占恶性肿瘤的85%；恶性肉瘤（Sarcoma）:起源于组织细胞，如肌肉组织、骨骼及脂肪组织，约占肿瘤的6%左右；淋巴瘤和白血病（Lymphoma and Leukemia）:起源于白细胞的产生组织，如骨髓、淋巴腺等，可 发生于各年龄段，约占恶性肿瘤的5%左右；其它恶性肿瘤：包括脑瘤及其它罕见的癌症，约占恶性肿瘤的4%左右。,5,恶性肿瘤的发生的机制 肿瘤是一种基因疾病，其发生是一个多因素、多阶段、多基因参与的复杂过程。,癌 变 正常细胞 癌变细胞 细胞生物大分子（DNA、RNA、蛋白质）结构与

3、功能异常 化学致癌剂 环境因素 致癌病毒 放射线,引起细胞癌变 外因通过内因起作用,6,细胞癌变的分子学基础：癌基因与抑癌基因其结构或表达异常 细胞增殖生长调节系统：癌基因（正调节）（促进增殖，抑制分化和凋亡）（通过表达产物-生长因子发挥作用）抑癌基因（负调节）（抑制增殖，促进分化、成熟、衰老，最后凋亡）,当多个癌基因异常激活时或当抑癌基因缺失、突变或基因产物失活时可引起细胞癌变。,7,正常肠上皮细胞 癌基因的激活 抑癌基因的丢失 K-ras的突变 腺瘤 级 遗传型AFP突变 级 FAP丢失 或息肉 级 基因丢失 P53基因丢失（占70%）一部分人直接有 息肉转变成癌 C-myc的过量表达 大

4、肠癌 P53基因突变使细胞增 殖加速，若同时其等位 转移 人大肠癌癌变的分子机理,8,细胞癌变的免疫监视学说,1、机体免疫活化性细胞（T细胞、NK细胞、K细胞和巨噬细胞等）有识别肿瘤细胞的作用，在早期杀灭异常细胞，当机体免疫功能低下或受抑制时，肿瘤的发生率高。2、肿瘤细胞有逃脱免疫监视的能力，妨碍机体的免疫监视的功能。,9,（一）肿瘤标志物定义（Tumor Markers，TM）是指由恶性肿瘤细胞异常产生的或特征性存在于恶性肿瘤细胞的物质，或是宿主对肿瘤反应而产生的物质。当肿瘤发生、发展时，这些物质明显异常，标志肿瘤的存在。,肿瘤标志物的概念,TM或是大分子的蛋白质（包括肽类激素和酶），或是小

5、分子的脂类或氨基酸衍生物；存在于肿瘤细胞和组织中，存在于血液和其它体液；能利用化学、免疫和分子生物学等技术进行定性或定量的检测,10,理想的肿瘤标志物条件,特异性高；灵敏度高；器官特异性，可对肿瘤进行定位；肿瘤标志物浓度变化与肿瘤的大小、生长、消退、转移、恶性程度有直接的定性或定量的比例关系；易检测出，取材方便，检出方法简单灵敏。,11,肿瘤标志物的研究概况 肿瘤标志物的发展历史大体分为4个阶段：1846年1928年，本周氏蛋白的发现（第1个发现的肿瘤标志 物，现已被确认为 多发性骨髓瘤的标志）；,12,1929年1962年，发现一些激素、酶及同工酶等在恶性肿瘤的应用价值，1930年Zonde

6、k发现人绒毛膜促性腺激素（HCG）可辅助诊断 绒毛膜癌等 1932年Cushing等报道了促肾上腺皮质激素（ACTH）对恶性 肿瘤的辅助诊断价值。40年代报道了一些酶在肿瘤病人的血清中增高，成骨肉瘤血清中有碱性磷酸酶的升高。1959年Markert等发现恶性肿瘤患者体液中可出现异常变化的同工酶谱,13,1963年1975年，现代肿瘤标志物研究以发现胚胎蛋白为 标志物 1963年Abelev发现甲胎蛋白（AFP）1965年Glod和Freeman发现癌胚抗原（CEA）,14,1976年至今，其研究进展及应用主要表现以下三方面：第一，1975年Kohler和Milstein成功地创建了淋巴细胞杂交

7、瘤技术，1979年Koprowski用结肠癌细胞制备单克隆抗体，识别糖类抗原，建立了一系列特异性较强的肿瘤标志和CA系列，第二，发现肿瘤的基因标志，1976年Bishop和Varmug等发现癌基因与肿瘤的发生关系，是使肿瘤标志的研究从分子水平提高到基 因水平 第三，肿瘤标志的检测技术的灵敏度和特异性大为提高。免疫定量技术由半定量或灵敏度较低的过渡到高灵敏度并能准确定量的放射免疫测定或酶联免疫吸附测定单克隆抗体技术的广泛应用,15,肿瘤标志物的分类,按肿瘤标志物本身的化学特性可分为以下7类：肿瘤胚胎性抗原标志物；酶类标志物；糖类标志物；激素类标志物；微球蛋白类标志物；基因类标志物；其它类标志物。

8、,16,肿瘤标志物 检测及临床应用,17,一、肿瘤胚胎性抗原标志物,肿瘤胚胎性抗原是指癌瘤细胞重新表达某些在胚胎细胞才有的而在成人后逐渐下降、消失的蛋白质成分 最常见的是 AFP CEA,18,（一）甲胎蛋白（-fetoportein，AFP）,生化特性,是胎儿血中的主要蛋白质成分，主要由胚胎期 的肝细胞和卵黄囊产生,妊娠6周开始合成；1214周合成达高峰（血清浓度为13g/L）；出生后下降，出生时的脐带血含量约10100mg/L，一年后约为 5.8g/L,MW：70KD，由590氨基酸组成，含糖量为4%，糖链主要由甘露糖、半乳糖、N-乙酰葡萄糖和唾液酸组成的寡糖。糖链结构不同的AFP称 AF

9、P分子的异质体,19,1.AFP与肝癌 诊断原发性肝癌；是目前公认早期诊断的主要 标志物；（以血清含量400g/L作为诊断阈值）肝癌普查（但需注意AFP阴性不能排除HCC）,临床应用,判断分化程度；,用于病情监测、预后判断；AFP含量与肿瘤 的 大小呈正相关，,动态观察AFP含量和ALT酶活性的变化鉴别诊断良性肝脏疾病。(5)AFP异质体分析对AFP持续在50200g/L的原发性肝癌和良性肝病有鉴别诊断意义。常以小扁豆凝集素LCA结合型AFP25%作为原发性肝癌的诊断标准。,20,2.AFP与生殖细胞瘤 AFP与HCG同时检测有利于生殖 细胞瘤的分型和分期 AFP HCG睾丸癌+卵巢癌+绒毛膜

10、上皮细胞癌+畸胎瘤+,临床应用,21,（二）癌胚抗原（carcinoembryonic antigen,CEA）,生化特性,1、于结肠癌的提取物中发现，因此抗原也出现在胚 胎细胞上，故称癌胚抗原。2、CEA是一种结构复杂的可溶性酸性糖蛋白，含糖量约为45%55%；CEA属细胞表面糖蛋白家族，不规则地分布于细胞表面，易被细胞分泌或脱落至血液或其它体液中；电泳位置于-球蛋白的位置；有5种互相不重叠的抗原决定族，分别命名为Gold15，其中13有很高的特异性，45有交叉反应,22,基因位于19号染色体上，由10个基因组成，可表达36种不同的糖蛋白，胚胎期主要由胎儿的消化道上皮、肝脏和胰细胞分泌，出生

11、后消失。成人CEA主要是由结肠粘膜细胞分泌到粪便中，少量重吸收入血。健康成人血中CEA浓度小于2.5g/L。,生化特性,23,临床应用,CEA是一种低器官特异性肿瘤标志物。不适合作某种恶性肿瘤的诊断和筛查，但对预后判断、疗效观察及辅助诊断是一个有效的监测指标，也是发现复发的理想指标,1、用于辅助诊断：肿瘤名称 阳性率 结肠癌 70%90%胰腺癌（中晚期）88%91%，肺癌 76%，乳腺癌 70%2、检测胃液中的CEA对胃癌有一定的诊断意义。,24,3、CEA比正常持续升高510倍（如20g/L）往往提示有恶性肿瘤特别是肠癌的存在。4、注意排除非癌性CEA升高。良性疾病如吸烟者、酒精性肝硬化、肺

12、气肿、结肠息肉、非特异性结肠炎、胰腺炎、良性乳腺疾病等也可引起CEA的上升,临床应用,25,二、酶类肿瘤标志物,恶性肿瘤患者酶活力改变原因：肿瘤细胞恶变时引起基因表达的改变，肿瘤细胞产生异常含量的酶；肿瘤细胞的破坏或通透性增加，导致细胞内酶释放入血；肿瘤特异的生长方式及代谢改变而导致酶的异常尤其是同工酶谱的改变；肿瘤组织压迫管腔使某些酶返流入血；肿瘤的存在或转移机体某些组织诱导并生成大量的酶。,26,1、PAS是一种由前列腺上皮细胞分泌的单链糖蛋 白2、具有酶活性，与精液液化有关。3、基因结构分析表明，PSA与激肽释放酶KLK1 和 KLK2高度同源，4、血中总的PSA(t-PSA)包括两种形

13、式，游离型（f-PSA）20%结合型（cPSA）80%，,（一）前列腺特异性抗原（prostate specific antigen,PSA）,生化特性,27,PSA-ACT（1抗胰蛋白酶）复合物cPSA形式 2巨球蛋白（2MG）结合的复合物 目前可以测定的是：f-PSA ACT-cPSA t-PSA=（f-PSA+ACT-cPSA）,28,PSA是前列腺癌的特异性标志物,临床应用,前列腺癌的筛查和早期诊断；一般以4.0g/L作为参考值的上限，t-PSA 4 g/L判断为阳性,应用血清中的f-PSA/t-PSA比值来鉴别良、恶性前列腺肿瘤；f-PSA/t-PSA比值为0.15可作为前列腺肥大和

14、前列腺癌的鉴别要点，比值0.25,提示前列腺肥大；,病情、疗效监测和预后判断；,29,（二）神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase,NSE),生化特性,是烯醇化酶的一种同工酶有5种形式，即、。二聚体是该酶的活性形 亚基主要存在于肝、肾等组织；亚基主要存在于骨骼肌和心肌组织中；亚基组成的同工酶和存在于神 经元和神经内分泌组织中，故称为NSE。,30,临床 应用,NSE水平升高还可见于某些神经内分泌肿瘤如嗜铬细胞瘤、黑色素瘤、胰岛细胞瘤，甲状腺髓样瘤等。,NSE是小细胞肺癌和神经母细胞瘤的标志物。,NSE对小细胞肺癌敏感度为80%，特异性为80%90%，应用于疗效观察

15、、预报复发及预后判断,NSE对儿童型的神经母细胞阳性率为90%,31,AFU存在于多种细胞的溶酶体及体液中，为一种酸性糖蛋白，是水解糖蛋白或糖脂中-L岩藻糖苷键的酶，参与糖脂、糖蛋白、糖的代谢,临床意义,1、主要用于遗传性AFU缺乏引起的岩藻糖贮 积病的诊断2、又可作为原发性肝癌又一敏感、特异的新标 志物。,（三）-L岩藻糖苷酶（AFU）,生化特性,32,异常血清酶名称 相关肿瘤,乙醇脱氢酶（Alcoholdehydrogenase）肝 醛缩酶（Aldolase）肝 碱性磷酸酶（ALP）骨、肝、白血病、肉瘤、卵巢等 淀粉酶（Amylase）胰腺等 肌酸激酶（CK BB）前列腺、小细胞肺癌、乳腺

16、、结肠、卵巢-谷氨酰转肽酶（-GT）肝 乳酸脱氢酶（LD）肝、淋巴瘤、白血病 神经元特异性烯醇化酶（NSE）小细胞肺癌、神母细胞瘤、类癌、黑色素瘤 5-核苷酸酶（5Nucleotidase）肝 酸性磷酸酶（ACP）前列腺-L-岩藻糖苷酶（AFU）肝 芳香硫酸酯酶 结肠、乳腺,33,异常血清酶名称 相关肿瘤,半乳糖转移酶（Galactosyltransferase）结肠、膀胱、胃肠、卵巢 丙酮酸激酶（Pyruvate Kinase）肝、卵巢 胸腺苷激酶（Terminal deoxytransferase）淋巴瘤、白血病、小细胞肺癌 亮氨酸氨基肽酶（Leucine aminopeptidase）胰

17、腺、肝 核糖核酸酶（Ribonuclease）卵巢、肺、乳癌,34,三、糖类抗原（Carbohydrate antigen，CA）,定义：是当正常细胞转化为恶性细胞时，细胞表 面糖蛋白发生变异而形成的一种与正常细胞不同的特殊抗原物质，或是由肿瘤细胞分泌的含糖的复合物。,命名：CA后面的数字代表的是制造该抗原的肿瘤细胞株的编号,分类：CA125、CA15-3、CA594、CA27-29是哺乳动上皮细胞分泌的大分子量粘蛋白，其中有些如CA15-3、CA549、CA27-29实际上是异构体，是乳癌的肿瘤标志物；CA19-9、CA50、CA72-2、CA242是唾液酸岩藻糖的衍生物，常是消化道肿瘤的标

18、志物。,35,（一）卵巢、乳腺肿瘤标志物,1、CA125,生化特性,是用人类卵巢浆液性囊腺癌细胞系作抗原免疫小鼠通过淋巴细胞杂交而获得的单克隆抗体OC125识别而得名，主要在卵巢癌中，又称为卵巢相关抗原。,CA125是一种分子量200KD的高分子糖蛋白。主要存在于上皮性卵巢癌组织和病人的血清中，健康人群血清中CA125的含量很低，其上限为35KU/L。,36,临床意义,2、其他恶性肿瘤及其他妇科肿瘤CA125也可升高，胰腺癌、肺癌、乳腺癌、直肠癌及子宫内膜癌等3、鉴定良性和恶性骨盆肿块较好的标志物 某些良性疾病如子宫内膜异位症，盆腔炎、卵巢囊肿等疾病也有不同程度升高，但阳性率较低，,1、主要作

19、为卵巢癌肿瘤标志，早期诊断卵巢癌 可用于监查已诊断为卵巢癌病人，评价疗效果及预报肿瘤复发,37,2、CA15-3,是一种在乳腺癌细胞表面含量较高的细胞表面糖蛋白，是监测乳腺癌的重要抗原。对乳腺癌具有较高特异性，但灵敏度较差，不适用于早期诊断和肿瘤筛查，主要用于治疗评价、预后判断和转移、复发监测。被认为是诊断转移性乳腺癌的首选指标，/期乳腺癌复发检测指标故是监测病程 其他多种腺癌也有CA15-3升高，包括有胰腺癌、肺腺癌、卵巢癌、直肠癌、肝癌等。,38,（二）消化道肿瘤标志物,1、CA19-9,是一种大分子量的低聚糖类粘蛋白抗原用人结肠癌细胞株SW-1116制备的单克隆抗体116-NS-19-9

20、识别糖类抗原 CA19-9分布于正常胎儿的胰腺、胆囊、肝、肠等组织中及正常人胰、胆管上皮处，在血清中以唾液粘蛋白的形式存在,是一种与胰腺癌、胆囊胆管癌、结肠癌、胃癌相关的肿瘤标志物，又称为胃肠癌相关抗原。消化系癌肿患者血清CA19-9明显增高。,39,2、CA50,CA50是一种与CA19-9密切相关，以唾液酸脂和唾液酸糖蛋白为主要成分的糖类抗原 遍布于结肠、胃肠道、肺、胰腺、肝脏、胆囊、脑膜等恶性肿瘤组织中；细胞正常代谢过程中不分泌CA50成分。可用结肠、直肠癌COCO205细胞制成的单克隆抗体CA50来进行检测，不同的方法测得血清CA50的正常参值不同。临床应用与CA19-9有良好的相关性

21、，诊断胰腺癌、胆管癌，肝癌、胃癌、结直肠癌、肺癌、卵巢癌等亦有较高的价值。CA50和其它肿瘤标志物如CA19-9、CA242、CEA、AFP等联合测定，可有效提高恶性肿瘤检测的特异性和敏感性。,40,名称 性质 相关肿瘤 常用单克隆抗体,CA125 糖蛋白，分子量200KD 卵巢、子宫内膜癌 OC125 CA15-3 糖蛋白，分子量400KD 乳腺、卵巢癌 DF3 115D3CA549 高分子量糖蛋白 乳腺、卵巢癌 BC4E549,BC4N154CA27.29 高分子量糖蛋白 乳腺癌 B27.29 CA19-9 唾液酸化Lexa 胰腺、胃肠、肝 116NS19-9 CA19-5 唾液酸化Lea

22、和 Leag 胰腺、卵巢、胃肠 116NS19-5CA50 唾液酸化Lea 胰腺、胃、结肠 Colo-50 CA72-4 唾液酸化Tn 胰腺、直肠、胃肠道 B27.3，CC49CA242 唾液酸化CHO 结肠、直肠、胰腺 C242,常用糖类抗原标志物一览表,41,四、激素肿瘤标志物,激素类肿瘤标志物分类：原位激素（eutopicd hormone）：具有分泌激素功能的细胞癌变导致其所分泌的激素量发生异常，这些异常的原位激素具有高度的腺体特异性，有助于该内分泌腺或内分泌细胞肿瘤的诊断。异位激素（ectopic hormone）：是指在正常情况下，不产生激素的细胞癌变后所生成的激素，这些激素几乎都

23、是肽类激素，具有与原位激素相同或相似的结构，和天然激素有相同的免疫原性，可用天然激素的抗体检测出来。,42,异位激素作为肿瘤标志物特点：1、许多产生异位激素的恶性肿瘤能分泌一种或多种激素或类激素，或者几种肿瘤可分泌同一种异位激素；2、恶性肿瘤异位激素分泌量少且不恒定的，激素类标志很少用于恶性肿瘤的诊断。3、最易产生异位激素的肿瘤是肺癌，特别是小细胞癌，最常见的异位激素是ACTH及其衍生物。,43,人绒毛膜促性腺激素（human chorionic gonadotrophin,HCG）,生化特性,HCG是由胎盘滋养层细胞所分泌的糖蛋白激素，由a和两个亚基组成，每个亚基上有两条N-糖链。a亚基的生

24、物特性与促黄体生成素（LH）、促卵泡激素（FSH）、促甲状腺激素（TSH）的a亚基氨基酸排列顺序基本相同，亚基决定了各类激素的免疫学性质和激素的特异性，现行的许多测定HCG的分析方法都是专为检验HCG分子的链而设计。,44,临床意义,1、用于早孕诊断及用于了解胚胎生长情况及随访观察。2、是睾丸肿瘤和胎盘肿瘤最基本的标志物。良性葡萄胎、恶性葡萄胎、绒癌患者血清HCG有不同程度增高。腺癌、前列腺癌、肺非小细胞癌、肝癌、白血病及淋巴瘤等其他肿瘤患者HCG也可见升高。,45,激 素 相 关 肿 瘤,儿茶酚胺类（CA）嗜铬细胞瘤 促肾上腺皮质激素（ACTH）肺小细胞癌、胰岛癌、胸腺癌 生长激素（GH）垂

25、体腺瘤、肺癌、肾癌 抗利尿素（ADH）肺小细胞、肾上腺皮质瘤、胰腺癌 5-羟色胺（5-HT）原发性类癌 降钙素（CT）甲状腺髓样癌、肺小细胞癌、嗜铬细胞瘤 绒毛膜促性腺激素（hCG）绒毛膜癌、睾丸癌、肺癌、乳腺癌、肝母细胞瘤 人胎盘催乳素（HPL）滋养层细胞癌、性腺腺瘤、肺癌、乳腺癌 甲状旁腺素（PTH）肺癌、肾癌、乳腺癌、肝癌、卵巢癌 促红细胞生成素 肝癌、子宫癌 胰高血糖素 肾癌,激素与肿瘤关系一览表,46,五、微球蛋白肿瘤标志物,（一）铁蛋白（Ft）,结构：核心（结晶状的氢氧化高铁）外壳（去铁蛋白，呈球状，由24亚基组成）其亚基分为H和L两类，心铁蛋白主要为H亚基，肝铁蛋白主要为L亚基，

26、胎儿和癌组织中以H型为主。作用：贮铁和供铁，,47,1、衡量有无严重铁代谢失调和体内铁贮存水平，正常人铁蛋白300g/L为增多指标，SF是诊断体内缺铁最敏感、最特异的指标，也是铁负荷过多性疾病的诊断和鉴别诊断2、是一种新的肿瘤标志物 急性白血病患者SF显著升高，其它的恶性肿瘤的患者如霍奇金病、肝癌、胰腺癌、乳腺癌肺癌、卵巢癌等SF含量升高，升高的程度与肿瘤的活动及临床床分期有关。,应用：,48,（二）2微球蛋白（2-microglobulin,2-M）,2-M是一种分子量为11.8KD的单链多肽，存在于除成熟红细胞和胎盘滋养层细胞以外的几乎所有有核细胞表面，特别是淋巴细胞表面尤其丰富。血清2-

27、M 2.5mg/L，尿平均值为98g/L，上限为320g/L。应用：1、评估肾功能 2、监测肿瘤病情变化 淋巴细胞增生性肿瘤如多发性骨髓瘤、慢性淋巴性白血病等病人血清中2-M浓度可明显增高，在确诊的肝癌病人血清2-M与AFP有良好的相关性，,49,（三）角蛋白（cytokeratin，CK）,细胞角蛋白是一类分子量为4070KD的细胞结构蛋白应用双向电泳可将角蛋白分离出20条区带，分别命名为CK1CK20，肿瘤细胞中最丰富的是CK18和CK19。CYFRA21-1-是指的单层上皮细胞癌变时，可释放CK19的片段进入血循环，此可溶性的片段称为CYFRA21-1。CYFRA21-1水平测定是磷状上

28、皮细胞肺癌患者诊断和疗效观察的首选指标。CYFRA21-1和NSE组合测定可提高诊断肺癌的灵敏度而不降低特异性。,50,六、肿瘤基因标志,癌基因的激活实质：结构异常；表达异常 癌基因的激活途径：,抑癌基因的失活：一是抑癌基因的缺失或突变 二是抑癌基因产物失活。,51,52,癌 基 因 相 关 肿 瘤,C-myc 乳腺癌、胃癌、肺癌（巨细胞型）、急性粒细胞白血病、结肠癌 N-myc 神经、视网膜母细胞瘤、肺癌（小细胞）C-erb-2 胃癌、肾癌、乳腺癌 N-ras 胃腺癌 H-ras 黑色瘤、膀胱癌、皮肤鳞癌 K-ras 结肠癌、骨肉瘤、膀胱癌、胰腺癌、卵巢癌,常见癌基因类肿瘤标志物,53,抑

29、癌 基 因 相 关 肿 瘤,RB 视网膜母细胞瘤、骨肉瘤、乳腺癌、肺癌 P53 肺癌、结肠癌、胃癌 WT1 Wilms肿瘤 NF-1 神经纤维瘤 Erb-B-2 乳腺癌,常见抑癌基因类肿瘤标志物,54,肿瘤基因标志检测方法,1、定量病理学：原位图像分析（确定细胞中总DNA含量）细胞测量学方法（用于研究小肿瘤）2、免疫组织化学法（利用单克隆抗体检测其相关的蛋白质以检测癌基因和抑癌基因的产物）3、分子生物学方法：聚合酶链反应（PCR）技术：PCR-ASO法；PCR-SSCP；PCR-RFLP；直接测序法。,55,（一）癌基因肿瘤标志物,1.ras基因家族与肿瘤的关系 2、myc基因家族成员与肿瘤的

30、关系,（二）抑癌基因,1RB基因 2、P53基因,56,肿瘤类型 临 床 意 义,乳腺癌 c-Ha-ras基因mRNA水平升高 结直肠癌 50%的肿瘤出现c-Ki-ras基因点突变 肺癌 20%30%肿瘤出现ras基因家族成员点突变，其中 c-Ki-ras基因突变与预后不良相关 胰腺癌 90%左右的肿瘤出现c-Ki-ras基因点突变 胃癌 p21表达水平明显升高，c-Ha-ras基因编码的 12位氨基酸突变与肿瘤的转移及预后不良有关 髓性白血病 10%50%的肿瘤出现c-N-ras基因突变 膀胱癌 部分病例可出现c-Ha-ras基因点突变及P21 蛋白表达过度,ras基因家族与肿瘤的关系,57

31、,肿瘤类型 临 床 意 义,神经母细胞瘤 在20%肿瘤中有N-myc基因扩增，是预后的预测因子 乳腺癌 6%57%的肿瘤中可见c-myc基因扩增,c-myc基因mRNA水平升高与预后不良有关 结直肠癌 10%20%的肿瘤中可见c-myc基因扩增 小细胞癌 30%的肿瘤可见L-myc基因过度表达 宫颈癌 c-myc过度表达与预后不良有关 胶质母细胞瘤 均见N-myc基因扩增 Burkitti淋巴瘤 几乎100%的病人均有c-myc基因异位,myc基因家族成员与肿瘤的关系,58,（二）抑癌基因,1RB基因（retinoblatoma，RB）基因产物为P105蛋白，P105磷酸化修饰对细胞的生长、分

32、化起重要的调节作用，非磷酸化的P105能促进细胞分化，抑制细胞增殖。RB基因失活见于成视肉膜细胞瘤、骨肉瘤、小细胞肺癌、乳腺癌、膀胱癌等许多肿瘤,59,基因产物：53KD蛋白 功能：野生型的P53蛋白维持细胞正常生长；时刻监控基因的完整性“基因卫士”抑制恶性增殖 检测：应用多种P53的单克隆/多克隆抗体来检测野生型/突变型P53蛋白，一般测得的只是突变型P53蛋白。,2P53基因,60,肿 瘤 临 床 意 义,结肠癌 50%80%表现P53突变 肺癌 45%70%P53水平升高，57%的小细胞癌过度表达P53 肝癌 50%的有P53点突变 膀胱癌 61%有P53基因突变 乳腺癌 40%有P53

33、突变，9%的病人血清有P53蛋白 卵巢癌 50%的肿瘤有P53基因的突变 食管癌 35%44%有P53突变 骨肉瘤 33%76%的肿瘤有P53基因的突变 胃癌 37%有P53基因突变 神经纤维瘤 30%肿瘤有P53基因突变 非霍奇金淋巴瘤 61%有P53蛋白增加 甲状腺癌 24%肿瘤有P53基因突变,P53基因与肿瘤的关系,61,七、其它肿瘤标志物,唾液酸、多胺、羟脯氨酸、假尿嘧啶核苷、新蝶呤等低分子量的生化物质也被作为肿瘤标志物，归类于其它肿瘤标志物。,（一）肿瘤标志物的评价指标,表15-9,62,第三节 恶性肿瘤标志物 实验室诊断,一、肿瘤标志物临床判断值确定（一）常见的评估肿瘤标志物的指

34、标（二）ROC工作曲线确定肿瘤标志物判断值,二、检验方法和质量控制（一）肿瘤标志研究及检测的常用技术（二）质量控制,三、常用肿瘤标志物的联合应用,63,评价指标 计算公式,敏感度（真阳性数/所有肿瘤病人数即真阳性+假阴性）100%特异性（真阴性数/所有非肿瘤病人数即真阴性+假阳性）100%阳性预测值PV（+）（真阳性数/真阳性例数+假阳性例数）100%阴性预测值PV（-）（真阴性数/真阴性例数+假阴性例数）100%准确率（有效率）（真阳性+真阴性）/总例数100%,64,（二）ROC工作曲线确定肿瘤标志物判断值,TM临界值的决定：根据金标准确定患者和对照组二组例数相似的人群，并测出各组的实验数

35、据。使用该实验数据的不同的域值来区分阳性和阴性的不同分界点，并分别计算其灵敏度和特异性。绘制受试者工作曲线（receiver operating characteristic curve,ROC曲线）以接近左上角的点即为最佳诊断临界值。,65,乳癌时CA15-3的ROC曲线,66,前列腺癌PSA试验和PAP试验的ROC曲线比较,67,PSA的ROC曲线,68,二、检验方法和质量控制,（一）肿瘤标志研究及检测的常用技术,1免疫学技术 主要是三大技术：放射性免疫测定（RIA），酶联免疫测定（EIR）荧光素标记的荧光免疫测定（FIA）。使免疫学抗原抗体反应的特异性与标记物的敏感性相结合具有特异、敏感

36、、快速等优点，且试剂标准化，操作简便，可定性、定量。,69,3免疫组织化学技术 从形态上详细阐明细胞分化、增殖和功能变化的情况，确定肿瘤组织的类型以及临床特征的分析。,4肿瘤免疫显像技术 确定肿瘤的生长部位，在外科手术中发现放射性标记 物抗体的积蓄的细胞、组织和器官。,5基因诊断技术 分子探针；DNA重组技术；分析基因结构和功能的变化,2、生物化学技术 常用方法包括电泳法、酶生物学活性法等。,70,1标本（1）常用的标本：血清（但阳性率有一定的局限性）（2）其它标本：直接收集肿瘤组织或胃液、肠液、胰液、胸水、乳汁（3）标本采集 除少量的酶外，一般无严格的时间要求 但应注意各种影响因素，（4）标

37、本的保存，一般肿瘤标志物在室温下比较稳定 近期测定，离心后保存在4冰箱中，长期保存，建议于-20（23个月）或-70保存待测。,（二）质量控制,71,2质控 质控物：阴性、低阳性浓度和高阳性浓度三种 最好能自已准备质控物应用肿瘤标志物 进行治疗监测时：检测方法：仪器；试剂应保持一致,72,3肿瘤标志物测定结果的影响因素,体内影响TM浓度因素：,某些良性疾患可产生的测定值升高；强烈的治疗（手术、放疗、化疗）连续的细胞死亡 肿瘤本身状态（大小、供血状况、扩散及扩散程度）药物的影响,73,标本污染 同一患者、同一标本使用不同的试剂盒有时结果差异极大。其它干扰因素“钩状现象”（hook effect）

38、即待测标本中抗原浓度过高，出现抗原不能全部与抗体结合，免疫反应被明显抑制，出现错误的低读数。“嗜异性抗体”（heterophilic antibodies）的影响 可导致TM的假性高值，,体外影响因素包括有：,74,恶 性 肿 瘤 主要 标 志 其 它 标 志,原发性肝癌 AFP-GT，ALP，CEA，AFU胰腺癌 CA19-9 CEA，CA50，CA242 胃癌 CA72-4 CEA，CA19-9，SA 结直肠癌 CEA CA19-9，CA-50，NSE 小细胞肺癌 NSE CEA，CA50，ACTH，CT非小细胞肺癌 CYFRA21-1 CEA SCCA NSE，TSA 乳腺癌 CA15-3 CEA，CA549，CA72-4卵巢癌 CA125 CA72-4，CA19-9，CEA 子宫颈癌 SCCA CEA，HCG 前列腺癌 PSA f-PSA,PAP,ALP,CEA 白血病 ALP，2M，铁蛋白,常见肿瘤标志物在主要肿瘤中的联合应用,