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1、血液学检验第四章,血细胞染色体检查,授课教师：马雪莲,血液病诊断要求,【内容衔接】,形态学：骨髓象 骨髓病理活检免疫学检验：流式细胞术（CD抗原）遗传学与分子生物学：染色体、基因,临床资料,形态学,免疫分型,遗传、分生,血液病诊断要求,血液病诊断要求,血细胞染色体检验,【染色体检验目的】,1.白血病：诊断、分型 治疗方案制定 复发监测 预后判断 举例：急性早幼粒细胞白血病（M3型）90%会出现t（15，17），形成PML-RARa融合基因。,血细胞染色体检验,血细胞染色体检验,【染色体检验目的】,2.诊断遗传性血液病:血友病-X染色体隐性遗传 镰刀状红细胞贫血常染色体显性遗传 蚕豆病-X染色体
2、,血细胞染色体检验,【染色体】,光镜下染色体 电镜下染色体,血细胞染色体检验,【染色体】,血细胞染色体检验,【染色体】,染色体：双股DNA长链反复折叠形成,染色体结构展开图,血细胞染色体检验,【起始】,时间：1960年人物：诺维尔Nowell和亨格福德Hungerford地点：美国费城Philadelphia事件：发现慢粒特异染色体即Ph染色体（费城染色体）意义：开启了血液遗传学时代，推动了分物发展。,血细胞染色体检验,【发展史】,血细胞染色体检查经历了4个阶段,血细胞染色体核型分析技术,一.【染色体非显带技术】(一)原理:骨髓液分裂中期血细胞染色体为对象,根据形态特征进行分析，排序，编号,在
3、骨髓液中加入秋水仙素，破坏纺锤丝，使细胞停留在分裂中期。然后对细胞进行固定，制片，染色,前期,中期,后期,末期,一.染色体非显带技术,(二)非显带染色体命名 中着丝粒染色体 着丝粒 亚中着丝粒染色体.形态特征 近端着丝粒染色体 随体：近端着丝粒染色体 短臂的球形小体,一.染色体非显带技术,(二)非显带染色体命名 2.染色体识别的指标：染色体相对长度 臂率：短臂（p）与长臂（q）比例 有无随体 3 染色体分组,一.染色体非显带技术,(二)非显带染色体命名,一.染色体非显带技术,(二)非显带染色体命名 3 染色体分组 人类染色体数目：46条（23对）根据染色体识别指标把染色体从小到大编号：1-22
4、号，并分为AG七组。,一.染色体非显带技术,(二)非显带染色体命名4.染色体核型：通过显微摄影技术给单个细胞中所有染色体拍照并编号分析得到其核型 染色体正常核型：正常男性核型表示：46，XY正常女性核型表示：46，XX,正常男性染色体模式图（非显带）,二.染色体常规显带技术,(一)原理：染色体经过特殊处理或用荧光染料染色，可是染色体显示明暗相间的条纹称显带染色体。临床上最常用的显带技术是G显带法，R显带法。,G带带型分析,二.染色体常规显带技术,(二)显带染色体命名 显带技术有利于染色体的更好识别，为深入研究染色体异常和基因定位奠定了基础。染色体区：以着丝粒为起始向臂端延伸，依次编号为1区，2
5、区，3区；染色体带：染色体上明暗条纹,二.染色体常规显带技术,(二)显带染色体命名显带染色体表示需四项内容：染色体号、臂号、区号、带号,三.染色体核型分析系统,自动染色体核型分析系统为临床提供了简单、高效的细胞遗传学检测手段。,二.染色体常规显带技术,四.常规显带技术的应用,（一）染色体数目异常（常见于血液病）1.多倍体：成倍增加，如三倍体69条（3n）2.非整倍体：增减不成倍 亚二倍体（少于46条）-见于3%ALL 超二倍体（多于46条）-见于32%ALL 3.嵌合体：多见于先天性异常患者。如 45,X/46,XY,数目异常描述：染色体前写“+”或“-”表示该整条染色体增加或减少，如 47,
6、xy,+8 69,XXY,四.常规显带技术的应用,四.常规显带技术的应用,（二）染色体结构异常 原因：染色体断裂及重排 常见结构异常：缺失del 倒位inv 易位t 重复dup,结构异常描述：染色体后写“+”或“-”表示染色体部分获得或缺失。如 46,XY,3p-,异常核型举例及练习,46，XY,del 6q47,XX,?+2146,XY,+18,-2146,XY,inv(3)(q21;q26)46，XY,t(9;11)(q21;q26),血细胞染色体检验,【课堂小结】1.了解：血细胞染色体检验目的及发展史 2.掌握：常见异常核型的表示方法及意义,四.常规显带技术应用,常规显带技术不足之处：1
7、 只能分析分裂中期细胞 2 染色体质量差，显带不佳 3 难于识别微小异常（104kb）4 无法确定的异常分裂像来自哪种细胞,五.染色体原位荧光杂交技术（FISH）,FISH 技术 是20世纪80年代在，细胞遗传学，分子生物学，免疫学基础上发展起来的新技术。工具为“探针”：标记荧光素，可与目的基因通过碱基互补结合的一段DNA或RNA片段。检测对象：分裂中期或分裂间期的细胞,五.染色体原位荧光杂交技术（FISH）,原位荧光杂交原理,五.染色体原位荧光杂交技术（FISH）,Bcr/abl 融合基因阳性46，XY，t（9；22)(q34；q11),五.染色体原位荧光杂交技术（FISH）,染色体t（3；5）,六.多色荧光原位杂交技术（FISH）,染色体t（3；5）,多色FISH：20世纪90 年代，用5种荧光素不同组合（25-1)标记人类24种染色体,提高了核型分析的灵敏度和精确性。,六.多色荧光原位杂交技术（FISH）,染色体t（3；5）,多色FISH：,
