动物实验基本操作方法.ppt

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1、第八章 动物实验的基本操作方法,动物实验的基本操作方法，包括实验动 物的抓取、固定、编号、标记、麻醉、去毛、给药、采血、采集体液、常见手术操作、处死等操作方法。,第一节 实验动物的抓取、固定、编号、标记方法,一、小鼠的抓取与固定,二、大鼠的抓取与固定,抓取与固定方法同小鼠,但要防止被大鼠咬伤.,三、豚鼠的抓取与固定,四、家兔的抓取与固定,五、犬、猫等的抓取与固定,视频,六、实验动物的编号与标记方法,在动物实验中，必须对实验动物进行编号、标记以示区别。标记方法应满足标号清晰、耐久、简便、易认和适用的要求，现介绍几种常用的标记方法。1.染色法：染色法是用毛笔或棉签蘸取有色化学染料，在实验动物体表不

2、同部位涂上斑点，以示不同编号。编号的一般原则是：“先左后右，先上后下。”,2.耳缘剪孔法3.烙印法4.挂牌法,第二节实验动物的麻醉方法,全身麻醉,局部麻醉,在实施全身麻醉时，应注意以下几个问题：猫、犬、猪或非人灵长类大动物禁食1012h，不能少于8h。家兔或啮齿类动物无呕吐反射，术前无须禁食。被手术的动物在麻醉前可给予一定量饮水。麻醉前不能使用泻剂。因为泻剂可导致血液的碱储降低，从而增加血液和组织的酸度，在麻醉和失血情况下，易发生酸中毒，并能降低损伤组织的抗感染能力。麻醉后的动物必须保持气道的通畅和组织(眼球、舌、肠等器官)的营养。犬做长时间实验前1h应灌肠排除积粪。应检查麻醉剂质量、数量是否

3、满足要求，麻醉固定器具是否有破损(漏气或堵塞)，有关麻醉中毒急救品和器材是否准备齐妥，以应急需。,（一）麻醉前的准备,一、全身麻醉方法,全身麻醉的常用方法主要有吸入麻醉和非吸入 麻醉。1吸入麻醉 吸入麻醉是将挥发性麻醉剂或气体麻醉剂经呼吸道吸人动物体内，从而产生麻醉效果的方法。吸入麻醉常用的挥发性麻醉剂有乙醚、氯仿、氟烷、甲氧氟烷等。气气麻醉剂常用氧化亚氮、环丙烷等。乙醚的麻醉作用主要是抑制中枢神经系统，适用于中、小型实验动物全身麻醉。先将浸润了乙醚的棉球(或海绵)放入小烧杯，再将小烧杯放入相应大小密封的麻醉盒内(可用大烧杯代替)，再将动物放入，通过透明的麻醉盒观察动物的行为。开始时，动物出现

4、兴奋，进而出现抑制，自行倒下，呼吸由快变慢，当角膜反射迟钝，肌张力下降，即可取出动物。实验过程中，应注意动物的反应，适时追加乙醚吸人量，维持其麻醉深度和时间。,（二）麻醉的方法,2非吸入 麻醉 非吸人麻醉的给药常用注射方法，如静脉注射、肌内注射、皮下注射、腹腔内注射等。常用的麻醉药有戊巴比妥钠、硫喷妥钠、氨基甲酸乙酯等。戊巴比妥钠是常用的一种动物麻醉剂，白色粉末，安全范围大，毒性小，麻醉潜伏期短，维持时间较长。一般用生理盐水配制。大鼠、小鼠和豚鼠常采用腹腔注射；犬、猫、兔等动物既可腹腔注射，又可静脉注射。操作时，一般先推入麻醉药总量的23，密切观察动物生命体征的变化，若已达到所需麻醉的深度，余

5、下的麻醉药则不用。以避免麻醉过深抑制延髓呼吸中枢导致动物死亡。在实验过程中，若动物出现苏醒行为时，可追加麻醉药，或吸入乙醚辅助麻醉。,常用实验动物全身麻醉药用法及剂量,二、局部麻醉方法,局部麻醉操作方法很多，可分为表面麻醉、局部浸润麻醉、区域阻滞麻醉以及神经干(丛)阻滞麻醉等。1表面麻醉：利用局部麻醉药的组织穿透作用，透过粘膜，阻滞浅表的神经末梢。常用麻醉药为利多卡因等。眼部用药点滴，鼻内用药涂敷，咽喉气管用药喷雾，尿道灌注给药。2区域阻滞麻醉：在手术区四周和底部注射麻醉药阻断疼痛的向心性传导。常用药为普鲁卡因。3神经干(丛)阻滞麻醉：在神经干(丛)的周围注射麻醉药，阻滞其传导，使其支配的区域

6、无疼痛。常用药为利多卡因。4局部浸润麻醉：沿手术切口逐层注射局部麻醉药，阻滞组织中的神经末梢。常用药为普鲁卡因。5椎管内麻醉：在椎管内注射麻醉药，阻滞脊神经的传导，使其支配的区域无疼痛。常适用于大型动物(如猪、马、牛、羊等)，常用药为普鲁卡因、可卡因等。,三、动物麻醉的注意事项,1有些麻醉药物，如乙醚，是挥发性很强的液体，易燃易爆，使用时应远离火源。平时应装在棕色玻璃瓶中，储存阴凉处，不宜放在冰箱中，以免遇电火花而引起爆炸。2所有麻醉药使用过量均可引起中毒，应特别注意各种麻醉药的剂量和给药途径，应准确按体重计算麻醉剂量。由于动物存在个体差异，文献介绍的剂量仅能作参考使用。3注射时，一般要求缓慢

7、，并随时观察动物的肌张力、角膜反射、呼吸频率、夹痛反射射等指标。4动物麻醉后，体温下降，要注意保温。5万一麻醉过量，应根据不同情况，积极采取措施，如施行人工呼吸，给予苏醒剂，或注射强心剂、咖啡因、肾上腺素、可拉明，也可静脉注射5温热葡萄糖溶液。,第三节实验动物被毛的去除方法,一、剪毛法 二、拔毛法 三、剃毛法 四、脱毛法,第四节实验动物的给药途径和方法,*经口给药*注射给药*其他途径给药（呼吸道、皮肤、直肠等）,一、经口给药,分为口服法、喂服法、灌胃法。下面主要介绍灌胃法。,灌胃法是用灌胃器将所应投给动物的药灌到动物胃内，此法剂量准确，但每天强制性操作和定时给药会对动物造成一定程度的机械性损伤

8、和心理上的影响，要减少这些不良影响，必须熟练掌握灌胃技术。操作前，用灌胃针或灌胃管大致测一下从口腔至胃内的位置(最后一根肋骨后)的长度，根据此距离估计灌胃针(或灌胃管)插入的深度。成年动物插入的深度一般是：小鼠3cm，大鼠或豚鼠5cm，兔约15cm，犬约20cm。,大鼠、小鼠的灌胃法,用左手固定鼠，右手持灌胃器(安好灌胃针并已吸好药物)，将灌胃针从鼠的嘴角插入口腔，压迫鼠的头部，使口腔和食管成一直线，轻轻转动针头刺激鼠的吞咽，将灌胃针沿咽后壁慢慢插入食管，如动物挣扎厉害，退出灌胃针，待动物安静下来，重新插入，灌胃针前端达到膈肌水平，即可慢慢推灌药液，如很通畅，则说明已进入胃内。如不通畅，且动物

9、挣扎厉害，须拔出重新操作。常用灌胃量：小鼠：0.21ml,大鼠14ml，豚鼠15ml。,犬、兔和猫的灌胃法 先将动物固定，再将开口器固定于动物口中，压住舌头，然后将灌胃管(常用导尿管代替)从开口器的小孔插入动物口中，再沿上腭壁顺食管方向送入胃内，插入动作要轻、慢，边插边密切注意动物的反应。事先将灌胃管在水或生理盐水中泡一下，这样容易插入而不损伤食管。将灌胃管的外端浸入水中，如有气泡逸出，则说明灌胃管误入气管，需拔出重新、插，插好后将注射器连于灌胃管慢慢将药液推入。在正式推药之前，亦可先用温水试灌一次，如果水不从嘴角流出，灌注很通畅，动物不挣扎，则说明进入胃内，为避免灌胃管内残留药液，需再注入5

10、mL生理盐水，然后拔出胃管，取下开口器。常用灌胃量：豚鼠15mL，兔80150mL，犬200500mI。,二、注射给药,（一）皮内注射 局部去除被毛，消毒后，用皮试针头紧贴皮肤皮层刺入皮内，然后再向上挑起再稍刺入，即可注射药物，注射时会感到有很大阻力。注射后可见皮肤表面鼓起一白色小丘，停留片刻再拔出针头，以免药液漏出。(二)皮下注射 注射时，用左手拇指和食指轻轻提起动物皮肤，右手持注射器，将注射针刺入皮下，若针头容易摆动则证明针头已在皮下，推送药液，缓慢拔出注射针，稍微用手指压片刻针刺部位，以防药物外漏。皮下注射部位：小鼠选颈背部皮肤；大鼠选背部或侧下腹部；豚鼠选大腿内侧、背部或肩部皮下脂肪少

11、的部位；兔选背部或耳根部；猫、犬选大腿外侧。,（三）肌肉注射 肌肉注射比皮下和腹腔注射用得较少，但当给动物注射不溶于水而混悬于油或其他溶剂中的药物时，常采用肌肉注射。动物肌肉注射时，应选用肌肉发达，无大血管经过的部位，如兔、猫、犬、猴的两侧臀部或股部。,（四）腹腔注射 大鼠、小鼠腹腔注射时，左手抓取并固定好动物，将腹部朝上。右手持注射器将针头在下腹部腹白线稍左或偏右的位置，从下腹部朝头方向几乎平行地刺入皮下，进针35mm，再使针头与皮肤呈45角斜穿过腹肌，当针尖穿过腹肌进入腹腔时，有落空感，然后固定针头，保持针尖不动，回抽，无回血，无肠液、尿液，便可缓缓推入药液。小鼠的一次注射量为0.10.2

12、ml/10g体重。大鼠一次注射量为：12ml/100g体重。兔的注射部位在腹部近腹白线lcm处，犬在脐后腹白线侧边12cm处。,(五)静脉注射 大、小鼠静脉注射 常用尾静脉注射。大、小鼠尾静脉共有3根(左、中、右)，一般常选用两侧的静脉。注射前，先把动物固定在暴露尾部的鼠尾固定器内(可用烧杯、铁丝罩或粗试管等物代替)，拔去尾部静脉走向的毛，置鼠尾于4550的温水中浸泡几分钟或用75酒精棉球反复擦拭，以达到消毒、血管扩张及软化表皮角质的目的。开始注药时宜少量且缓慢，仔细观察，如无阻力，表示针头已进入静脉，同时可见静脉血液被注射进去的药液向前推进。如出现白色皮丘说明未刺人血管，应拔出针头重新穿刺。

13、注射完，取一棉球或纱布用力按住注射部位并轻轻揉动。如需反复注射，应尽量从尾的末端开始，另外，左右两根血管可交换选择使用。,兔的静脉注射 一般采用外耳缘静脉。给兔注射前，先将兔放入固定盒内固定好，拔去注射部位的毛，用75%的酒精消毒，手指轻弹兔耳，使静脉充盈。左手食指和中指夹住静脉的近心端，拇指绷紧静脉的远心端，环指及小指垫在下面，右手持注射器，尽量从静脉的远心端刺入血管，回一下血，放松对耳根处血管的压迫，移动拇指于针头上以固定，放松示、中指，将药液注入。注射完毕，用棉球压住针眼，拔去针头，继续压迫数分钟。如需反复注射，应尽量从耳的末端开始。,豚鼠的静脉注射 一般采用前肢皮下头静脉或后肢小隐静脉

14、或者浅背侧足中静脉注射，此外豚鼠的耳缘静脉也可注射。豚鼠的静脉管壁较脆，注射时应特别小心。,犬的静脉注射 犬的静脉注射多采用前肢皮下头静脉或后肢小隐静脉。注射部位剪毛后，用碘酒和酒精消毒皮肤，在静脉血管的近心端用橡皮带扎紧，使血管充盈，从静脉的远心端将注射针头平行刺入，如有回血，即可松开橡皮带，将药缓缓地注入。,三、其他途径给药,呼吸道给药 呈粉尘、气体等状态的药物，均需要通过呼吸道给药。如给动物乙醚作吸入麻醉，用锯末烟雾制作慢性支气管炎动物模型等。皮肤给药 常用于鉴定药物或毒物经皮肤的吸收作用、致敏作用等。对兔和豚鼠，常采用背部一定面积的皮肤脱毛后，将一定的药液涂在皮肤上，药液经皮肤吸收。直

15、肠给药 常用于动物麻醉。兔直肠内给药时，常采用灌肠用的胶皮管或114号导尿管进行给药。脑内给药 常用于微生物动物实验，将病原体等接种于被检动物脑内。,四、实验动物用药量的确定,先用小鼠粗略的探索出中毒剂量或致死剂量，然后用小于中毒剂量，或取致死量的若干分之一为应用剂量，一般可取11015。植物药粗制剂的剂量多按生药折算。化学药品可参考化学结构相似的已知药物，特别是化学结构和作用都相似药物的剂量。确定剂量后，动物也没有中毒的表现（如体重下降、精神不振、活动减少或其他症状），可以加大剂量再次实验。如出现中毒现象，作用也明显，则应降低剂量再次实验。用大动物实验时，开始的剂量可采用给鼠类剂量的1151

16、2，以后可根据反应调整。确定动物给药剂量时，要考虑动物的年龄和体质状况。确定动物给药剂量时，要考虑给药途径不同，所用剂量也不同。以口服量为100时，灌肠量应为100200，皮下注射量为3050，肌肉注射量为2530，静脉注射量为25。,第五节 实验动物的采血方法,一、大、小鼠的采血方法,（一）尾部采血1剪尾采血 需血量少时常采用本法。用手轻揉，或侵入45水中数分钟，也可用二甲苯涂擦鼠尾，使尾部血管充盈。消毒后，用无菌纱布擦干，将尾尖剪去约5mm，从尾根向尾尖推挤，即可收集到少量血液。用此法每只鼠一般可采血10余次。小鼠每次可采血0.1ml，大鼠约0.4ml。2切割尾动脉或尾静脉 用锋利刀在尾静

17、脉或尾动脉切开一小口，血液自行流下，几条血管可从鼠尾交替切割。此法主要适应于大鼠。3尾静脉穿刺 方法同大、小鼠的尾静脉注射给药。此法主要适应于大鼠。,（二）眼眶后静脉丛采血,用710cm长的玻璃取血管，将其尖端折断，使其锋利。将取血管浸入1%的肝素溶液，干燥后使用。采血时，左手拇指及食指抓住鼠耳之间的皮肤使鼠固定，并轻轻压迫颈部两侧，阻碍静脉回流，使眼球充分外突，提示眼眶后静脉丛充血。右手持取血管，将其尖端插入内眼角与眼球之间（如图所示），轻轻向眼底方向刺入，小鼠刺入23mm深，大鼠刺入45mm深，当感到有阻力时即停止刺入，旋转取血管以切开静脉丛，血液即流入取血管中。,采血结束后，拔出取血管，

18、放松左手，出血即停止。亦可同时用消毒纱布轻压眼部片刻，同一动物可反复交替穿刺双眼多次。小鼠一次可采血0.20.3ml，大鼠一次可采血0.51.0ml。,(三)心脏采血穿刺法 麻醉，固定，消毒皮肤。在左胸34肋间用左手食指摸到心搏最强处，右手持注射器垂直胸壁由此进针，插入心脏，心脏采血时，动作要迅速，缩短留针时间，以防止血液凝固。开胸法 打开胸腔，直接从见到的心脏内抽血。亦可剪破心脏，直接用注射器或吸管吸血。（四）大血管采血 把麻醉的动物固定好，分离暴露颈静脉、颈动脉或股动脉、股静脉，用注射器穿刺抽出所需血量。也可插入导管，反复采血。（五）摘除眼球采血 此法常用于鼠类大量采血。采血时，用左手固定

19、动物，压迫眼球，尽量使眼球突出，右手用眼科弯镊迅速夹住眼球根部，将眼球摘除，将动物头朝下，提起动物，血液很快从眼眶内流入已准备好的容器中。此法一般只适用于一次性采血。（六）断头采血 用剪刀迅速剪掉动物头部，立即将动物头颈朝下，提起动物，血液可流人已准备好的容积中。,耳缘剪口采血 消毒耳缘后，用刀片或剪刀割（剪）破耳缘，在切口边缘涂上20的柠檬酸钠溶液，防止血液凝固，则血可自切口处流出。此法每次可采血0.5ml左右。足背正中静脉采血 固定豚鼠，将其左肢或右肢膝关节伸直，足背消毒，找出足背正中静脉，左手拇指和食指拉住豚鼠的趾端，右手将注射器刺入静脉，拔针后立即出血。心脏采血 同大、小鼠的心脏采血（

20、穿刺法及开胸法）。,二、豚鼠的采血方法,三、家兔的采血方法,耳缘静脉采血 具体方法同兔耳缘静脉注射。本方法为兔最常用的采血方法一次可采血血510ml，可多次重复使用。耳中央动脉采血 在兔耳中央有一条较粗的，颜色较鲜红的中央动脉，由于兔耳中央动脉容易痉挛，故抽血前必须让兔耳充分充血，采血动作要迅速，采血后应立即压迫止血，此法一次可采血1015ml。心脏采血 具体方法与大鼠、小鼠的心脏采血方法类似，经左侧34肋间垂直胸壁穿刺，约3cm即可。经67天后，可重复心脏采血。,1前肢背侧皮下头静脉采血 前肢背侧皮下头静脉位于前肢背侧，固定犬后，用橡皮管结扎使静脉怒张。操作者位于犬的前面，注射器针头由前肢的

21、上l3处刺入静脉，直接抽取血液，抽时速度要稍慢。2后肢外侧小隐静脉采血 后肢外侧小隐静脉位于后肢胫部下13的外侧浅表皮下。3颈静脉采血 将犬麻醉后固定，取侧卧位，剪去颈部被毛，用碘酒、酒精消毒皮肤。将犬颈部拉直，头尽量后仰。用左手拇指压住颈静脉入胸部的皮肤，使颈静脉怒张。注射器针头沿血管平行方向向心端刺入血管。采血后注意止血，这种方法可取较多量的血。4股动脉采血 本法为采取动脉血最常用的方法。将犬卧位固定于解剖台上。伸展后肢，暴露腹股沟三角动脉搏动的部位，剪毛、消毒，左手中指、食指探摸股动脉跳动部位，并固定好血管，针头刺入动脉后可见血液流入注射器，抽血完毕，迅速拔出注射器，用干药棉压迫止血23min。,四、犬的采血方法,第六节实验动物常用手术方法,一、手术基本操作 术前准备、切口、分离、止血、缝合等。二、颈部手术 其目的在于暴露气管、血管并作相应的插管以及分离神经等。颈部手术包括气管分离术和插管术、颈总动脉分离术和插管术、颈外静脉分离术和插管术、颈部迷走、交感、减压神经的分离术等。三、股部手术 包括股动脉、股静脉的分离及插管术、股神经的分离术、股部坐骨神经分离术等。四、其他手术 输尿管插管术、动物脏器摘除术等。,第七节 实验动物的处死方法,一、颈椎脱臼法 二、空气栓塞法 三、急性大失血法 四、过量麻醉法 五、CO2吸入法 六、击打法 七、化学药物致死法 八、断头法,