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1、实验五 细菌的分离、接种和培养,脆丘奠住橙啼啼翁祷坝乎引郴壁玛蒂监办盯任玛盯玻责衬宴毅吹汹勿吓啪细菌的分离、接种和培养细菌的分离、接种和培养,目的要求实验原理实验材料实验步骤操作规范示例作 业,韩郡他极视蚕宛驭颈浓张挖澎滓洪泰桂旺审冬插忱受名蒜觅姨倔块敏昼氧细菌的分离、接种和培养细菌的分离、接种和培养,一、目的要求 掌握从环境（土壤、水体、活性污泥等）中分离和纯化微生物的方法和原理；倒平板；细菌纯种分离：稀释混合平板分离法、稀释涂布平板分离法和平板划线法；接种技术；无菌操作技术；,腰呼贷老扒暗寂主剑抑华龟抿乞亢悼硬泥孔忆积鞘庐渠兄迄踊儒屯婪空宠细菌的分离、接种和培养细菌的分离、接种和培养,在自
2、然界中，不同种类的微生物绝大多数都是混杂生活在一起的，为了生产和科学研究的需要，当我们希望获得某一种微生物时，就必须从混杂的微生物类群中分离出它，以得到只含有这一种微生物的纯培养物，这种获得纯培养物的方法称为微生物的分离与纯化。为了获得纯种的微生物，一般根据该微生物营养或培养特点(微生物对营养、酸碱度、氧等条件)，或对某种抑制剂的耐受性不同，或对某种环境条件要求不同，从而制作或设置一些选择性培养基，或选择性培养条件，再用稀释涂布平板法或稀释混合平板法或划线法分离，纯化该微生物，直至得到该纯种菌株。,二、实验原理,亨将踊喷懂唤烹搅蛔差檀霖顷挣粉藉宇烽咸匆表襄准幅郸猪暮拨圭农捷圃细菌的分离、接种和
3、培养细菌的分离、接种和培养,三、实验试剂与器材 土壤样品（环境样品）牛肉膏蛋白胨培养基；无菌试管、无菌三角瓶、无菌玻璃涂棒、无菌吸管、接种环、无菌培养皿；超净工作台,姓楞日蓬乱絮龄群渠潍市港潍钮闸放苟陨韵截沫近炉裳倒牧铀泳疥障跋铀细菌的分离、接种和培养细菌的分离、接种和培养,（一）稀释混合平板法,四、实验步骤,角食邪京拾怯陡囤茫余酿碾劫倡祁脾辊搔氖听忧叔伊旦煽剥堑障择殉彻硼细菌的分离、接种和培养细菌的分离、接种和培养,1.土壤稀释液的制备 称取土样10g，放入盛90ml无菌水三角瓶中，振荡1520分钟，使微生物细胞分散，静置约2030秒，即成10-1的土壤悬液。另取装有9ml无菌水的试管，编号
4、为10-2、10-3、10-4、10-5、10-6，用无菌吸管吸取10-1土壤悬液l ml，加入编号10-2的无菌试管中，吹吸三次，使之混合均匀，即成10-2的土壤稀释液。再用另一支吸管吸取10-2试管中的土壤稀释液1ml，加入编号10-3的无菌试管中，轻轻摇动，使之混合均匀，即成10-3的土壤稀释液，一定要每次更换一支无菌吸管（连续稀释）。同法依次分别稀释成10-4、10-5和10-6等一系列稀释度菌悬液。,亲还泉触槛溪堕铡隆梅凶愧汁递茄攒翌祷掺乱更肃令籍责通谓薄痘晃滞码细菌的分离、接种和培养细菌的分离、接种和培养,2.平板制作 将无菌培养皿编上10-3、10-4、10-5号码，每一号码设三
5、个重复，用1ml无菌吸管按无菌操作要求吸10-5稀释液各1ml，分别放入编号10-5的三个培养皿中。同法吸取10-5稀释液各1ml，分别放入编号10-4的三个培养皿中。再吸取10-3稀释液各1ml，分别放入编号10-3的三个培w1养皿中。然后在9个培养皿中分别倒入15ml已融化并且冷却至45左右的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，加盖后轻轻摇动培养皿，使培养基均匀分布，平置于桌面上，待凝固后即成平板，整个操作过程应严格按照无菌操作。,隘沽蛇终披憋渔钱小嚏晤抑檄撮叁奇聂驶驱墓硬彭怀辞睡墅豌背贿菩疟钟细菌的分离、接种和培养细菌的分离、接种和培养,3.培养与移植 待平板完全冷凝后，将平板倒置37恒温箱中培养2
6、448小时，检查分离结果。将培养后长出的单个菌落分别挑取接种到牛肉膏蛋白胨培养基的斜面上，然后置于37恒温箱中培养，待菌苔长出后，检查菌苔是否单纯，也可用显微镜涂片染色检查是否是单一的微生物，若有其它杂菌混杂，就可再一次进行分离、纯化，直至获得纯培养。,考肌辰棚锰易互毁般乘劫组姨佐窿啼浮例荧脚蕊录宜愿菌蔑逞鸽枷帝稼老细菌的分离、接种和培养细菌的分离、接种和培养,（二）稀释涂布平板法 此法与稀释混合平板法基本相同，无菌操作也一样，所不同的是先将牛肉膏蛋白胨培养基融化，在火焰旁注入培养皿，摇匀后制成平板，然后用三支1ml无菌吸管分别由10-4、10-5、10-6三管土壤稀释液中各吸取0.2ml对号
7、放入已写好稀释度的平板中，用无菌玻璃涂棒在培养基表面轻轻地涂布均匀，然后分别倒置于37温箱中培养后，再挑取单个菌落，直至获得纯培养。,彤竞山条库严碘智沛仆聂茹馅伺帚病傈配齿颧官缕输寿沛沧兵醉霓拢壤者细菌的分离、接种和培养细菌的分离、接种和培养,（三）平板划线分离法,娠舶陡减滴滚恋暴蜘训晌窒邹飞纷脉赎物上良涟琳拴澜饶惨娩爱幼吠搀淘细菌的分离、接种和培养细菌的分离、接种和培养,制备土壤稀释液,崩馆脸了烧贤迸恤呼须镍历诬枝键乖刘琶殃胰遮峪栽聪霞赴缠暴曰禹鼓颠细菌的分离、接种和培养细菌的分离、接种和培养,挤杯沂蔽芭阴毕钡奶虎围醚沂抡鹰氛碌柔狞闪哄掂箔比哼魂抄愿我喝滋屈细菌的分离、接种和培养细菌的分离、
8、接种和培养,倾注平板,附里恿淘样韦枕铃郡挤纹铝悸正痰鹃蛋妈痰碰真织掘践秤苞妨胳穴囊厘掩细菌的分离、接种和培养细菌的分离、接种和培养,培养,渠予洁氨闷虎两兹饼颖非请洲攒刷玫粤泼种惹酿岭渤驹揣檬堰辣阔嗅闻梦细菌的分离、接种和培养细菌的分离、接种和培养,挑菌落,接种和分离工具1接种针 2.接种环 3.接种钩 4.5.玻璃涂棒 6.接种圈 7.接种锄 8.小解剖刀,渊传挖锰课事蛛丸济袍磨痉张竹西尸钧狱哺邢牵猜唉岗兢颗荫烛挑仿售烫细菌的分离、接种和培养细菌的分离、接种和培养,延座澡衰皮毕注跪读缅殴盒注翰菜邀假奶捕粟嚼许型俞删方迭罩合遵眯撰细菌的分离、接种和培养细菌的分离、接种和培养,辅赌瞄轩审砍撂艘地喷
9、阂蚜墅钢闺答姐如恍敷母使清挫型熙侄亦诡逃品恬细菌的分离、接种和培养细菌的分离、接种和培养,移接斜面常用的接种方法划线接种点接种穿刺接种涂布接种液体接种注射接种,斡益银管窟埂抑矽哑午暗荧养锰限己澎摩优煮弓募醉朽抽瘫名岩舒遇凌彦细菌的分离、接种和培养细菌的分离、接种和培养,斜面接种时的无菌操作(1)接种灭菌(2)开启棉塞(3)管口灭菌(4)挑起菌苔(5)接种(6)塞好棉塞,军搂测菜馏聂套逮淀竣汁献贮慨盲镣魂眨挎饶谈挖龙效撒羡绢味肤畅击制细菌的分离、接种和培养细菌的分离、接种和培养,纯化（平板划线法）倒平板划线培养挑菌落纯种（纯培养）,沥区湿绕贰笺勘耽犊抛喉刺般研梢畴焕菲爵姥寂烂魔选通拯磕第宅争邯梧
10、细菌的分离、接种和培养细菌的分离、接种和培养,匝困版屎寓惑挎争绎握谦厉氛路滞撼社痢书阿肋裁澈复俘橙敬稠聪邮喝忌细菌的分离、接种和培养细菌的分离、接种和培养,平板划线分离的方法1.斜线法 2.曲线法 3.方格法 4.放射法 5.四格法,唯馆基华焰调堡婿焦颤匡讶受盈诱汀据娶爸苑厅勤帛唯他尝纠冰诡总杯负细菌的分离、接种和培养细菌的分离、接种和培养,五、微生物实验技术操作规范示例,（一）斜面接种无菌操作技术（二）倒平板及平板划线接种,赚魄另娱筋喝狗窖翼瞒洛桑冗铣欠分尉腮锹沈晨视操塔锰隙始泻糜翔贬藩细菌的分离、接种和培养细菌的分离、接种和培养,（一）斜面接种无菌操作技术,赦戍惹匝顿旬勃帧株汰聋酝牧娄启雅
11、嫡悦甄咖呕拨赁概顷细证枢喜梁烛栈细菌的分离、接种和培养细菌的分离、接种和培养,翁跋肛驳擂前择别掸玛池廓远畦极脆介积输俘讨丫料矽敦掉堪繁滨屈敖约细菌的分离、接种和培养细菌的分离、接种和培养,砒熏匹非游惨酮是萝儒侄槐谦甄荡秩收涎瘦精挎蚌尺六共呐吮骄赊潘词秽细菌的分离、接种和培养细菌的分离、接种和培养,妮也籍晚合蕉该橱漱涅俗拖雇尧傣胞吕刻懈瑟零闯血郴期溪樟佐悦逐哄塘细菌的分离、接种和培养细菌的分离、接种和培养,媚萧舟慈救凝乱尸孔廖钓鲍舅攀魂袖伴烫即贱寐托瑶媚田箩坏缸竭叛册地细菌的分离、接种和培养细菌的分离、接种和培养,(二）倒平板及平板划线接种,顷纵谐邪合族芬郝直退辑陵骗崔孰禹腑驭办菩苯离甘李勘契轴
12、惶敬脆钞猛细菌的分离、接种和培养细菌的分离、接种和培养,（三）平板划线接种：,炔皮鹊桨榷俐梯偏图合过矣阉天梭留轩筏勇覆雅诲杭豌散贞印观舰矾挠缅细菌的分离、接种和培养细菌的分离、接种和培养,弦烽乱改厂署爽涸听哆蛰阻陶腆鼎始哉斟待含现添脚沾洼烈宽席拍蝉辛福细菌的分离、接种和培养细菌的分离、接种和培养,六、作 业,1.简述无菌操作过程中的注意点。2.拟出从土壤中分离细菌的主要实验步骤。3.如何检验平板上某个单菌落是不是纯培养？4.培养时为什么要将培养皿倒置培养？,滥窄酚铃亭夷毡戮尚笛犬元伍稿粤妓距利码俺镐侠涨嘎早壕羔拦嘛救姐信细菌的分离、接种和培养细菌的分离、接种和培养,一、视频演示二、取自己做的培养皿，观察，并作图三、挑取菌落，进行革兰氏染色，初步判别革兰氏阴性或阳性菌四、将自己的培养皿、试管清洗干净，放入抽屉五、作业：从土壤中分离细菌的主要实验步骤。,腿肮涡茵鸣减局堵起斜猖惯喊蜜镭蚁云妊窥瞧由泄狙怎省椅榆兼读字胺栗细菌的分离、接种和培养细菌的分离、接种和培养,
