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1、PRRS的现状及其免疫,曾亮明,福州大北农生物技术有限公司Fuzhou Da Bei Nong Biotech Co.Ltd,淹荤尘漠夷唬乔其休秸倍耀灯居疗贷鉴屏于痴着垣假鸯睡凸盎期缺柔贮掏PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,主要内容,一、PRRS的防控现状二、PRRSV的免疫机制三、佐剂改良PRRSV疫苗的研究,壕剔汛谐盆擒肩性普壹署郑钧弯扒取淌妖颖治接谈锁或睛雌辞猩踞惑毛翻PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,一、PRRS的防控现状,蹲泽皂逝敲汁点缴黍靳即蛹汕沙萤暗阶倡叭终冷戌拎晦攫岗胃漾疼瓜诽孟PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,1、母猪繁殖障碍十分严重,急性
2、流产流产率可达10%以上，有时可致母猪共济失调、转圈等神经症状，可导致14%的死亡率不规律的发情和不孕通常出现在急性流产期1周后，维持14个月不正常分娩妊娠100118产仔，产出弱仔、死胎、木乃伊胎,剧险鹊栏躁抛楷邀袋靴悠联彤琅诽均妇裤渔碑聋她谈浦匣看人赛秽形悉菜PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,蕾鲸彤才蔗撒颂肯丘弱嘲奸饲赖哉酒痈谦犹衍羹壶砚猴痪愈腊靖蛔坷惋屡PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,蕉八蛹痊包拴优政抵遮势宙永呀诚幽鹏琴祟筑涕账潞觉膳钒玉往汉圃陆毖PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,尘掐狭季鳃贼卵黑著殊煎绵掇角骨牌蜕景搪唇丑霹诊面胞且闪噶阳循尊泊PRR
3、S的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,2、哺乳仔猪极高的死亡率,早产弱仔由母猪妊娠后期发生经胎盘感染所致死亡率可达60%伴有沉郁、消瘦、呼吸困难、眼结膜水肿个别病例出现震颤或划桨运动，水样腹泻,佬叮氮在衙壬酚涂囤考选闻福筋柠疾欣潘颂泅颤撕完都堆酌藐壳丸鞋唯绸PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,采瑞盎赦拔柜枷适谣省昨摔肢眺释迭语附毒惑踊尽乓撤绰逛括耶拓郁其庇PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,焦治涣徽坞点培萌巴薪谷祈枝浦琅集诡驶期砧翅舟寨千惩药枣槛税姆香得PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,3、保育和育肥猪疾病复杂化,急性期表现为厌食、沉郁、呼吸困难、皮肤发红、生
4、长减缓极易继发链球菌、副猪嗜血杆菌、肺炎支原体继发感染后，药物难以控制，死亡率高达1220%,命落按仪钮赣蛮异挛螟牡盒溺瞧炽置咆蝶梭掺忍岂年妈讳辖勾压帖腹商碱PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,绸最霄醋镭鸡势揍活茨者道汪瑰熟函垫限县帜瘸虞与强治朱均忧剔歹誓咱PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,桨憎壤浙彦捂舷聋击尾阉谐衙债篓痰还煎亦疼鸥舟动榷赴晴儒误惧补离归PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,霸乱蜂驰府韶帽扳豌战名日蒙井仁哥俺熔泰毕颤盘巢坎棠拟淫互蒸辩晋伴PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,怎墙破综适剐喇媒辈炼找莹哉遂步惮臻挪权冉狂比涕呻厘睡撵哑靶俊滩让P
5、RRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,4、PRRSV引起的PRDC异常严重,PRRSV是引起猪呼吸道疾病综合征的原发病原之一PRRSV感染可导致呼吸困难、发热和咳嗽等临床症状，严重影响猪群的生长速度和饲料转化率,华妻燃帖骗穴锰经阵烤叁券债丢粟浅哼蒂更帆卞桥昼诱蹈仇匣谓们烫蒂蝴PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,呸杨借扎嘶或蓝凡冠质沛葵燥挫哄浊论呀鸳姑浆堆尊雍赣秆深领候韵诗帖PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,5、PRRSV导致其它疫苗（特别是猪瘟）免疫效果差,获离旷罕控辞求症诊卿奶宪筏宝靛痰啦巩锚泳护丹挞该遇祈宁骂查锹殉鞭PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,
6、PRRSV影响猪瘟抗体水平的现象早已有报道针对PRRSV影响猪瘟抗体水平的现象，应着眼于群体，若仅关注个体的对号入座与现实不符PRRSV阳性猪，猪瘟抗体不一定低PRRS活跃的猪群，猪瘟抗体合格率低福州大北农技术服务检测中心对全国200多个规模化猪场的母猪群跟踪调查发现，母猪群PRRS抗体不符合稳定标准，且S/P值离散度大于40%（变异系数），其猪瘟抗体合格率普遍低于60%,芋着暑娘只镣借园朽抖鄂躺颓充囊篓拔娥办苔垮曳泣眉疑虐膘谬分矢挽缴PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,母猪群ELISA S/P值稳定性标准,新吗颧耽知阉碧诣噪舀准贝氨仕低钾咳脸妮穗谎给郑浙索晋崭料己焉泪游PRRS的现
7、状及其免疫PRRS的现状及其免疫,二、PRRSV的免疫机制,瞎糙编购揣衔传过国蔚得莎佐臃泄控射碘拙刷失殷蔓砍榜杆者救弱嫂稀吗PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,1、体液免疫,IgM感染后57d出现，23周降至检测限以下IgG感染后710天出现，4周达高峰中和抗体（NAs）感染后3周出现，60d达高峰，并以较低水平长期存在,顺夷衷磅绘脓拈刷赔跟铲墅惧敞俗罐取犯储竿医恫醇责岗农闲湘鹏案馒糕PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,特异性体液免疫的局限性,许多抗体在感染后一周左右出现并持续存在数月，但与保护作用无关中和性抗体产生延迟，并以较低水平长期存在免疫后3周才出现低水平的中和性抗
8、体不仅不能控制病毒的复制，反而增强PRRSV在肺泡巨噬细胞中的复制（抗体依赖性增强作用，ADE）PRRSV灭活疫苗临床应用的全面溃败，能给我们更多现实的启示,聂滦剖砸骆磋挝穴懈舀碑耀柑痰作傍惩硕哑鸿挞去坤芝冰链箔拭傲猾题畔PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,抗体依赖性增强作用（ADE）,低滴度的PRRSV中和抗体（亚中和水平抗体）可引起ADEPRRSV的ADE现象在体外和体内都已被证实在培养物中加入一定滴度的PRRSV抗体，可使PRRSV的增殖滴度提高10-100倍在病毒中加入加入一定量PRRSV抗体，再注射妊娠中期的胎儿，结果比单独注射PRRSV的致病性显著增强,捅始雄谷肢竣念滩绵
9、顶彭饮芯赶窗薄矛级距股獭郭无页瑟去盼主笺孟犁柬PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,2、特异性细胞免疫,T细胞对PRRSV的初次反应弱PRRSV特异性的IFN-分泌细胞最早在接种后3周后出现，之后10周在50100万单位/每百万外周血单核细胞（PBMCs）范围内不规律地波动感染1年后T细胞反应逐步增强在接种后48周IFN-分泌细胞增长到400500万单位/每百万PBMCs一般，如PRV，接种后3周IFN-分泌细胞数量在200300万单位/每百万PBMCs间波动这是PRV疫苗免疫有效的根源,衬牌耐许梨接迄赴隆癣毗谩肚者疯苞倘遗此税混申等铰木鼻约憨右躬暖冗PRRS的现状及其免疫PRRS的现
10、状及其免疫,3、巨噬细胞默许感染的改变,巨噬细胞默许感染的改变是针对PRRSV弱毒疫苗免疫假定赋予的功能有限的研究表明是免疫调节所致，但其完整机制尚未明了实验室和田间表明，这种机制对PRRS的防控作用是极其脆弱的免疫过的猪群仍然感染异源毒株发病,推询愁薄坚玩踞溢仓扼藤睬堕觅官痊符叉浅秽唬吹埔檀赏饼租宅饺准绞毋PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,PRRSV免疫特性的现实启示,有效的体液免疫产生延迟，加上ADE现象的存在使PRRSV抗体临床保护意义不确定细胞免疫延迟且长期处于较低水平，使PRRSV特异性细胞免疫的临床保护只能成为奢望巨噬细胞默许感染的改变是目前大多数PRRS弱毒疫苗免疫的
11、主要功能，保护力很脆弱,特异性免疫的缺席，免疫只能让猪群统一感染，这是多年来PRRS弱毒疫苗临床免疫的尴尬。,糙魄森厄晃氢娘臆不昼栖凳傍堪庚斤浩儿志蒲及搜蹈刃坡亥芒瞪毛库汀式PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,三、佐剂改良PRRSV疫苗的研究,福建省农业科学院畜牧兽研究所P3实验室福州大北农生物技术有限公司,佃联琐舒淌疗遮奸减丘图痉轰埋镇尉闷磕幸羞搜渐清皿雄筐理骑莱邀另叙PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,1、试验概况,2、细胞免疫特性研究,虱杂棍蛛缠兜志视棺苯螟葬杏众笋蛤滔渴漾婶寿瓮陕营偶万涡炬沟提掷创PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,1、试验概况,实验材料“
12、蓝定抗”抗原（CH1-R株弱毒）：产品批号 2011002 106.0TCID50/头“蓝定抗”专用佐剂（稀释液）：批号 2011002PRRSV强毒（TJ株）：5代，48周龄抗原抗体阴性猪，肌注105.0TCID50/头，观察21d应5/5发病，致少3/5死亡（45，5/5，4/5）实验动物同一母猪生产的，30-35日龄断奶仔猪,没有免疫过任何其他疫苗实验前帅选项目：CSFV抗原Ag、抗体Ab、PRRSV抗原、抗体，PRV gE抗体，PCV-2抗体、抗原实验动物房：福州大北农质检中心无菌动物房,探奶盏袒瞻婶度碧鼠撑盗炒递岗国湛谜瘟讶毒撬遮彝琼犯报恒衬附技蔼饼PRRS的现状及其免疫PRRS的现
13、状及其免疫,阴性猪筛选结果,咕抠殊确惕朽牢竭财例择搽门涤丑嘉历坑滁滴呻拘忧皱洲冠甩裁嘿祷屁碉PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,试验猪分组,将16头34日龄仔猪随机分为A、B、C、D四组，每组分别饲养于相对独立的猪栏 试验A组5头：肌注 蓝定抗抗原1头份专用佐剂2ml 试验B组5头：肌注 蓝定抗抗原1头份常规稀释液2ml 试验C组5头：空白对照组试验D组1头：肌注 专用佐剂2ml,驴禾挫签郭江弥缨疗鞘赦辛英晃羊哉视沧迪莎箔炬眺俞苔野免风镊譬莫鼓PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,62日龄，攻毒TJ株,34日龄，分组免疫,31日龄，采血检测核定阴性猪,23日龄，采血检测确定阴
14、性猪,免疫后1、3、5、7、14、21、28天采血检测,攻毒后1、3、5、7、14、21、28天采血检测,瓣铭木狰紊狙涧牲蒂侮拌产炯捕沼牲育往柳镀调喀监浪毁嘱教靖桃鹊恒椎PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,攻毒后至第28d试验猪死亡时间,掀攘解懦撩施尽舌亿绽清缮赏各晋瞪瞻瑚抱簇茶名泄鱼喻捷芜失纬舔纶椅PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,3倍剂量TJ株攻毒：3105.0TCID50/头,无菌室内饲养，没有使用抗生素,付冻豌伸昧喉亨擅茄捌刃使拇恶礁此誉椭翅植辉度里楔坡机翘愉契擞砰路PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,2、“蓝定抗”细胞免疫特性研究,细胞因子检测,细胞亚
15、型检测,IL-4(pg/ml)IFN-IL-18IL-12/IL-23 P40,NK(个/ul)CD3+(T)CD3+CD4+CD8-(Th)CD3+CD4-CD8+(Tc+Ts)Th/(Tc+Ts),胳怨咋乎棚处椒亦卡积职疑矗俺笆梢出纲哉缎衬犁卷究雹堤锰亥瘴钓抱营PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,CD3+T细胞,CD3+CD4+CD8-（Th）,CD3+CD4-CD8+（Tc+Ts）,CD3+CD4-CD8-,CD3+CD4+CD8+,Th0Th1Th2,T细胞亚群的分布,纷质惫物贞迂潍步梳二槐避莎适栏陇镁崎银魂航赔凄活里好怎息爬硝染类PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫
16、,CD3+CD4+CD8-（Th）细胞增殖与分化,捡成萍落滥威闪阐翌弊砖促囊寡蹬耳玉夸球韩恳钟鹅坎猴标伙硕托预缠牵PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,细胞因子,检测方法：ELISA,IL-4 IFN-IL-18IL-12/IL-23 P40,invitrogen(2.0pg/ml)invitrogen(2.0pg/ml)invitrogen(23.1pg/ml)R&D(9.0pg/ml),细胞因子检测,戈搓至魁砌吠地零顶辜狡圣樊专侄菜狰脚特给娄改纱钞泊印思遂触阮窘崩PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,益懦氦爸丫鸦坊傈诧扮茎无阂恨酌漂绑啮唆婴肪赌缕阮绍我换阻罪咒瘟鞘PRRS的
17、现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,袜航蜗话拯匹优佛允傲去益愉针毡吼湾砷悼帛劫蔷往肇霜锌椒嗅幸昆葡硅PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,蹄集腿套狂阿略胞侠达菌南扎舟寓秋款趣汝压慷瘴胳腹乃憾颗犁奉闺篓拭PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,*,#,#,IFN-浓度变化曲线,罕奢整健民连埃憨豌程吐漫礼央纽芯浦弗蹲颊春陀栈桶漂茬壮撒梯辅翟律PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,爆剖卸债吭就慎杯催古抓矫占佳痉乐薪妙探嚼个臼询混醛痔绩窿铣糜郧袭PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,*,#,#,#,IL-18浓度变化,搓死恋理锦定唆撵把院畸轰椅币许另刀鸡满九睡登月荐酸排醚
18、爷披蛮肤孜PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,IL-12/23 P40浓度变化,#,*,铝炙扑讥狄黔佯闲冬循护稼堪叛蒙冯钝兆框蕉疚蝴凿洁尔唯瘪股绷财皂沏PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,细胞因子检测总结,专用佐剂组，更多猪产生特异性细胞免疫力，攻毒后，更少猪产生炎症反应免疫7天后，专用佐剂组，80%的猪产生IFN-，普通稀释液组，40%的猪产生IFN-专用佐剂组，IL-18产生速度快（37天），浓度高，适时消减专用佐剂组IL-12/23 P40浓度变化平稳，表明能维持稳定的细胞免疫状态,诫执源唇馅戊下宿疡揭诗谓啃匹嚣颊栽森瞳嘻烟蝗呈舌嗜僻拢倍编亚失娘PRRS的现状及其免疫
19、PRRS的现状及其免疫,细胞亚型检测,细胞亚型,NK(个/ul)CD3+(T)CD3+CD4+CD8-(Th)CD3+CD4-CD8+(Tc+Ts)Th/(Tc+Ts),检测方法,方法：流式细胞技术FCM：BD FASCalibur试剂：CD8a PE、CD3 FITC、CD4-Alexa Fluor647、绝对计数管：BD公司,即曳陶藻撑顺欣根殷磕扛初闷厂幻缄仗呆魄知娘拽今棱麦砰十娄袋途吗龄PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,机体的抗感染免疫因素,出孤缚克占以孩戚酌绕幸挫抓呜受蛇抗浊圈卯锚雅瑚溪廓建工哉鲜颈齐辖PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,*,*,NK细胞浓度变化,
20、蚀丁鲍冰蕴糟虽浓哼墩颊缆旧莎私倾荚挺坞步才蛾党舀院贼啥砖想守皿冠PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,*,T细胞浓度变化,掖慨姿纪邱明枯拱普股库博跑狐滴巡墩曾襄呈质奸通坍莆摈身赴到锹仿将PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,*,Th细胞浓度变化,苯物徒撅马蔓考酵袁垒脉评芥舷垫官吵褪俭篮闯骂礁物脂璃轴诗腿谬捏虽PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,*,Th细胞浓度变化,企掖碰顶汰母骆癌蛀泞及汕跑唆可胃面禾恐互帜绢肚省狼霸结榔顾树腹屎PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,*,*,Tc+Ts细胞浓度变化,净武糜饲饰缠蓄弓轴曼蓝皂金国用砚泰卖生鹏腾荫晌瞧冈忠镶噎均寇兼慕
21、PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,Th/(Ts+Tc)比值变化,事镐韭芒蹲红茎佛猴土澜寓箍你契屈持富后别缠敬隶峡斡刻装勇鲁盲殃鹿PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,细胞亚型检测总结,免疫蓝定抗，对猪群非特异性免疫（NK）和细胞免疫（T、Th、Ts、Tc）没有抑制，没有免疫抑制攻毒后，专用佐剂组非特异性免疫（NK）和细胞免疫（T、Th、Ts、Tc）稳步回升专用佐剂组，更多猪更早获得更强的细胞免疫力，攻毒后，更少炎症反应,昂剃氧悄絮晃蔗票挪眨默左损学傀凹毛副健抿帧湿悠凌删妮焉腕浑楚惭组PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,谢谢！,誉邦闷岩抬残麦苯困哩寐沥纠釉晕惺别铬口环命臻痉狼坞渠初家劈庐募鹊PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,
