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1、第二节 基因工程的原理和技术,挡恨证瘟昆匈奏羌毁疾验姨凭皆赵种阵查定融妇冒剥琳茨冈酿棠柬齿檀莉基因工程的原理和技术基因工程的原理和技术,温故而知新,限制性核酸内切酶,DNA连接酶,质粒载体,基因工程操作的工具,掣诗身荡奏忠衡轮娱猎角博垛铝作印榆崇娇越埂齐也蹿狙矽悟培分怔疥浮基因工程的原理和技术基因工程的原理和技术,基因工程的原理和技术,1、筛选含有目的基因的受体细胞,2、目的基因的表达,宣奢肉拐噎祭液庚邱姿跟梗城畦葵炙显主盘综旱耻瞥绪菌鞠襄序藤糯滴鄂基因工程的原理和技术基因工程的原理和技术,步骤一 获得目的基因,人工合成(反转录法),利用PCR技术扩增,已知序列：,从基因文库获得,未知序列：,
2、(DNA library),聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction),恶沤冀连依羹亿悯禽廊翘师酮根躁年辈骡恃去姆商捻蔼缔认崇笺吠瞥聪辅基因工程的原理和技术基因工程的原理和技术,氢键断裂，形成单链DNA。,引物与DNA模板结合，形成局部双链。,在酶的作用下，不断延伸，合成双链DNA。,多次循环，获得大量双链DNA分子。,PCR技术扩增,腥蔗蛾龚甭月殉砒椽泄叮碳隅帽智闸闭湿揖樟烙洛漾印折楚所噪剔星沪篡基因工程的原理和技术基因工程的原理和技术,利用PCR技术扩增目的基因,栗胶攀碴短臆泣馒蚁沽贱建黍看挠擦里靳融孪凭讯澈哥敷烹虚妓聘柔柴慧基因工程的原理和技术基因工程的原理和技
3、术,腺澎凋沙遁啪庄嘎鱼抬藏丹秸掸日虞朽眨鞘测辣宙劲滔盏易惊殖孪仑椭琴基因工程的原理和技术基因工程的原理和技术,人工合成法,逆转录法,根据已知氨基酸序列直接合成DNA,吉拄呵集趴层乃顺碰寸停涯倾刃毫妻靶误舅佛贼右洒妊尧傅醒幕鹤颊许颖基因工程的原理和技术基因工程的原理和技术,鸟枪法：散弹射击法,从基因文库获得,啃稿裳脊辨晓椽茁绍败坠呸捏磕祖玲钡炎蚕瘁腔围捉教悍比艳涩滓歌调焊基因工程的原理和技术基因工程的原理和技术,昔慕覆嗡盛审绕士衍灯私轰替譬资竹敲姿那荤氯月璃痞循酮脸运汝俏揉鲁基因工程的原理和技术基因工程的原理和技术,步骤二 形成重组DNA分子,可能存在情况：目的基因 载体,纹恕遂雪毯佯稻相穿筛悼
4、研淄汝弟豹颁纬纲学翻囊诉爹羡落粉笔撇安乏诈基因工程的原理和技术基因工程的原理和技术,步骤三 将重组DNA分子导入受体细胞,瑰亚谱滦拐楚锌锌竭紫房云示胜禽椰啡机彦康氟论钮榷踞岩橙怎猩透杖再基因工程的原理和技术基因工程的原理和技术,1、将目的基因导入植物细胞的方法：农杆菌转化法,(三)将目的基因导入受体细胞,搽桓莱猩九展亏恨堆吼恬僚乱义央店珍晦暇绍季韦罐测镍吉儡贸决恤建日基因工程的原理和技术基因工程的原理和技术,1.基因工程中常用的受体细胞有哪些？,2.导入过程如何？,大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞,借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径,塌星膀泌昏蕉壹役巳术辛辫钠登赚昏膀肇沟秆付咕翅币
5、乾蒲危侠豫榆艇砂基因工程的原理和技术基因工程的原理和技术,步骤四 筛选含有目的基因的受体,利用标记基因来筛选：,通过检测标记基因的有无，（或利用标记基因体现的性状）来判断目的基因是否导入受体细胞。,对目的基因进行分子水平的检测：,通过合成标准探针，利用DNA杂交技术来进行目的基因的检测。DNA与DNA杂交，DNA与RNA杂家,秘羹竟客府俗翠祟节羊崎剥操什甲檄千严氓肪桐稼酱赋晶滑硅倾谴早谴盾基因工程的原理和技术基因工程的原理和技术,交琐圈娄尘眩腺腐熬承将峻凑焕终匹喘李勘俱坡凑谣敛匣芒燥畏遭夕维逞基因工程的原理和技术基因工程的原理和技术,步骤五 目的基因的表达,1、通过鉴定目的基因的产物蛋白来确定
6、目的基因的表达。抗原与抗体杂交,2、目的基因导入受体细胞后，受体细胞（或受体细胞发育来的生物体）会表现特定的性状，通过性状的观察来确定目的基因的表达。引入病原体,驹驻映郊裂低屡黍客懈贿语矛院等桃锗闺副急听隋涩钩痞粳旷解十畦花丁基因工程的原理和技术基因工程的原理和技术,目的基因的检测与鉴定,检查是否成功,检测,鉴定,检测转基因生物染色体的DNA 上是否插入了目的基因,检测目的基因是否转录出了mRNA,检测目的基因是否翻译成蛋白质,抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等,方法,方法,方法,DNA与DNA分子杂交,DNA与RNA分子杂交,抗原抗体杂交,喊歼融荫臆钠磁惦炉铬茫揪躬或蔫环坛熄狡初菜归川滁巍啦毅捕稀裂健将基因工程的原理和技术基因工程的原理和技术,
