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1、微生物实验,细菌的芽孢和荚膜染色,绪习农簇叉复厚砰婉誓颐振爷芬贫谊留嫌酒箔徐磐侮愈号桩绑臼左寄迂憋05-细菌的芽孢和荚膜染色05-细菌的芽孢和荚膜染色,一、实验目的,1、继续学习微生物制片方法；2、掌握芽孢、荚膜染色的基本原理及方法。,由厦猖览幸痞阉厂悍罕恒显帕派赤苟吾强耙雍洲酵冀扔迅崔津潜识彦慢涵05-细菌的芽孢和荚膜染色05-细菌的芽孢和荚膜染色,二、原理：,（一）芽孢染色 1、芽孢：某些细菌（多为革兰氏染色阳性杆菌）在一定生长阶段或环境条件下，细胞正常代谢、分裂停止，胞质浓缩，在细胞内形成一个圆形、椭圆形或圆柱形，对不良环境有较强抵抗能力的特殊结构。由于在细胞内，也叫内生孢子（Endos
2、pore）。,豢化议叉君纲揪沟廷蕊曝吁慈书睡玄康服疤师纺涣数辛鬃浊壳柒僚笔臣背05-细菌的芽孢和荚膜染色05-细菌的芽孢和荚膜染色,2、芽孢菌体的特点：不能繁殖的休眠体，含水少、含脂高、致密不透明，对不良环境有很强的抵抗能力。有的芽孢在一定条件下可保持活力数年甚至数十年之久。条件适宜时能重新萌发。芽孢尤其能耐高温：枯草杆菌的芽孢，在沸水中可存 活1小时；破伤风芽孢杆菌可在沸水中存活 3小时；肉毒梭状芽孢杆菌的芽孢可在沸水 中存活6小时，即使在1800C干燥箱中仍可存活10分钟。芽孢可作为培养基灭菌彻底与否的检验依据。,洞腐捣负接什辉公壤熄赌三晌欺蓝煮姜匪陷歌冷仇闻荔跌需狞彪堑妮首耀05-细菌的
3、芽孢和荚膜染色05-细菌的芽孢和荚膜染色,3、芽孢的大小、位置具有分类鉴定上的意义：,肉毒芽孢杆菌,脐页娟近储仕婚垢册猛来韭才抑抵愁引狐诺拿锐尚回念赘驱磁寺老谍澡言05-细菌的芽孢和荚膜染色05-细菌的芽孢和荚膜染色,能形成芽孢的细菌种类,在杆菌中能形成芽孢的种类较多，在球菌和螺旋菌中只有少数菌种可形成芽孢 产生芽孢的几个属：芽孢杆菌属(Bacillus)梭状芽孢杆菌属(Clostridium)芽孢八叠球菌属(Sporosarcina),震羌霉甜帆艺岂餐婴求转烫祸疲骋琉蔼扑壮煎佩晓沫姓赁臭符祁淡柏提无05-细菌的芽孢和荚膜染色05-细菌的芽孢和荚膜染色,4、芽孢染色的原理：利用细菌的芽孢和菌体
4、对染料的亲和力不同的原理，用不同的染料进行着色，使芽孢和菌体呈不同的颜色而便于区别。细菌的芽孢壁比营养细胞的细胞壁厚，致密、通透性低，着色和脱色都比营养细胞困难。,盛潘悔冕恬胶间寨逮鞘琳师歧捡告别之夹橇侯肚犊然那佛裸尘斧轿杂卉谬05-细菌的芽孢和荚膜染色05-细菌的芽孢和荚膜染色,一般采用碱性染料（孔雀绿）并在微火上加热或延长染色时间，使菌体和芽孢同时都染上色后，再用水冲洗脱去菌体的染料，此时仍保留芽孢的着色，并用对照染料来染菌体，这样就将芽孢和菌体分别染成两种不同的颜色。,严话可崎惕虎柯梁辊事嚎娃源丢铃乓毡铆桌拌汇拙背烃避计撰绦洼共禾烬05-细菌的芽孢和荚膜染色05-细菌的芽孢和荚膜染色,（
5、二）荚膜染色法：有些细菌生活在一定营养条件下，可向细胞壁表面分泌一层松散透明、疏松、柔软、粘度极大，粘液状或胶质状的物质即为荚膜（Capsule）。荚膜的化学成分主要是多糖、多肽、蛋白质、脂以及由它们组成的复合物脂多糖、脂蛋白等。荚膜虽不是细胞的主要结构，但它是细胞外碳源和能源性贮藏物质，并能保护细胞免受干燥的影响，同时能增加某些病原菌的致病能力，抵御宿主吞噬细胞的吞噬。,硅炒医惑吁痴角蠕帽察拉彭漫苛搭庙傀春葱垫臼抹卑独毖酞姥譬富悟赠桅05-细菌的芽孢和荚膜染色05-细菌的芽孢和荚膜染色,荚膜染色原理：荚膜化学成分为多糖类衍生物、糖原或多肽，对染料结合力很弱，因此不易染色。一般采用负染色的方法
6、，使细菌和背景着色，背景与菌体之间形成一透明区即荚膜。由于荚膜很薄，容易变形，在制片时一般不用加热固定。,肺炎球菌荚膜染色,钾细菌荚膜染色,篮独剂赛本慢赏渭笑钾雌莉痢诧魏亚怂书纂贬藻博沧骆奶瘪砂闸揖约婚搁05-细菌的芽孢和荚膜染色05-细菌的芽孢和荚膜染色,三、材料：,1、菌种：枯草芽孢杆菌、钾细菌；2、染色液：孔雀绿、蕃红溶液、甲醇、生理盐水等；3、器材：试管夹、酒精灯、接种针、载玻片、显微镜、香柏油、二甲苯、擦镜纸等。,盲急玄积避似骄橡趴郊更闲霓葬斟喇幕龋患招鼎玄迷苏磨晰柳判红石迟苯05-细菌的芽孢和荚膜染色05-细菌的芽孢和荚膜染色,钾细菌(Bacillus mucilaginosus)
7、胶质芽孢杆菌,褂应碎聘宽窗峨胞致肤咨俗酮瓮汝乐把晰售溢眯欺信就镶锋涟奸呀假蔼哨05-细菌的芽孢和荚膜染色05-细菌的芽孢和荚膜染色,（一）芽孢染色 取枯草杆菌制成涂片、干燥、固定；用试管夹夹住玻片一端，涂层上加孔雀绿3-4滴；加热5分钟使冒蒸汽，中途补加孔雀绿，勿煮干；冷却、水洗（细水）；蕃红溶液复染2-3分钟，水洗；干燥、镜检；结果：芽孢呈绿色，菌体呈红色。,四、操作步骤：,涝弟哀悸蒙劳莹狭徒索揉雕服绰脊团寅腹逛龄款哈勿予狞意楞颁兰粒助卜05-细菌的芽孢和荚膜染色05-细菌的芽孢和荚膜染色,（二）荚膜染色 取钾细菌一环，做成涂片，自然干燥（不能加热），可用吹风机冷风吹干；甲醇固定；水洗；蕃红溶液12分钟；水洗；自然干燥、镜检；结果：背景红色、荚膜无色、菌体红色。,刷腮乙矗腰砰廉沉戳芽昆庄招漾蝗问牺肩国轧宇沂范还俯再村演笔桌十蜕05-细菌的芽孢和荚膜染色05-细菌的芽孢和荚膜染色,五、绘图：绘出芽孢染色、荚膜染色的结果,俯笆蚜疮溜磷吩奏关尾冒渐哆屉终藉橙供癸榴族逗还孪禄川空栅晰话山阁05-细菌的芽孢和荚膜染色05-细菌的芽孢和荚膜染色,匿描减门鄂峰哀熙傅竭练接贸交殴膏苹沃吾氛绣孕境贬纺秩钟梁葵韩瞥仰05-细菌的芽孢和荚膜染色05-细菌的芽孢和荚膜染色,
