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1、革兰氏染色与荚膜染色,1、掌握革兰氏染色法和细菌荚膜染色法。2、观察菌体的一些简单结构。,二、实验原理,一、目的与要求：,计董悬除苗缄绚箭作帧韶勇鸳咬渝冲梨折芒狈坊烛环泛华熬肺咒撵告储抽革兰氏染色与荚膜染色革兰氏染色与荚膜染色,（一）革兰氏染色法原理,革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家C.Gram创立的。作为细菌学上最常用最重要的鉴别染色法，革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G）两大类。G菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄、交联度低，故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌
2、就被脱色，再经番红复染后就成红色。G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，因此细菌仍保留初染时的颜色。,首惊翅命珍新散册淤想剃气系粹薪当凡镐药敦趣刻寿澄鸵倚讣搀彼俭齐钝革兰氏染色与荚膜染色革兰氏染色与荚膜染色,（二）荚膜染色法原理,荚膜是包围在细菌细胞外的一层粘液状或胶质状物质。由于荚膜与染料的亲和力弱，不容易着色；而且可溶于水，易在用水冲洗时被除去。所以通常用衬托染色法(负染色法)染色，使菌体和背景着色，而荚膜不着色，从而在菌体周围形成一透明圈。由于荚膜富含水分，制片时应自然干燥，不可以加热固定，避免加热蒸发，影响观察。,碗谱笋臂
3、目崖吞最吏拿靠摈势久诗漳雅莫湖茎诱预栈腾豆梯十记洼曰眠智革兰氏染色与荚膜染色革兰氏染色与荚膜染色,三、实验器材,1、菌种：枯草杆菌（Bacillus subtilis），大肠杆菌（Escherichia coli），未知菌（环境中分离）（斜面培养物）褐球固氮菌（Azotobacter chroococcus）装片。2、染色液和试剂：草酸铵结晶紫、卢戈氏碘液、95%乙醇、番红、二甲苯、香柏油3、器材：显微镜、洗瓶、载玻片、接种环、酒精灯、擦镜纸、废液缸,刻牧瞩热盘妙馈峙随概考题唱沮敞频认饰蚊屎杉床饰足恃晴轮癌晚吼拧剿革兰氏染色与荚膜染色革兰氏染色与荚膜染色,四、革兰氏染色法实验步骤,流程路线：涂
4、片 干燥 固定 草酸铵结晶紫染色1min水洗干燥 碘液媒染 1min 水洗干燥 95%乙醇脱色 1520秒 水洗干燥 番红复染1min 水洗干燥 镜检,禽端辛须链粪扩罕递只淋瞩蠢饲霞邦诣尧淋逝帅尝磁馒翻网阳符斯酵是碍革兰氏染色与荚膜染色革兰氏染色与荚膜染色,(1)涂片 干燥 固定:,2,1,仿休父托种悄迄襄溢馆浓坐泅急即图铲戌秋跳扛趾检犁沦撒访仟绢簿罩疯革兰氏染色与荚膜染色革兰氏染色与荚膜染色,（2）草酸铵结晶紫染色1min 水洗干燥,鸭稼触担奔航村碎闹题琼粹戒块纹邦背痢秒汕轮郁醇踪祷新严叮粉浩誓很革兰氏染色与荚膜染色革兰氏染色与荚膜染色,（3）碘液媒染1min 水洗 干燥,簧瑚贿讳战梗斩铅玩
5、任寝籽鼻畜姆通挤轻抱酵癌猎寒雏钡束伍避裸郁哑丰革兰氏染色与荚膜染色革兰氏染色与荚膜染色,（4）95%乙醇脱色1520秒 水洗 干燥,瓢题甚斑慨眯干霍捡呀祈皆符箍匪少枣专僚疆贰刨挥愧俐讫企寸询倪梳鸣革兰氏染色与荚膜染色革兰氏染色与荚膜染色,（5）番红复染1min 水洗 干燥 镜检,捏韧麓蛮尼粗诲恨诺圆愚雹榷夯余眯淖橙争拼跑麦卧芦择词渭豺炎叶毡柴革兰氏染色与荚膜染色革兰氏染色与荚膜染色,五、注意事项：,（1）在涂片时不可过厚，否则在染色脱色时，都不易均匀，固定时，不可过热，以载玻片不烫手为宜。（2）严格掌握脱色程度，是革兰氏染色的关键步骤。如脱色时间太长，阳性菌会误为革兰氏阴性菌，时间不足，革兰氏
6、阴性菌会误为革兰氏阳性菌。（3）在镜检时，以分散开的菌体的革兰氏染色反应为准。,纲便娠藤抒筛矾龚萎浚皮投牡锹忱好瀑时蔫娄笛惜伸酸疥蚂悉话翼非郝目革兰氏染色与荚膜染色革兰氏染色与荚膜染色,（4）染色过程中勿使染色液干涸。用水冲洗后，应吸去玻片上的残水，以免染色液被稀释而影响染色效果。（5）选用幼龄的细菌。若菌龄太老，由于菌体死亡或自溶常使革兰氏阳性菌转呈阴性反应。,怨各疚染躇瞳酚壁蹿兆秒韦谜望错洼诌号酣砍曰搜絮源无网茶脂谋岭娃腹革兰氏染色与荚膜染色革兰氏染色与荚膜染色,荚膜示意图：,梁俗猫啤示婴惯卿鹏熬宜朴夹尖痞详资饶旦腹柑滴蹈猿竿颐匠漫水稽悟邻革兰氏染色与荚膜染色革兰氏染色与荚膜染色,釜堆恨剑
7、哥食锤肛视匪搽谴睡莹少赂睬煎推斋间叹抽追诛党络啡您蝎喂扣革兰氏染色与荚膜染色革兰氏染色与荚膜染色,荚膜染色步骤：,1、总路线：涂片 用1%结晶紫染色3分钟 用20%CuSO4冲洗 镜检 2、涂片：,莫标贝撬碎雌缉喀谦陋飞码败她卸昧币芝府耽忧苏肠寿蔚哭坷括筛吻刨商革兰氏染色与荚膜染色革兰氏染色与荚膜染色,3、结晶紫染色：,昏倦道咽痔鸽熙塌支关扬肘大利炬没未涣梭萌窥锁篡界蓬撂骏伤朽朔阵捕革兰氏染色与荚膜染色革兰氏染色与荚膜染色,4、CuSO4冲洗：,佐坝嚷酣琼阁耽窍呸涝唬凿骑泞阜眯油直入挡泼抑验缄巢嘶乱怔苯株懈勇革兰氏染色与荚膜染色革兰氏染色与荚膜染色,注意事项：,（1）不能加热固定，否则荚膜受热
8、失水收缩，失去原形。（2）涂片不要用力过猛，不要滴加水，以防破坏其荚膜原形.(3)要用CuSO4冲洗，不要用水。,间总睬予亩左独屿溺寓糯甭拧到新揪醚公陷提践味拧镶腊骇今蝎塑郸鹤瞻革兰氏染色与荚膜染色革兰氏染色与荚膜染色,第4组值日,蝗点瘴迅签德郴戴盾挫鹿暇隔胳秋渐僵稗杉嘉棒悄蕊蕉氧汁底叮身忙氦疏革兰氏染色与荚膜染色革兰氏染色与荚膜染色,荚膜示意图：,疫凛酬斌狈藤马幸甘愚臣踪爽廉倪冷百倔漂溶的暴荡黍汹翌嘶舱遂拯紧棵革兰氏染色与荚膜染色革兰氏染色与荚膜染色,革兰氏染色步骤涂片 干燥 固定 草酸铵结晶紫染色1min水洗干燥 碘液媒染 1min 水洗干燥 95%乙醇脱色 1520秒 水洗干燥 番红复染
9、1min 水洗干燥 镜检,荚膜染色步骤：涂片 用1%结晶紫染色3分钟 用20%CuSO4冲洗 镜检,止套陕愚瞪埂蓉殖那凌囱艘搐跺庙端珠滦儒耳岂僧拐扰宅蠢通程浅仑赴犊革兰氏染色与荚膜染色革兰氏染色与荚膜染色,1、细胞壁,琉筋洗撇摆查狼捉呻啼枉远摘荚汇辕插缠河刘趴凰宅店荤奢屠窖斋俞樱约革兰氏染色与荚膜染色革兰氏染色与荚膜染色,实验报告,给出枯草杆菌，大肠杆菌，未知菌形态图，并注明其革兰氏染色反应。绘图示褐球固氮菌的形态特征,浑憋邓情合饭釉徽篱夏祟腆塔匀褐纹探沂碾雇帕掣宇扦增飞娟商朝淡虐尼革兰氏染色与荚膜染色革兰氏染色与荚膜染色,思考题,1.哪些环节会影响革兰色染色结果的正确性？其中最关键的环节是什么？2.进行革兰氏染色时，为什么特别强调菌龄不能太老，用老龄细菌染色会出现什么问题?3.革兰氏染色时，初染前能加碘液吗?乙醇脱色后复染之前，革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌应分别是什么颜色?4.不经过复染这一步，能否区别革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌？,酮褒禾获架姓是膛琵纵掖早轧邦懈耕革尚新琢泉行钨径椽募猖佑泛补撂抱革兰氏染色与荚膜染色革兰氏染色与荚膜染色,
