实时定量PCR实验故障排除.docx

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5、后的数据丢失原因1: PCR参数设置错误原因2:硬盘休眠.Bf僖质耳乍控iUi由I鱼SncMOO SpkcEQn&mY Auiplifiomticm Flot V Standard Curv舂 Y Di臼EooiatLon22DD.aOzjon.ao1SDD.DQ1000.00UDD.DQ1200.001DDD.DDi二 omDgrr领.皿bDO.OO4DD.D0解决方法修改基线范围为10-20,重新分析。ABpdifioation Flc丁 StandNrd Curv自 Y Dissgooiation 1 R令giG)mpo1双击纵坐标,打开Graph Settings关闭Auto Scal

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7、| 5 e. ? 8 y I a 1 I 1 ? I 314 1 *.1 e. I ? 181020 21 2 J2 3 24 23 IT 28 2Q 30 31 33 33 34 M 3G 3T 38 ?34 D扩增微弱或者信号很弱晶tup Y Instruumrit YResuLtsFlatm ? Spectral yCcmiDunent Y Amulif icati口口 Plot:| dard3200 DOCoimponent2400.002D00.D01 600.00Component(s)| P ::M| P KOX1 200 DOCycles/,:tup * Inmt二utr:?尹

8、i io JComponent命oulvusamnKooo5DQD.DQ4D00.D03000.002D0D DO1 OOD DO13 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29 31 33 35 3? 3943 J(5-Component (s)-| P FAM| P BOX/Pjjite r : /Component y j mi J if?i cat k.i HlotCyclesROX信号不稳定/PlBt令 Y Spectra FCcumDQnnt Y AsAlificmiTn Flot V $:anl:ard lurv令 f DLugioDl-tLon140

9、0.00IS00.00IODO.OOComDon 专 rt8DD.DD13 fi 7 1113顽 0.0。3医o_ll扩增曲线不光滑原因:信号太弱解决方法使用高质量的探针补救方法:1.7000的SDS软件升级到V1.12.关闭ROX校正,重新分析数据Well nsg&irtll =): D IITE4Ii霞Vk言*1普言T4E1 ty7F1Knx皿心standAid扑+血nTEC JO1ICLtnliiownTT1K HCflK(XU0E)ItnliiowrirTEEUJETAJD.JIUdJc 皿 van喝叮伫BsJiiE:r如以njiid letec t or. .Passive关闭ROX

10、校正的效果1600-400关闭Ko校ir20001200800400013579 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29 31 33 35 37 39ROX帮助故障诊断(1)现象:重复性很差Cycle Number正常的原始数据 Sekp & EMtmteI X附壹亦归 t Piffle A XCcmPncnrt K AnipmMticnPbi /, Etan(mi 匚此典 X 口母叫廿的n X,Eqwrt /Cumpcinm13D00 0010000.00B000 006000 004000 00CompoiErE)17 FAM|7 TAMR417 ROX2DDD 009

11、 11 13 15 17 19 21 23 25 2J 29 31 33 35 37 39EULJual口 m 山03-0 00Cycles原因:盖子未盖紧,溶液蒸发 ScMj & InstruTcni XrctuHw,,=、t Ptale乂 =101住 X珈e口口昵m A呻M由izn Pkyl g StancariJ 如1网 乂。信心Alton / Retort /ComgrientssssuZ-Caiiporierfe R7 FAM V叩僵 F HUK排除蒸发的数据后ROX帮助故障诊断(2)现象:山坡形扩增曲线 S Pjfl.P E引物二聚体 SYBR Green I化学,Dissociation curve 试验推荐措施:提高引物设计质量,避免形成引物二聚体补救措施:优化引物浓度和退火温度 也许:专设80度步骤收集信号?

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