土壤中蛔虫卵的检查及活力测定法.ppt

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1、土壤中蛔虫卵检查及活力测定方法谢 红,检验土壤蛔虫卵的原理,是先用碱性溶液和已经处理过的土壤样品充分混合,分离蛔虫卵,继用比重较蛔虫卵比重大的溶液为漂浮液,使蛔虫卵漂浮在溶液的表面,从而收集检验之;或加入清水,因蛔虫卵的比重大于水的比重,使蛔虫卵沉在水底,从中吸取蛔虫卵检验之。所用方法为改良饱和硝酸钠漂浮监察法。,改良饱和硝酸钠漂浮法(1)取回土样,剔除菜叶、树皮等大杂物,压碎土样中的大颗粒;(2)过筛 先后用孔径3mm的铜筛和孔径为2mm的铜筛过筛,收集过筛后的土样;(3)取2支50毫升大离心管,各放入过筛后的土样10g,加5%氢氧化钠溶液至40或45ml刻度线;,改良饱和硝酸钠漂浮法(4)

2、充分混合,离心,每分钟2,000转,离4分钟;(5)倾去上部的氢氧化钠(即弃去上部碱性溶液);(6)加入饱和硝酸钠溶液搅拌混匀,每分钟2000转,离心4分钟;(7)离心后,再加饱和硝酸钠溶液满至管口,覆上18mm18mm盖玻片;(8)静置15min后,取下盖玻片置于载玻片上镜检。,受精猪蛔虫卵,大小:50874060m形状:椭圆形或圆形,卵壳厚,外包有粗糙凹凸不平的蛋白膜,内含尚未分裂呈颗粒的卵细胞。,人蛔虫卵,大小:45753550m(平均60m)形状:短椭圆形或近圆形,卵壳厚,呈双线层,其外包有一层厚而呈乳头状突起的蛋白膜,土壤中的动物蛔虫卵与人蛔虫卵,牛羊蛔虫卵,大小:69956077m

3、形状:近球形,外有似蜂窝状蛋白膜。,人蛔虫卵,犬弓蛔虫卵,大小:7590m形状:近球形,也常有呈卵形,有粗糙凹凸不平卵壳,卵壳内充满黑褐色到黑色的尚未分裂,呈颗粒状内含物。,人蛔虫卵,猫弓蛔虫卵,大小:6575m形状:同犬弓蛔虫卵。,人蛔虫卵,蛔虫卵活力测定方法,含一个卵细胞活受精蛔虫卵,外包有乳头状突起的蛋白膜,脱蛋白膜活受精蛔虫卵,外包蛋白膜的死受精蛔虫卵,卵细胞移向一端,脱蛋白膜的死受精蛔虫卵,卵细胞移向一端,一、直接镜检法(死活蛔虫卵的形态比较),空泡化死受精蛔虫卵,外包蛋白膜死受精蛔虫卵,卵内 脂肪变性,细胞质形成空泡,含幼虫的活受精蛔虫卵,卵壳内幼虫变形的死受精蛔虫卵,人活蛔虫卵形

4、态,含一个卵细胞活受精蛔虫卵,外包有乳头状突起的蛋白膜,脱蛋白膜活受精蛔虫卵,含2个卵细胞活受精蛔虫卵,含16个卵细胞活受精蛔虫卵,未受精蛔虫卵外包锯齿状突起的蛋白膜,脱蛋白膜的未受精蛔虫卵,含幼虫的活受精蛔虫卵,死蛔虫卵形态,外包蛋白膜的死受精蛔虫卵,卵细胞移向一端,脱蛋白膜的死受精蛔虫卵,卵细胞移向一端,桑椹期脱蛋白膜死蛔虫卵,死受精蛔虫卵,在卵细胞上部可见透明细胞质,外包蛋白膜死受精蛔虫卵,卵内脂肪变性,细胞质形成空泡,死蛔虫卵形态,脱蛋白膜死受精蛔虫卵,在卵细胞上部形成空泡,卵细胞皱缩死受精蛔虫卵,空泡化死受精蛔虫卵,卵细胞崩解的死受精蛔虫卵,卵细胞崩解的死受精蛔虫卵,死蛔虫卵形态,卵

5、细胞不规则裂开的死受精蛔虫卵,卵胚变形的死受精蛔虫卵,内含物变形死受精蛔虫卵,卵壳内幼虫变形的死受精蛔虫卵,二、染色法鉴别蛔虫卵死活,(一)原理美蓝、伊红、硼砂染液(简称M.E.B)溶于水呈碱性。活虫卵可以还原碱性染料,降低着色力,不易被染色。死虫卵不能还原碱性染料,容易着色。蛔虫卵外层蛋白膜容易被着色,染色前需脱去蛋白膜。,(二)步骤1、脱蛋白膜将收集的蛔虫卵加入30%次氯酸钠,作用数分钟,并经常振荡,再用蒸馏水洗2次,即可脱掉蛋白膜。,2、染色镜检 吸取虫卵沉淀物一滴置于载玻片上,加染色液一滴,上覆盖玻片,静置35分钟后镜检。或者,吸取虫卵沉淀物1滴放入小试管内,加入染色液染30分钟,再用蒸馏水洗23次,吸取沉淀物镜检。3、注意:的PH值应在10左右,不宜太高;脱蛋白膜后,应洗净次氯酸钠,否则影响碱性染料的着色效果。,图中箭头所指为死的蛔虫卵,谢 谢,

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