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1、新型妇科干化学检测技术,-阴道分泌物八项检测临床应用,阴道感染性疾病,滴虫性阴道炎念珠菌性阴道炎（外阴阴道假丝酵母菌病)老年性阴道炎特异性阴道炎非特异性阴道炎（细菌性阴道病）,阴道感染性疾病,细菌性阴道病（bacterial vaginosis BV）发病率高，在阴道感染性疾病中，细菌性阴道病约占50%60%，念珠药阴道炎占20%30%，滴虫性阴道炎占5%10%，BV是妇科临床最常见的阴道感染。约50%的细菌性阴道病患者因无明显临床症状而被贻误诊断和治疗。,细菌性阴道病,BV主要与输卵管炎、盆腔炎、宫外孕、不孕症、泌尿系感染、术后感染及妇科肿瘤有关。患BV孕妇胎膜感染的比例是健康者的3倍;发生
2、胎膜早破及早产的机会是健康者的2到5倍 在BV者中常可检出常见的性病病原体,BV与性传播性疾病关系密切，细菌性阴道病感染HIV危险性是正常人的2倍，应引起高度重视。,细菌性阴道病,健康妇女阴道微生物群中常住菌除乳酸杆菌外，还有葡萄球菌、大肠杆菌、棒状杆菌、B族链球菌、粪链球菌、支原体、消化球菌及类杆菌等。正常菌群中厌氧菌与需氧菌之比为5：1。,正常的阴道菌群及微生态平衡,正常阴道内的微生物群主要有细菌、真菌、原虫及病毒等。菌群的组成菌中兼性厌氧乳杆菌是正常阴道的优势菌。,妇女阴道主要正常菌群,乳杆菌,类杆菌,表皮葡球菌,粪链球菌,大肠杆菌,梭状杆菌,白色念珠菌,棒状杆菌,原籍菌,其它菌群：共生
3、、拮抗,消化球菌,妇女阴道常见过路微生物,金葡菌,肠杆菌,丙酸杆菌,消化链球菌,韦荣球菌,加德纳菌,滴虫,阴道粘膜上皮细胞,纵切面示意图,（过路菌）,乳杆菌（原籍菌）,（条件致病菌）,是由不同种属的宿主传来的,是其自身宿主个体对其无免疫反应或低免疫反应，是宿主个体固有的菌群,是由同种属不同宿主个体传来的,乳杆菌阴道原籍菌在正常菌群中数量最多,可达8x107/ml,功能最重要,乳酸杆菌是阴道的原籍菌在阴道的正常菌群中其数量可达8107个/ml，从正常妇女阴道内可分离出16种左右乳杆菌，其中有几种能产生H2O2的乳杆菌（如卷曲乳杆菌、詹森乳杆菌以及发酵乳杆菌等），在乳杆菌中占绝对优势，而其他不产H
4、2O2的乳杆菌只占10%左右。,维持酸性环境,形成保护性菌膜,抑制微生物增殖,乳酸杆菌,正常阴道菌群作用,阴道微生态平衡的核心：,维持乳酸菌特别是H2O2LB在阴道菌群中的优势地位！,在阴道粘膜表面形成一层保护性菌膜，防止入侵微生物在阴道粘膜上定植,乳酸杆菌产生的乳酸使阴道分泌物维持酸性环境；,乳酸杆菌产生的H2O2可抑制CA、细菌等条 件致病菌的增殖。抑制HIV、HPV、支原体、衣原体的增殖。,阴道内各种微生物群之间,相互作用、相互制约、相互依赖，保持微生态平衡。一旦打破这种平衡，就会导致疾病的发生。,BV时的阴道微生态改变 乳杆菌不仅数量上减少，特别是产H2O2的乳杆菌减少加德纳菌及厌氧菌
5、增加厌氧菌可增加上千倍，厌氧菌与需氧菌之比由原来的51，增加到1001至10001。,阴道微生态失调,致病菌,条件致病菌,阴道乳杆菌在数量上处于绝对优势地位，是维持阴道微生态平衡的前提和基础,乳杆菌,乳杆菌,微生态平衡,微生态失调,内源性感染,外源性感染,产H2O2乳杆菌的生理作用产生乳酸，降低阴道PH值，抑制致病菌的生长繁殖产生H2O2调节阴道微生态平衡，防治外籍菌侵入引起的感染粘附抑制,影响阴道微生态环境的因素影响因素很多；包括内分泌变化（月经、妊娠、绝经）、性伴侣、滥用抗生素、宫内节育器、阴道冲洗以及不洁的性生活等。,细菌性阴道病（BV）发病机理,致病因素,乳杆菌,数量减少,功能减退,产
6、H2O2,产乳酸,加德纳菌/类杆菌等数量,阴道内源性感染,BV,阴道菌群失调,细菌性阴道病的临床特征,阴道黏膜充血不明显，病理特征无炎症病变。临床表现为牛奶样白带，检查无滴虫，真菌或淋菌。,BV对妊娠妇女的影响妊娠期BV可导致绒毛膜羊膜炎、胎膜早破及早产，产褥感染也比正常人群高。BV时，一些厌氧药可产生脂酶及蛋白酶，消 化胎膜上的脂质及蛋白质，使胎膜强度减弱而 易发生胎膜早破。BV时某些厌氧菌，可产生 大量磷脂酶A2，诱导子宫局部组织细胞膜磷脂 分解，使花生四烯酸增加，从而使前列腺素合 成增加，刺激子宫收缩而诱发早产。,BV对非孕妇女的影响 发生宫颈上非典型增生的危险性增加 宫内膜炎、附件炎的
7、发生增加 全子宫切除，术后阴道残端感染增加,阴道分泌物检查,阴道分泌物是女性生殖系统分泌的液体,主要由阴道粘膜、宫颈腺体、前庭大腺及子宫内膜的分泌物混合而成，俗称“白带”。检查目的：用于检查生殖系统病变、感染、滴虫、念珠菌，同时还可确定阴道清洁度。,白带常规检查,一般性状检查 pH值 阴道分泌物清洁度 霉菌与滴虫,一般性状检查,正常白带:白带异常可表现为色、质、量的改变：1.大量无色透明粘稠白带常见于应用雌激素 药物后及卵巢颗粒细胞瘤时。2.脓性白带 3.豆腐渣样白带 4.血性白带 5.黄色水样白带,pH值检查,正常pH值为4.5左右。阴道内呈弱酸性，这是阴道的自净作用，可以防止致病菌繁殖。如
8、果患有滴虫性或细菌性阴道炎时，pH值上升，可大于56。,白带清洁度检查,白带涂片镜检，根据所见上皮细胞、白细胞（或脓细胞）阴道杆菌与杂菌的数量进行判断，并划分清洁度：、度为正常，、度为不清洁。判断标准清洁度 杆菌 上皮细胞 白细胞 杂菌 意义+05-正常+515-正常-1530+提示炎症-30+严重阴道炎,霉菌和滴虫检查,白带经过处理后在显微镜下可以发现有无滴虫或霉菌，如存在滴虫或霉菌均用“”来表示。这一符号只说明你已经感染了滴虫或霉菌，并不说明感染的严重程度。,其他实验室检查,淋病奈瑟菌 其他细菌检查支原体和衣原体检查病毒检查：（单纯疱疹病毒、人巨细胞病毒、人乳头状病毒）病理检查,细菌性阴道
9、病的诊断标准,Amsel等经多年来的研究及临床观察，提出新的四项临床指标作为诊断BV的依据。习惯上叫做Amsel法，公认为是诊断BV的金标准。一般具备下列4条中3条者即可诊断为细菌性阴道病。1.阴道分泌物异常，为均质稀薄的白带。2.阴道分泌物pH4.5。3.氨臭味实验阳性。4.线索细胞阳性。,细菌性阴道病的实验室检查,阴道分泌物pH检查 阴道分泌物胺试验 阴道分泌物找线索细胞 阴道分泌物唾液酸酶试验 阴道分泌物脯氨酸氨肽酶试验,胺试验,检查细菌性阴道病的方法:白带加一滴10%氢氧化钾，如发出鱼腥味,即胺试验阳 性。,线索细胞,线索细胞：线索细胞是指细菌性阴道炎患者有许多杆菌凝聚在阴道上皮细胞边
10、缘，在悬滴涂片中见到阴道上皮细胞边缘呈颗粒状或点画状致使模糊不清者即为线索细胞，它是细菌性阴道病的最敏感最特异的体征。,正常乳酸杆菌形态,乳酸杆菌,加德纳菌图,不同染色条件下线索细胞形态,线索细胞,线索细胞,线索细胞,线索细胞,线索细胞图,线索细胞,线索细胞,线索细胞图,线索细胞,线索细胞,唾液酸酶试验,唾液酸酶是引起BV加德纳菌分泌的一种特异性胞外酶，正常妇女阴道中一般无此酶，细菌性阴道病时此酶可排泌至阴道分泌物中。BV患者唾液酸酶检测阳性。,脯氨酸氨肽酶试验,应用ELISA方法检测BV妇女分泌物中高于正常妇女的脯氨酸氨肽酶活性，检测产物为-naphthylamin,传统诊断BV的Amsel
11、s金标准易受到显微镜质量、样本采集情况以及操作者经验等诸多因素影响。,新型妇科干化学检测技术,检测项目,pH：阴道生态环境直接指标，正常为4.5过氧化（H2O2)：阴道乳酸杆菌的标志物乳酸(LA)：阴道乳酸杆菌的标志物白细胞酯酶（LEU）：炎性细胞的标志物，表示白细胞多少唾液酸苷酶（SA）：细菌性阴道病（BV）致病菌的标志物氧化酶（OA）：淋球菌初筛的重要指标脯氨酸氨基肽酶（PIP）:提示BV、白色念珠菌和滴虫感染N-乙酰-D-氨基半乳糖苷酶（NAG)：阳性时，则预示白色念珠菌感染。,过氧化氢浓度的意义,正常,Text,Text,异常,Text,Text,乳酸杆菌减少或消失,产过氧化氢乳酸杆菌
12、优势地位,正常优势菌功能指标,了解乳酸杆菌 产过氧化氢的功能,提示阴道炎症反应,病原体致病性消失炎症消失,机体反应性指标,了解阴道炎症及其程度,LE炎症反应指标,白细胞与白细胞酯酶的关系,1,2,3,LE与被破坏的白细胞数量成正比,白细胞的数量与采样部位、涂片均匀程度、月经周期有关,反应吞噬细胞的功能（大部分细菌、支原体、衣原体 感染均可出现吞噬现象）,白细胞对细菌的吞噬过程,唾液酸苷酶活性的意义,Text,阴性,阳性,Text,BV等致病性 厌氧菌增加,无引发BV的细菌繁殖,致病菌增殖指标,了解有无引发BV病原体的进居和增殖,NAG检测临床意义,N-乙酰基-氨基半乳糖苷酶是白色念珠菌、阴道毛
13、滴虫等阴道常见致病菌分泌的酶，能够破坏阴道粘膜表面起保护作用的粘蛋白屏障，正常阴道分泌物中不含NAG，只有在此类病原菌感染时才能检测到此酶的存在。若NAG阳性，即提示阴道保护性粘蛋白屏障被破坏，阴道粘膜处于易感状态或已被此类病原菌感染。,八项妇科干化学检查的参考值,检查结果的参考解释,仪器使用注意事项1.在样本检测或者质控检测时（即运行指示灯亮着时）不要关机，避免程序受到冲击引起不正常。2.样本用500ul800ul左右的生理盐水稀释搅匀。3.将样本加入试纸上后，需将多余的液体吸掉，避免多余液体进入仪器后碰到检测光源。4.放入试纸条时，必须放入感应区，即感应区灯亮时才算放到位。5.在走样本或者
14、质控时（尤其光头正在检测试纸条），上盖不要打开。6.在撕开试纸条包装时，注意不能将试纸条折弯。7.试纸条从冰箱取出后要恢复到室温，打开包装后，尽量在三分钟内用掉（最好即开即用）。8.标本要求：（1）取材部位一定要准确，须取阴道后穹隆部位的分泌物。（2）标本量要充足，一是要尽量使用大一些的棉签取样，此外，要将棉签在取材部位旋转并停留20秒钟以上，以便吸取更多的标本。（3）样本应在1小时内送检。不能立刻送检的，应放在4-8保存，24小时内送检。（4）脓性和血性白带标本会干扰结果判读，应结合镜检予以确定。9.试纸条应在冰箱内保存。10.机器定期清洗感应区及轨道架，避免试纸走纸不正常。,操作流程,1.
15、将阴道分泌物中加入500-800l生理 盐水,反复挤压棉拭子,使样本溢出。2.在每个试剂块上各加1滴阴道分泌物。将试纸放上检测仪，10分钟判读结果。另加一滴标本在玻片上，加一滴染液染色进行显微镜检查。,细胞染色图像效果,上皮细胞,样本和染液混匀后立即观察,滴虫,滴虫,滴虫,滴虫,念珠菌,线索细胞,脓细胞,脓细胞,白细胞,白细胞,白细胞,白细胞,样本和染液混匀10分钟以后观察（上皮细胞、白细胞、线索细胞略微深染,故不重复）：,滴虫,念珠菌,脓细胞,产品特点,八项指标任意组合；一步法操作，简单方便；连续快速高效，120T/小时；自动化检测，质量稳定、可靠；支持内外打印机，可接LIS；,临床应用,妇科普通门诊病人；阴道分泌物有异常者；有性病史，久治不愈反复发作的病人；妇科手术之前必须做必要的诊断；产科对有症状的孕妇，应及时诊断；对无症状的孕妇，应在28周前进行筛查；,A.有阴道感染症状的患者,B.经常规治疗后的各类阴道炎患者,C.产前与产后阴道微生态评价,D.妊娠期无症状体征者,谢谢！,谢 谢！,放映结束 感谢各位的批评指导！,让我们共同进步,
