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1、Capillary Iso-Electric Focusing(CIEF)毛细管等电聚焦,等电点，pI正负电荷相等时对应的pH,两性离子,细胞色素C10.6胰蛋白酶原9.2鲸肌红蛋白7.6马肌红蛋白6.6Beta-乳球蛋白 5.2转铁蛋白 4.3,pI7的蛋白质在不同pH处的荷电情况,等电聚焦的原理具有一定pI的蛋白在电场中建立的pH梯度介质中，当所处位置的pH低于pI时带正电荷，向负极移动；在高于pI的pH位置时带负电，向正极移动；在等于pI处不动。不同等电点组分被聚焦在不同位置而达到聚焦和分离的目的。,Capillary Iso-Electric Focusing-CIEF,高分辨率（分辨
2、率可达0.005 pH）快速微量在柱检测,如何在电场方向上产生pH梯度？如何维持建立的pH梯度的稳定？,毛细管中pH梯度的建立,丙烯酸,乙烯氨,聚两性电解质,两性电解质的合成,两性电解质的电荷与pH的关系,两性电解质中的蛋白,CIEF操作过程,CIEF分辨能力取决于：扩散系数电场强度pH梯度淌度的pH梯度,CIEF 中的谱带移动,正极移动：在正极加电解质如NaCl，使聚焦后分离的谱带向该极移动负极移动：在负极，加电解质如NaCl，使聚焦后分离的谱带向该极移动压力移动，加电压的同时施加压力，实现移动的同时保持聚焦状态扫描检测分离谱带，无需谱带移动,阳极移动示意图，阳极加入中性盐,阴极移动示意图，
3、阴极加入中性盐,CIEF中加电加压转移方法,CIEF分离蛋白混合物,CIEF Analysis of anti-CEA MAb,CIEF测定等电点,CIEF蛋白定量分析,CIEF分析过程：载入，聚焦，迁移（检测）,CIEF试验要点,内壁经处理的毛细管两性电解质（1）和样品充入毛细管电极液20 mM 磷酸为阳极液，20 mM NaOH为阴极液加电压聚焦，46kV，聚焦稳态后电流下降到起始的1025聚焦区带的转移和检测,操作注意事项浓缩沉淀：由于局部高度浓缩，有可能导致蛋白沉淀阻塞。需要加添加剂，如PVA等对蛋白质pI影响小的非离子表面活性剂。检测：因为通常所用两性电解质在低UV有吸收，因此UV检测通常在较高波长，即280 nm进行。,CIEF和CZE比较,
