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1、实验八:小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象的观察,【课前预习】实验前给小鼠腹腔注射台盼兰淀粉肉汤的目的是什么?,实 验 目 的,1、通过对小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞活动的观察,加深理解细胞吞噬作用的过程及其意义。2、掌握小鼠腹腔注射给药和颈椎脱臼处死方法。观察机体的非特异性免疫现象。3熟悉细胞吞噬作用的基本过程,实 验 原 理,细胞吞噬作用原来是单细胞动物摄取营养物质的方式,也是原始防御作用。随着动物界的进化,在高等动物中,则发展生成大小两类吞噬细胞(即巨噬细胞和嗜中性粒细胞),专司吞噬作用,成为非特异免疫功能的重要组成部分。,巨噬细胞由骨髓干细胞分化生成,然后进入血液到达各组织内,并进一步分化为各
2、种巨噬细胞。当病原微生物或其它异物侵入机体时,能招引巨噬细胞,而巨噬细胞又有趋化性,能响应招引因子的招引,产生活跃的变形运动,主动向病原体和异物移行,在接触到病原体或异物时,即伸出伪足,将之包围并内吞人胞质,形成吞噬体,继而细胞质中的初级溶酶体与吞噬泡发生融合,形成吞噬性溶酶体,通过其中水解酶等作用下,将病原体杀死,消化分解,最后将不能消化的残渣排出细胞外。,在机体的免疫过程中,巨噬细胞承担着噬菌、杀菌、清除体内被损伤和衰老的细胞,以及传递抗原信息,巨噬细胞将捕获的抗原进行加工处理后,把降解的抗原信息传递给T、B淋巴细胞。巨噬细胞又是天然杀伤细胞(NK Cell)的激活剂,而且对B淋巴细胞的激
3、活、增殖和分化具有调节作用。,【实验用品】1材料:小白鼠、1%鸡红细胞悬液2试剂:6%的淀粉肉汤(含台盼蓝),0.9%生理盐水3仪器设备:显微镜、注射器、注射针头、吸管、试管架、解剖刀、解剖镊、载玻片、盖玻片、记号笔,实 验 方 法,1、在实验前一天,给小白鼠腹腔注射5鸡红细胞 lml/只。注射时,先用右手抓住鼠尾提起,放在实验台上,用左手的拇指和食指抓住小鼠两耳和头颈皮肤,将鼠体置于左手心中,把后肢拉直,用左手的无名指和小指按住尾巴与后肢,前肢可用中指固定,即可在腹部后 l2处的一侧注射。进针勿过深,否则易损害肝及血管等,造成出血致死。腹腔注射1鸡红细胞悬液lml,轻按小白鼠腹部,使悬液分散
4、。,2、约20分钟后,用颈椎脱臼法处死小鼠(右手抓住鼠尾,用力向后拉,左手拇指与食指同时向下按住鼠头,使脊髓与脑髓间断开致鼠死亡)。3、将小鼠置于解剖盘中,剪开腹部,把内脏推向一侧,用不装针头的注射器或吸管吸取腹腔液。4、每人取一张干净载玻片,滴一滴腹腔液,盖上盖玻片,置显微镜下观察。,5、吸取的腹腔液与 Hanks 液1:1混合,并且滴数滴于载玻片上,37OC 温育30分钟。6、玻片取出,用生理盐水冲洗,吹干,甲醇固定5分钟。7、Gimasa染液染色,干燥后油镜观察。,【实验结果】在高倍镜下可见有许多较大的圆形和形状不规则的巨噬细胞,因未染色细胞核不易见到,其胞质中含有数量不等的兰色圆形小颗粒(即吞入的含台盼兰的淀粉肉汤所形成);还可见少量黄色椭圆形有明显细胞核的鸡红细胞,慢慢移动玻片标本,仔细观察视野中的巨噬细胞表面,有的红细胞已部分被吞入;有的巨噬细胞内已吞入了一个或多个红细胞形成吞噬泡。,巨噬细胞吞噬实验示教照片,鸡红细胞,巨噬细胞,吞噬鸡红细胞后的巨噬细胞,吞噬鸡红细胞后的巨噬细胞,【实验报告】1镜检时,你能在视野中看到几种类型的细胞?绘图说明巨噬细胞吞噬过程。2巨噬细胞将如何进一步处理被吞噬的红细胞?,