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1、传统培养基方法,微生物分析的主要方法,原理:糖发酵 Ex:乳糖发酵用于大肠菌群检测 氧化还原 Ex:如H2S基础培养基用于Salmonella spp.,缺点:大部分生化反应只是用于检测微生物种群(属).,需要转代 浪费金钱和时间:大部分需要确认实验,传统培养基方法,显色及荧光底物技术,专一性酶活性，目视观察,减少和降低确认测试量,显色及荧光底物技术,底物结构,糖类脂类蛋白胨,色 原,底 物 结 构,共价键结合,专一酶,ALOA:L.monocytogenes detection and enumeration in food samples 食品中单增李斯特菌检测,CHROMOGENIC C
2、ULTURE MEDIANEW APPLICATIONS,ASAP:Salmonella detection in food,veterinary and clinical samples 食品、兽药及临床样品中沙门氏菌检测,ESIA:Enterobacter sakazakii detection in dehydrated foodand environmental samples脱水食品及环境样品中阪崎肠杆菌检测,ALOA,Agar Listeria acc.Ottaviani&AgostiChromogenic medium 单增李斯特菌检测和计数培养基,ALOA,原理:,Beta-g
3、lucosidase activityBlue colonies-葡萄糖苷酶活性，蓝色,Phospholipase activityOpaque halo 磷酸酶活性，混浊晕,Aloa,单增李斯特菌的选择性,Listeria monocytogenes,可非常清晰地分辨单增李斯特菌,混合李斯特氏菌存在的问题,单增李斯特菌和其它无毒李斯特菌在LEB培养基中生长对比(Mac Donald and coll.-1996)种类 繁殖一代的时间 总代数.(24H-LEB)L.mono 70 min 21L.innoc 55 min 26例如:在225mL增菌培养基中各有1 个细胞24小时增菌后-在 5
4、l(在 PAL/OXF上的接种量):5 个 L.mono(单增李斯特氏菌)和 150 个 L.innocua(无毒李斯特菌),混合李斯特氏菌存在的问题,假如随机挑取5个菌落确认，在X个无毒李斯特菌中有1个单增李斯特菌，被检出的可能性如下：,可能性66%1/415%5%,X=ratio L.i/L.m4192999,ALOA One Day alternative method:分析方法图,25 g 食品样品+225 ml HALF FRASER BROTH 24 H/30C 涂布 0.1 ml on ALOA 24 H/37C 存在典型菌落:不存在典型菌落:确认*不存在单增李斯特氏菌*:糖/溶
5、血试验,ALOA 认证,AFNOR validation(ALOA ONE DAY METHOD-France)Compendium Canada registeredBAM registered(FDA approval)NMKL approval(Sweden)ISO:preferred reference culture media for Listeria monocytogenes detection and enumeration(ISO 11290 1&2 revision publication in January 2005),ASAP,食品、兽药及临床样品中沙门氏菌检测,A
6、SAP,Principle:,C8 酯酶活性,Beta-葡萄糖苷酶活性,ASAP,Examples:,C8-酯酶检测,Beta-葡萄糖苷酶活性,C8-酯酶和葡萄糖苷酶活性检测,白色菌落,ESIA,阪崎肠杆菌分离培养基,Principle:,葡萄糖苷酶蓝色菌落,紫红色菌落,ESIA,ESSB/ESIA E.sakazakii 检测流程,25g sample+225 ml ESSB18/24H 37C,Isolation ESIA18/24H 44C,48 H内出阴性结果和阳性初筛结果,显色培养基的优势,显色底物来源于传统方法的更新,易用性 专一性强，灵敏度高 节省时间和金钱 高效(1袋+1 皿)无需其它设备,
