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1、Biedit软件的应用介绍:DNA序列基本操作,目的:纯菌种16S rRNA,利用Sanger方法双端测序,然后检查测序质量,将双端测序的序列拼接成一条完整的序列,利用这个长序列去与数据库比对,判断这个序列最可能是从哪个微生物来的。具体操作过程:以一个纯菌种的16S rRNA测序为例,练习序列拼接(assembly).用Sanger方法,从两端测序,引物为27F和1492R。,正向引物27F测得的序列,反向引物1492R测得的序列,拼接(assembly),Overlap,Contig,第一步:Sanger测序下机文件为.abi文件,可以用Bioedit打开查看测序质量。峰型好的碱基质量较好,
2、把质量好的碱基部分提取出来,存成fasta文件。具体操作流程:File-Open-找到文件Sanger_Seq27f.abi。出现两个界面,根据测序峰确定高质量测序区段;然后双击另一个界面的文件名字,即出现一个新的编辑框。将质量差的碱基区域去掉,然后另存为一个.fasta文件,存成seq27F.fas。另一个文件存为seq1492R.fas.,Biedit软件的应用介绍:DNA序列基本操作,Biedit软件的应用介绍:DNA序列基本操作,第二步:将27F和1492R测得的序列都整理成质量好的.fasta文件后,将这两个文件拼接成一个长的contig。操作如下:file-new alignmen
3、t-file-import-sequence alignment file-同时选择Seq27F.fas和seq1492R.fas-file-save as 27F+1492R.fas-file-open 27F+1492R.fas-点击选择两个文件名-accessory applications-CAP assembly contig program-run application-enter-随即产生了contig序列,delete原始的序列(seq27F.fas和Seq1492R.fas),给contig命名,另存为Seq27F+1492R_contig.fas。第三部:将contig序列拷贝到NCBI Blast中去比对,看与数据库中哪些序列最相近。,RDP 平台简单介绍:分类,目的:利用RDP平台中的分类功能,对测定的高通量测序数据进行系统进化分类。得到微生物群落的组成信息:门、纲、目、科、属、种。具体操作过程:RDP pipeline Classifier test drive Select your file to upload Submit for Classification(Sample file name:Seq100),