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1、第四章 实验室检验技术,血液检验,第一节 血液检验,（1）后肢外侧跗外静脉、内侧隐静脉、前肢 内侧皮下头静脉采血（2）股动脉采血（3）.心脏采血同大、小鼠心脏采血（4）耳缘静脉采血同兔耳缘静脉采血,采血方法的选择，决定于实验目的所需血量以及动物种类。凡用血量较少的检验如红、白细胞计数、血红蛋白的测定，血液涂片以及酶活性微量分析法等，可刺破组织取毛细血管的血。当需血量较多时可作静脉采血。静脉采血时，若需反复多次，应自远离心脏端开始，以免发生栓塞而影响整条静脉。研究毒物对肺功能的影响、血液酸碱平衡、水盐代谢紊乱、血液pH值以及 K+、Na+、Cl-离子浓度，必须采取动脉血液。,采血场所有充足的光线
2、；室温夏季最好保持在2528，冬季，1520为宜；采血用具有采用部位一般需要进行消毒；采血用的注射器和试管必须保持清洁干燥；若需抗凝全血，在注射器或试管内需预先加入抗凝剂。,采血时要注意,取少量血，犬猫耳静脉。取中量血：后肢外侧皮下小隐静脉前肢内侧皮下头静脉颈静脉 取大量血股动脉、颈动脉 最多狗100ml、猫10ml心脏,血液检验,血液的抗凝,草酸钠 是常用的抗凝剂，每1.52.0mg可抗凝1.0ml血液，可用于血液常规检验。因对红细胞大小有影响，故不能用红细胞压积测定，如测定红细胞压积时，可用双草酸盐抗凝剂或乙二胺四乙酸二钠。,双草酸盐抗凝剂 草酸钠 0.8g草酸铵 1.2g蒸馏水 加至10
3、0ml 溶解后吸取0.5ml，加入供采血试管或小瓶中，置干燥箱内（温度不超过80）烘干备用，可供5ml全血抗凝。,血液检验,乙二胺四乙酸二钠（EDTANa2）每10mg可使5ml全血抗凝；或配成10%的溶液，每2滴可使5ml全血抗凝。可适用于一般的血液学检查，特别是血小板计数，但因为影响血小板聚集和白细胞吞噬功能，不适合于血象及血小板功能检查。,3.8%枸橼酸钠溶液 每0.5ml可使5ml全血抗凝。常用于血沉、凝血因子和血小板功能检查。因其毒性小又可作为血液保养液。但不适用于血液化学检验。由于抗凝剂溶解缓慢，故只能配成溶液，不能用粉剂。,血液的抗凝,血液检验,肝素 肝素价格最贵，其优点是抗凝作
4、用强，不影响血细胞的体积，不致溶血等，可用于多种血液生物化学分析和红细胞压积测定。但过量的肝素可引起白细胞聚集和血小板减少，故不适用于白细胞和血小板计数，也不适用于血涂片检查，因其在瑞氏染色时会出现蓝色背景，更不能用于凝血象的检查。,血液的抗凝,通常用肝素粉剂配成1g/L水溶液。取0.5ml置小瓶内，放于3750中烘干后贮于冰箱内保存。能使5ml血液不凝固，肝素抗凝剂应及时使用，放置过久易失效。怀疑传染病时，采血应防止到处流散，检后残余血液及所用器皿应进行消毒处理。,血液检验,红细胞沉降率测定,魏氏法,魏氏血沉管长30cm，内径2.5mm管上有0200的刻度，每一刻度的距离为1mm，其溶积为1
5、ml。,先向10ml刻度试管中加入3.8%枸橼酸1ml，再自静脉采血4ml，颠倒混合数次，然后用魏氏血沉管吸取抗凝剂至刻度0处，擦去管外血液，在室温条件下，垂直放于血沉管架上，经15、30、45、60min，分别观察并记录细胞沉降数值。,血液检验,红细胞沉降率测定,“六五”型血沉管法,于血沉管中加入抗凝剂（草酸钠0.0150.02g，枸橼酸钠粉末0.040.05g）,自颈静脉直接采血至刻度“0”处，立即充分混合，于室温垂直立于试管架上，镜15、30、45、60min各观察一次，并记录红细胞沉降的数值。,血液检验,血红蛋白测定,红细胞遇酸溶解，游离出血红蛋白，并被酸化为褐色的酸性血红素，稀释后与
6、标准色柱比色，即可求得血红蛋白的含量。,血红蛋白试纸测定法 器材应备有测定血红蛋白试纸和4g%15g%血红蛋白标准比色板。测定时，取试纸一条，吸附被检血液一小滴，待血完全浸透后，立即置于所附标准色板的小孔下，肉眼与色板色泽进行比较，选择颜色相同或近似者，即得100ml血液所含血红蛋白的克数。,沙利氏血红蛋白测定法 沙利氏血红蛋白计由比色架、标准比色柱、血红蛋白测定管及血红蛋白吸管组成。测定管有两个刻度标志，一侧的224刻度表示100ml血液中含有的血红蛋白克数；另一侧有20160刻度，表示100ml血液中所含血红蛋白的百分数。,血液检验,血红蛋白测定,血红蛋白增高 见于各种原因引起的血液浓缩，
7、如腹泻、呕吐、大汗、多尿及肠梗阻等。血红蛋白减少 见于各种贫血，,血液检验,红细胞计数,红细胞计数是将一定量的供检血液经一定倍数稀释后，计数一定容积的红细胞数，并换算为每立方毫米血液内含量。,血液检验,红细胞计数,健康动物红细胞数（万/立方毫米）,血液检验,白细胞计数,用冰醋酸将红细胞破坏后，计算每立方毫米内白细胞总数。,健康动物白细胞数（个/立方毫米）,白细胞增多 可见于多数细菌性感染和炎症，如猪丹毒、猪肺疫、结核、马鼻疽、马腺疫、肺炎、胸膜炎、腹膜炎等。白血病时以白细胞的显著增多为特征。白细胞减少 主要见于某些病毒性传染病，某些重度疾病的后期；长期应用某些药物（如氯霉素等）。,血液检验,白
8、细胞分类计数,血液检验,白细胞增多嗜中性白细胞增多：见于肺炎及化脓性感染等。嗜酸性白细胞增多：见于某些蠕虫病、过敏性疾病及湿疹等。淋巴细胞增多：见于结核、鼻疽、布氏杆菌病。单核细胞增多：见于败血性疾病，某些梨形虫病及李氏杆菌等。,白细胞减少嗜中性白细胞减少：见于病毒性传染病、药物中毒（如长期服用抗生素）、各种疾病的垂危期。嗜酸性白细胞减少：见于败血症、某些病毒病及牛梨形虫病等。淋巴细胞减少：多为嗜中性白细胞增多而造成的相对性变化。,临床意义,尿液检验,第二节 尿液常规检查,尿常规检查内容,透明度盛尿液于玻璃容器内，透光观察。,尿液一般物理性状的检查，包括透明度、尿色及气味等。尿液一般化学性状的
9、检查，包括酸碱度、尿蛋白质、血液、血红蛋白的检查。,尿常规检查内容,尿色正常尿为深黄色或淡黄色。病理情况下有红尿，是泌尿系统出血、肌红蛋白尿或血红蛋白尿；尿呈黄绿褐色是胆红质尿、尿胆素原尿的特征。,尿气味 尿发氨臭，是膀胱炎、膀胱麻痹的表现，是由于细菌作用，使尿液分解产生氨的结果；尿发腐败臭，是膀胱、尿道有溃疡、坏死或化脓性炎症，由于蛋白质腐败分解而发生；,尿常规检查内容,尿酸碱度 犬猫动物食肉多，尿呈酸性。尿蛋白质 正常尿含微量蛋白质，但用一般方法检查不出来，若尿中证明含有蛋白质时称为蛋白尿。见于泌尿系统炎症及热性病。尿中血液 尿中含有血液或血红蛋白，称为血尿。尿液中含有多量红细胞时，见于肾
10、及尿路出血；尿中糖,红细胞：尿中出现红细胞，是泌尿系统出血的特征。红细胞的形态，在新鲜尿液呈圆形淡红绿色；酸性尿中，则红细胞皱缩，边缘呈锯齿状；碱性尿中，红细胞膨胀或破坏，呈现阴影。白细胞：正常尿中仅有白细胞，尿液中最常见的是中性白细胞，而淋巴细胞及单核细胞均少见。尿中出现白细胞是肾、膀胱的炎症。在新鲜尿中其形态比红细胞大有核，易识别；酸性尿中其形态比较完整，加稀醋酸后其核更明显；碱性尿中则膨胀而清晰。肾上皮细胞：比白细胞约大1/3，呈圆形，有一个较大的核，细胞质内有小颗粒，易识别。若尿中出现多量肾上皮细胞时，是肾实质性炎症。尾状上皮细胞：呈梨形或梭形，比白细胞大24倍。有一个圆形或椭圆形的核
11、，这种细胞，来自肾盂、膀胱、尿道粘膜的深层，尿中出现时是重剧炎症，尿道炎的居多。,有机沉渣检查,扁平上皮细胞：细胞大而扁平，核小而圆，细胞边缘稍卷起，或几个在一起，容易与其他细胞区别。它来自膀胱、尿道的表层，出现时膀胱、尿道的炎症，但膀胱炎居多。管型：管型是肾有炎症的标志。当肾患病时，由肾小球滤出的蛋白质在肾小管内变性凝固或蛋白质与其他成分相结合形成管型。尿中出现管型时，是肾病的特征。,无机沉渣检查,尿中无机盐，主要指各种无机盐结晶及一些无机结晶物。尿中如出现大量无机盐沉渣，则是病理现象。尿中无机盐沉渣，随着尿酸碱度不同而不同。碱性尿无机盐是碳酸钙；酸性尿无机盐沉渣是草酸钙临床检查具有意义的是
12、：草酸钙，为四角八面体，呈信封状，区光力强，易溶于盐酸而不溶于醋酸，马尿含有少量，若多量出现时，是慢性肾炎或代谢病之症。,尿液检查结果的分析判定,尿液检出蛋白质时，可认为是泌尿系统的疾病，但到底是什么部位发病或是什么病，还得经过尿沉渣的检查。肾脏本身疾病引起的尿蛋白，则尿沉渣可检出肾上皮细胞及管型。尿路疾病引起的尿蛋白，则尿沉渣可检出尾状上皮细胞，扁平上皮细胞或磷酸铵镁结晶，而无肾上皮细胞及管型。其他疾病引起的尿蛋白，如热性病等则具有原发病症状，且尿蛋白出现时间短，随原发病的治愈而消失。,尿液检查结果的分析判定,红尿 红尿即尿呈红色，除泌尿系统出现出血性炎症外，肌红蛋白和血红蛋白尿病，尿也呈红
13、色，应注意鉴别。,尿液检验结果必须结合临床症状才能作出正确判定1.尿中出现蛋白质、尾状上皮细胞，而临床表现尿意频频，屡呈排尿姿势，排尿时呻吟不安，仅有少量淋漓排出，插入导尿管而疼痛不安，直检膀胱充满尿液的，可确诊为尿道炎。2.尿液中出现尿蛋白，扁平上皮细胞或磷酸铵镁结晶，临床表现尿意频频，屡呈排尿姿势，排尿时疼痛不安，仅排出少量尿液或尿液淋漓排出时，直检膀胱胱空虚而疼痛的，可确诊为膀胱炎。,3.尿液中出现扁平上皮及磷酸镁结晶，临床表现排尿失禁或淋漓，直检膀胱充满尿液，压之尿液被动流出，停止压迫，排尿即停止。是膀胱麻痹的特征。4.尿液中出现尿蛋白、肾上皮细胞、管型，临床上病畜好站立，运动时拱腰，
14、后肢迈步强拘，碎步行走，尿少而色浓，胸、腹皮下常浮肿，主动脉压升高，主动脉口第二心音增强，直检肾脏肿胀而敏感的，是急性肾炎的特征。5.尿中出现尿蛋白、颗粒或透明管型，临床表现逐渐消瘦，尿多，病畜食欲减少，易疲劳出汗，直检肾脏坚硬而凸凹不平时，是慢性肾炎的特征。,第三节 粪便检查,1、粪便潜血2、寄生虫,第四节 生化测定,1、血清总蛋白测定（双缩脲法）具有两个或两个以上肽键的化合物皆有双缩脲反应，因此蛋白质在碱性溶液中，也能与Cu2+形成紫红色络合物，颜色深浅与蛋白质浓度成正比，故可以用来测定蛋白质的浓度。正常值 犬54-89g/L，猫54-78g/L,双缩脲试剂,将0.175g硫酸铜（CuSO
15、45H2O）溶于约15ml蒸馏水，置于100ml容量瓶中，加入30ml浓氨水，30ml冰冷的蒸馏水和20ml饱和NaOH溶液，摇匀，室温放置12h，再以蒸馏水定容至100ml后，摇匀，备用。,（1）.标准蛋白溶液 10mg/ml牛血清白蛋白溶液或相同浓度的酪蛋白溶液（用0.05mol/L氢氧化钠溶液配制）。作为标准用的蛋白质要预先用微量凯氏定氮法测定蛋白质含量，根据其纯 度称量，配制成标准溶液。（2）.待测蛋白质溶液 血清（稀释10倍）。测试其他蛋白质样品应稀释适当倍数，使其浓度在标准曲线测试范围内。（3）.仪器 UV-2000型分光光度计。,2、血糖,葡萄糖氧化酶法,原理,葡萄糖在葡萄糖氧化
16、酶的作用下产生葡萄糖酸和过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶的作用下使邻联甲苯胺生成蓝色物质，此有色物质在625nm 波长下与葡萄糖浓度成正比。通过测定蓝色物质的吸光度可计算样品中葡萄糖的含量。,(1)糖尿病：病理性高血糖常见于胰岛素绝对或相对不足。(2)内分泌腺功能障碍：甲状腺功能亢进，肾上腺皮质功能及髓质功能亢进。引起的各种对抗胰岛素的激素分泌过多也会出现高血糖。注意升高血糖的激素增多引起的高血糖，现已归入特异性糖尿病中。(3)颅内压增高：颅内压增高刺激血糖中枢，如颅外伤、颅内出血、脑膜炎等。(4)脱水引起的高血糖：如呕吐、腹泻和高热等也可使血糖轻度增高。(5)生理性低血糖 见于饥饿和剧烈运动。
17、(6)病理性低血糖(特发性功能性低血糖最多见，依次是药源性、肝源性、胰岛素瘤等),临床意义,矿物质及其他,（1）血清钙（2）无机磷（3）血清钠、氯、钾（4）血清尿素氮（5）血清转氨酶,第四章 给药途径与方法,动物的给药方法主要分为注射法和投入法两种.注射法分为：皮下注射、皮内注射、肌肉注射、腹腔注射、脑膜下注射、脑内注射、胸腔内注射、腰椎内注射、静脉注射、关节腔注射和心内注射。投入法可分为：鼻腔内投入、胃腔内投入、肠管内投入、气管内投入和经口腔投入。,（一）皮下注射（二）皮内注射（三）肌肉注射（四）腹腔注射（五）静脉注射（六）淋巴囊注射（七）经口给药（八）其它途径给药 如呼吸道给药、皮肤给药、
18、脊髓腔内给药、小脑延髓池给药、脑内给药、直肠内给药、关节腔内给药等。,（一）皮下注射 注射时以左手拇指和食指提起皮肤，将连有5（1/2）号针头的注射器刺入皮下。皮下注射部位一般狗、猫多在大腿外侧，豚鼠在后大腿的内侧或小腹部；大白鼠可在侧下腹部。兔在背部或耳根部注射。蛙可在脊背部淋巴腔注射。（二）皮内注射 皮内注射时需将注射的局部脱去被毛，消毒后，用左手拇指和食指按住皮肤并使之绷紧，在两指之间，用结核菌素注射器连4(1/2)细针头，紧贴皮肤表层刺入皮内，然后再向上挑起并再稍刺入，即可注射药液，此时可见皮肤表面鼓起一白色小皮丘。,（四）腹腔注射 用大、小白鼠做实验时，以左手抓住动物，使腹部向上，右
19、手将注射针头于左（或右）下腹部刺入皮下，使针头向前推0.51.0cm，再以45度角穿过腹肌，固定针头，缓缓注入药液，,为避免伤及内脏，可使动物处于头低位，使内脏移向上腹。若实验动物为家兔，进针部位为下腹部的腹白线离开1cm处。,（五）静脉注射 1兔：兔耳部血管分布清晰。兔耳中央为动脉，耳外缘为静脉。内缘静脉深不易固定，故不用。外缘静脉表浅易固定，常用。先拔去注射部位的被毛，用手指弹动或轻揉兔耳，使静脉充盈，左手食指和中指夹住静脉的近端，拇指绷紧静脉的远端，无名指及小指垫在下面，右手持注射器连6号针头尽量从静脉的远端刺入，移动拇指于针头上以固定针头，放开食指和中指，将药液注入，然后拔出针头，用手
20、压迫针眼片刻。,2小白鼠和大白鼠 一般采用尾静脉注射，操作时先将动物固定在鼠筒内或扣在烧杯中，使尾巴露出，尾部用4550的温水浸润半分钟或用酒精擦拭使血管扩张，并可使表皮角质软化，以左手拇指和食指捏住鼠尾两侧，使静脉充盈，用中指从下面托起尾巴，以无名指和小指夹住尾巴的末梢，右手持注射器连4(1/2)号细针头，使针头与静脉平行（小于30），从尾下四分之一处（约距尾尖23厘米）处进针，此处皮薄易于刺入，先缓注少量药液，如无阻力，表示针头已进入静脉，可继续注入。注射完毕后把尾部向注射侧弯曲以止血。如需反复注射，应尽可能从末端开始，以后向尾根部方向移动注射。,3狗 狗静脉注射多选前肢内侧皮下头静脉或后
21、肢小隐静脉注射。注射前由助手将动物侧卧，剪去注射部位的被毛，用胶皮带扎紧（或用手抓紧）静脉近端，使血管充盈，从静脉的远端将注射针头平行刺入血管，待有回血后，松开绑带（或两手），缓缓注入药液。,几种动物不同给药途径的常用注射量（毫升）,（六）经口给药多用灌胃法，此法剂量准确，适用于小白鼠、大白鼠、家兔等动物。1小鼠、大鼠（或豚鼠）灌胃时将灌胃针按在注射器上，吸入药液。左手抓住鼠背部及颈部皮肤将动物固定，右手持注射器，将灌胃针插入动物口中，沿咽后壁徐徐插入食道。动物应固定成垂直体位，针插入时应无阻力。若感到阻力或动物挣扎时，应立即停止进针或将针拔出，以兔损伤或穿破食道以及误入气管。一般当灌胃针插入
22、小鼠34cm，大鼠或豚鼠46cm后可将药物注入。常用的灌胃量小鼠为0.2 1ml，大鼠14ml，豚鼠为15ml。,2狗、兔、猫、猴 灌胃时，先将动物固定，再将特制的扩口器放入动物口中，扩口器之宽度可视动物口腔大小而定，如狗的扩口器可用木料制成长方形，长约10 15cm，粗细应适合狗嘴，约23cm，中间粘一小孔，孔的直途为510cm。灌胃时将扩口器放于上述动物上下门牙之后，并用绳将它固定于嘴部，将带有弹性的橡皮导管（如导尿管），经扩口器上的小圆孔插入，沿咽后壁而进入食道，此时应检查导管是否正确插入食道，可将导管外口置于一盛水的烧杯中，如不发生气泡，即认为此导管是在食道中，未误入气管，即可将药液灌
23、入。,给狗、兔灌胃时，可不用扩口器：狗灌胃时，用12号灌胃管，左手抓住狗嘴，右手中指由右嘴角插入，摸到最后一对臼齿后的天然空隙，胃管由此空隙顺食管方向不断插入约20cm，可达胃内，将胃管另一端插入水中，如不出气泡，表示确已进入胃，而没误入气管内，即可灌入。兔灌胃时，将兔固定在木制固定盒内左手虎口卡住并固定好兔嘴，右手取14号细导管，由右侧唇裂避开门齿，将导管慢慢插入，如插管顺利，动物不挣扎，插入约15cm时，即表示插入胃内，将药液注入。各种动物一次灌胃能耐受的最大容积小鼠为0.51.0ml，大鼠47ml，豚鼠为47ml，家兔为80150ml，狗为200500ml。,（七）其它途径给药 1呼吸道
24、给药呈粉尘、气体及蒸气或雾等症状存在药物或毒气，均需要通过动物呼吸道给药。如一般实验时给动物乙醚作吸入麻醉，给动物吸一定量的氨气、二氧化碳等观察呼吸、循环等变化；给动物定期吸入一定量的SO2。锯末烟雾等可造成慢性气管炎动物模型等；特别在毒物学实验中应用更为广泛。2皮肤给药为了鉴定药物或毒物经皮肤的吸收作用、局部作用、致敏作用和光感作用等，均需采用经皮肤给药方法。如家兔和豚鼠常采用背部一定面积的皮肤脱毛后，将一定药液涂在皮肤上，药液经皮肤吸收。,3脊髓腔内给药此法主要用于椎管麻醉或抽取脑脊液。家兔椎管内注射方法：将家兔作自然俯卧式，尽量使其尾向腹侧屈曲，用粗剪将第七腰椎周围背毛剪去，用3%碘酊消
25、毒，干后再用79%酒精将碘酒擦去。在兔背部髌骨脊连线之中点稍下方摸动第七腰椎间隙（第七腰椎与第一骶骨椎之间），插入腰椎穿刺针头。当针到达椎管内时（珠网膜下腔），可见到兔的后肢跳动，即证明穿刺针头已进入椎管。这时不要再向下刺，以兔损伤脊髓。固定好针头，即可将药物注入。,4小脑延髓池给药此种给药都是在动物麻醉情况下进行的。而且常采用大动物如狗等，小动物很少采用。将狗麻醉后，使狗头尽量向胸部屈曲，用左手摸到其第一颈椎上方的凹陷（枕骨大孔），固定位置，右手取7号钝针头（将针头尖端麻钝），由此凹陷的正中线上，顺平行狗的方向，小心地刺入小脑延髓池。当针头正确刺入小脑延髓池时，注射者会感到针头再向前穿时无阻
26、力，同时可以听到很轻的“咔嚓”一声，即表示针头已穿过硬脑膜进入小脑延髓池，而且可抽出清亮的脑脊液，注射药物前，先抽出一些脑脊液，抽取量根据实验需要注入多少药液决定，即注入多少抽取多少，以保持原来脑脊髓腔里的压力。,5脑内给药此法常用于微生物学动物实验，将病原体等接种于被检动物脑内，然后观察接种后的各种变化。小鼠脑内给药时，选套有塑料管、针尖露出2mm深的5(1/2)针头，由鼠正中额部刺入脑内，注入药物或接种物。给豚鼠、兔、狗等进行脑内注射时，须先用穿颅钢针穿透颅骨，再用注射器针头刺入脑部，再徐徐注入被检物。注射速度一定要慢，避免引起颅内压急骤升高。,6直肠内给药此种给药方法常用于动物麻醉。家兔
27、直肠内给药时，取灌肠用的胶皮管或用14号导尿管代替。在胶皮管或导尿管头上涂上凡士林，由助手使兔蹲卧于桌上，以左臂及左腋轻轻按住兔头及前肢，以左手拉住兔尾，露出肛门，并用右手轻握后肢，实验者将橡皮管插入家兔肛门内，浓度约79cm，如为雌性动物，注意勿误插入阴道（肛门紧接尾根）。橡皮管插好后，将注射器与橡皮管套紧，即可灌注药液。,7关节腔内给药此种方法常用于关节炎的动物模型复制。兔给药时，将兔仰卧固定于兔固定台上，剪去关节部被毛，用碘酒或酒精消毒，然后用手从下方和两旁将关节固定，把皮肤稍移向一侧，在膑韧带附着点处上方约0.5厘米处进针。针头从上前方向下后方倾斜刺进，直至针头遇阻力变小，然后针头稍后退，以垂直方向推到关节腔中。针头进入关节腔时，通常可有好象刺破薄膜的感觉，表示针头已进入膝关节腔内，即可注入药液。,
