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1、,柱色谱与纸色谱,目的和要求,初步掌握柱色谱和纸色谱的操作技能。,柱色谱,1.原理,柱色谱：也叫柱层析，将混合物的溶液通过装有吸附剂的层析柱，利用吸附剂对各组分吸附能力的不同，经过洗脱剂的洗脱，将各组分分开的过程。,柱色谱的操作步骤：,装柱加样洗脱和分离 收集各组分,柱色谱,1.原理,柱色谱分离示意图：,柱色谱,2.样品,样品：偶氮苯和对羟基偶氮苯的混合物 洗脱剂（流动相）：石油醚:丙酮=8:2（体积比）吸附剂（固定相）：中性层析氧化铝（200300目）,柱色谱,3.操作步骤(1)装柱,取15cm1.5cm色谱柱一根或用25 mL酸式滴定管作色谱柱，垂直放置，用25 mL锥形瓶作接收瓶。用玻棒
2、将少许脱脂棉放置于干净的色谱柱底部，轻轻塞紧。关闭活塞，向柱中倒入洗脱剂到约柱高的3/4处。打开活塞，控制流速约1滴/s。通过一干燥的玻璃漏斗慢慢加入吸附剂，用木棒轻轻敲打柱身下部，使其填装紧密，装至3/4时停止加吸附剂。待洗脱剂将干时，轻轻放少许脱脂棉到吸附剂的上方。,柱色谱,(2)加样,待洗脱剂即将流干时，立即沿柱内壁加入约10滴已配好的混合物。当此溶液即将全部浸入吸附剂时，再用少量洗脱剂冲洗下沾在内壁和棉花上的有色物质，如此反复23次，至洗净为止。,柱色谱,(3)洗脱分离，样品收集,加样完毕后，即可小心加入洗脱剂（注意一定要待有色物质全部吸附于吸附剂上之后才可以加入大量的洗脱剂）。保持流出速度约1滴/s，随着洗脱剂的洗脱，可以明显看到层析柱上出现两个色带。待第一个色带快流出时，换一干净接受瓶接收这一组分的样品（哪一组分？）。,纸色谱,1.原理与装置,纸色谱原理类似薄层色谱,(a)、(b)、(c)上行纸层展开；(d)下行纸层展开,纸色谱,2.样品,样品：L-谷氨酸；L-异亮氨酸及其混合物 展开剂（流动相）：乙醇:水:冰醋酸=50:10:1（体积比）支持剂（固定相）：新华一号滤纸 显色剂：2%茚三酮乙醇溶液,思考题,1.层析柱中若有气泡或装填不均匀，将给分离造成什么样的结果？如何避免？2.干法装柱和湿法装柱的区别在于哪里？,
